优化流式细胞术测定保存血小板CD62p表达

CD62p阳性率是保存血小板质量监测的重要指标之一。为在静脉全血内血小板CD62 p测定方法的基础上优化建立流式细胞术 (FCM)测定保存血小板表达CD62p的方法 ,在血小板检测标本内加入 0 .1mmol/L潘生丁稳定血小板 ;对TBS溶液进行了改良 ,添加了 1 .1mmol/L的EDTA和 1 0 0 μmol/L潘生丁 ,用以代替PBS ;采用新鲜富含血小板血浆 (FPRP)制备的阴、阳性对照 ;进行方法学评价。结果表明 :加入 0 .1mmol/L潘生丁和 1 .1mmol/L的EDTA可以有效防止实验过程中的血小板人为激活 ;采用新鲜富含血小板血浆 (FPRP)制备的阴、阳性对照既可优化FCM分析方法 ,还可用于检验所购荧光抗体的质量 ,保证实验结果的有效性。采用泛血小板特异性标志物CD61可灵敏特异地识别血小板 ,提高了实验抗干扰能力。制备保存血小板时采用的是专用大号采血针 ,抽血流畅 ,对血小板CD62p表达测定人为影响很小 ,明显优于用注射器采集患者静脉全血的做法。CD62 p测定灵敏度可达 1 % ,制备的标本可稳定 48小时。结论 :利用该流式细胞术可以灵敏而特异地测定保存血小板的CD62P表达率 ;该方法简便易行 ,提高了结果的准确性 。

犬急性冠脉闭塞后血小板白细胞聚集体变化特点实验研究

目的探讨犬急性冠脉闭塞后血小板-白细胞聚集体(PLA)的变化特点。方法选取10~13个月龄的犬15只,抽取犬静脉血体外制备混合性血栓,经介入术将体外制备的混合性血栓置入冠状动脉内建立犬急性冠脉闭塞模型。于术前、闭塞时、闭塞后30 min、1 h、2 h采集比格犬新鲜静脉血,用流式细胞仪测定血小板α-颗粒膜糖蛋白(CD62P)阳性率及血小板-白细胞结合物(PLA)、血小板-单核细胞聚集体(PMA)、血小板-中性粒细胞聚集体(PNA)、血小板-淋巴细胞聚集体(PlyA)占总白细胞T、单核细胞、粒细胞、淋巴细胞的百分率(PLA%、PMA%、PNA%、PlyA%),进行分析。于术前、闭塞后2 h、4 h采集比格犬新鲜动脉血,测定犬血清中肌钙蛋白T(cTnT)的含量。处死动物,心肌组织做病理HE染色检查。结果与术前比较,CD62P阳性率于闭塞时、闭塞后30 min、1 h、2 h均降低(P<0.05),于闭塞后2 h降低最明显(P<0.05);PLA%于闭塞时、闭塞后30 min、1 h、2 h均增高(P<0.05);PMA%于闭塞后2 h增高(P<0.05);PNA%于闭塞后30 min、1 h、2 h均增高(P<0.05);cTnT于闭塞后2 h未见明显变化,闭塞后4 h增高(P<0.05)。HE染色结果示心肌纤维排列整齐,未见心肌灶状坏死及炎细胞浸润。结论犬处于急性冠脉闭塞时,于闭塞后30 min、1 h、2 h,PLA水平显著增高,且提前于cTnT出现变化。

海藻糖对4℃体外保存血小板的影响

目的探讨在M-Sol中添加海藻糖对体外4℃保存血小板的影响。方法随机选取7袋ABO同型浓缩血小板汇集后,根据保存温度、保存介质和海藻糖浓度的不同均分成7组,分别为22℃+PRP组、PRP组、M-Sol+PRP组、M-Sol+PRP+1 g/L海藻糖组、M-Sol+PRP+5 g/L海藻糖组、M-Sol+PRP+15 g/L海藻糖组和M-Sol+PRP+25 g/L海藻糖组。PRP组及M-Sol保存各组均置于4℃保存,分别于保存d1、3、5、7取样检测Plt、PDW、MPV、最大聚集度、CD62p阳性率和GLU及LAC浓度,并计算7 d内GLU及LAC浓度变化量。结果随着保存时间的延长,各组Plt均下降,且同时间点各组间比较无统计学差异(P>0.05),各组PDW、MPV均有升高,保存到d7时,以M-Sol+PRP+5 g/L海藻糖组的PDW 10.22±0.43(fL)、MPV 8.74±0.40(fL)最低,与22℃+PRP组比较有统计学差异(P<0.05)。7 d内的GLU及LAC浓度变化量均以M-Sol+PRP+5 g/L海藻糖组最低,其7 d内的GLU浓度变化量与22℃+PRP组比较有统计学差异(P<0.05),7 d内的LAC浓度变化量与PRP组比较无统计学差异(P>0.05)。保存期间,各组最大聚集度逐渐下降,保存d7时,除PRP组外,M-Sol+PRP+5 g/L海藻糖组最大聚集度最高(27.29±6.62),差异与22℃+PRP组比较有统计学意义(P<0.05)。保存d7时,M-Sol+PRP+5 g/L海藻糖组的CD62p阳性率最低(15.46±2.46),与其他组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论M-Sol中添加适宜浓度的海藻糖可抑制4℃血小板的活化,降低血小板的储存损伤。