慢性丙型肝炎患者CD14^(+)单核细胞和CD163^(+)巨噬细胞的表达及其与肝纤维化严重程度的关系

目的探讨慢性丙型肝炎患者CD14^(+)单核细胞和CD163^(+)巨噬细胞的表达及其与肝纤维化严重程度的关系。方法选取2018年4月—2022年11月期间公安县人民医院诊治的慢性丙型肝炎患者83例,同期健康人64例,比较两组临床特征、肝组织中CD163表达、血清CD163浓度、CD14^(+)细胞比例以及表达不同种类细胞因子的CD14^(+)细胞比例。结果慢性丙型肝炎组(n=82)ALT水平和AST水平分别为(84.6±9.1)U/L和(69.3±7.2)U/L,显著高于健康对照组(n=64)的(28.4±1.7)U/L和(22.5±6.9)U/L(P<0.05);慢性丙型肝炎患者中F<2者CD163^(+)细胞数量、血清CD163浓度和CD14^(+)细胞比例分别为38.2±4.7、(73.6±2.1)μg/L和(73.7±3.2)%,显著高于健康对照组的12.5±1.3、(50.1±2.6)μg/L和(61.0±8.4)%,F≥2患者CD163^(+)细胞数量、血清CD163浓度和CD14^(+)细胞比例分别为74.9±8.0、(95.4±9.8)μg/L和(79.2±5.5)%,显著高于健康对照组和F<2患者。F<2慢性丙型肝炎患者表达IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-6、IL-8和TNF-α的CD14^(+)细胞比例分别为(4.2±1.2)%、(3.8±1.1)%、(3.8±1.0)%、(3.7±1.3)%、(4.0±1.4)%和(6.7±3.6)%,显著高于健康对照组的(0.9±0.1)%、(1.1±0.2)%、(1.8±0.4)%、(1.6±0.6)%、(1.7±0.7)%和(4.6±2.1)%,F≥2患者表达IL-2、IFN-γ、IL-8和TNF-α的CD14^(+)细胞比例分别为(2.2±0.8)%、(2.1±0.5)%、(5.6±2.0)%和(6.9±3.2)%,显著高于健康对照组,表达IL-8的CD14^(+)细胞比例为(5.6±2.0)%,显著高于F<2患者。结论CD14^(+)单核细胞和CD163^(+)巨噬细胞参与了慢性丙型肝炎患者肝纤维化的进程。

IL-1β通过激活ERK1/2信号通路抑制人脐带间充质干细胞CD200表达抑制巨噬细胞M2极化

目的探究白细胞介素1β(IL-1β)调控人脐带间充质干细胞CD200表达及其对巨噬细胞极化的影响及作用机制。方法无血清培养基分离培养获得人脐带间充质干细胞(hUC-MSC),形态学观察及流式细胞术检测CD73、CD90、CD105、CD14、CD34、CD45、人类白细胞抗原DR(HLA-DR)的表达,确定间充质干细胞属性;20 ng/mL IL-1β处理hUC-MSC 24 h,流式细胞术检测CD200阳性细胞率,实时定量PCR和Western blot法检测CD200 mRNA和蛋白表达水平;佛波酯(PMA)诱导THP-1巨噬细胞活化,并与IL-1β处理感染CD200过表达慢病毒的hUC-MSC共培养,流式细胞术检测CD11c和CD206阳性细胞比例;IL-1β联合细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)特异性抑制剂PD98059处理hUC-MSC,Western blot法检测细胞丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号分子与CD200的表达。结果IL-1β显著下调hUC-MSC CD200蛋白表达与CD200阳性细胞率;过表达CD200显著上调hUC-MSC CD200表达,且CD200过表达hUC-MSC提高巨噬细胞CD206阳性细胞比率;IL-1β激活hUC-MSC的ERK1/2信号通路,PD98059上调IL-1β处理后hUC-MSC中CD200的蛋白表达。结论IL-1β通过激活ERK1/2信号通路抑制CD200的表达,进而抑制hUC-MSC对巨噬细胞向M2型极化的促进作用。

小鼠心肌梗死进程中巨噬细胞CD59和P2X7表达的动态变化

目的探讨小鼠心肌梗死进程中巨噬细胞亚群的动态变化与CD59、P2X7表达的动态变化。方法将成年雄性C57BL/6J小鼠36只随机分为对照组(不做任何处理,6只)和心肌梗死组(30只)。通过冠状动脉左前降支结扎建立小鼠急性心肌梗死模型,心肌梗死组30只小鼠又随机分为A、B、C、D、E组,分别在心肌梗死后1、3、5、7、14 d取材。收取小鼠的外周血和心脏组织,采用流式细胞术检测巨噬细胞亚群的动态变化与CD59和P2X7的表达情况。结果心肌梗死后1、3 d外周血中单核细胞数量均高于对照组[(9.5±1.7)、(10.3±3.7)×10^(4)/ml比(3.2±3.1)×10^(4)/ml](均P<0.05)。心肌梗死后1、3、5 d心脏组织白细胞计数、巨噬细胞计数均高于对照组(均P<0.05)。心脏组织中Ly6C^(high)巨噬细胞计数在心肌梗死后3 d达到高峰,而Ly6C^(low)亚群在心肌梗死后5 d达到高峰,均高于对照组(均P<0.05)。心肌梗死后1 d P2X7^(-)CD59^(-)巨噬细胞占Ly6C^(high)巨噬细胞百分比高于对照组,而P2X7^(+)CD59^(+)巨噬细胞占比低于对照组(均P<0.05)。心肌梗死后1、3、5 d P2X7^(+)CD59^(+)巨噬细胞占Ly6C^(low)巨噬细胞百分比均低于对照组,而P2X7^(-)CD59^(+)巨噬细胞占比均高于对照组(均P<0.05)。结论在小鼠急性心肌梗死的不同阶段,心脏组织巨噬细胞的亚群呈现动态变化,同时伴随CD59和P2X7表达的动态变化。

达格列净对ApoE^(-/-)小鼠单核巨噬细胞系统及动脉粥样硬化的影响

目的:研究达格列净对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块的影响,探讨其抗AS作用的可能机制。方法:16只8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠高脂饮食喂养8周形成AS模型后,随机分为对照组和实验组,每组8只,实验组予达格列净干预,对照组予同等剂量的生理盐水,两组干预4周后取材。油红O染色检测主动脉及主动脉瓣AS斑块面积比例;流式细胞术分析循环中单核细胞亚群的比例(Ly6G-CD11b+Ly6C hi和Ly6G-CD11b+Ly6C lo);免疫荧光染色和共聚焦显微镜成像检测斑块内的巨噬细胞和增殖的巨噬细胞(F4/80和Ki67双阳性细胞);酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平。结果:实验组与对照组比较有降低主动脉及主动脉瓣斑块负荷的作用,降低循环中Ly6C^(hi)单核细胞比例,降低斑块内增殖巨噬细胞比例,降低LDL-C水平,且具有升高HDL-C作用。结论:达格列净可减轻ApoE^(-/-)小鼠AS负荷的作用,可能与调节单核细胞亚群和血脂代谢相关。

依达拉奉对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用

目的 探讨依达拉奉(EDA)对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用。方法 以脂多糖诱导RAW264.7细胞,复制炎性细胞模型。采用CCK-8法检测EDA的细胞毒性作用。实验分为空白组(等体积培养基)、模型组(等体积培养基)、给药组(40μg/mL EDA)。采用Griess法检测细胞中一氧化氮(NO)水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞中前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、活性氧(ROS)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法测定细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平;采用Western blot法检测细胞中JAK2/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路相关蛋白JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3,IL-1β,IL-18的蛋白表达水平。结果 与0μg/mL比较,20,40,80,160μg/mL EDA处理下细胞存活率无显著变化(P <0.05)。与模型组比较,给药组细胞中NO,PGE2,IL-1β,IL-18,TNF-α,ROS水平均显著降低(P <0.05);IL-1β与IL-18 mRNA及蛋白表达水平和p-JAK2/JAK2与p-STAT3/STAT3均显著降低(P <0.05)。结论 EDA可能通过抑制JAK2/STAT3通路的激活而抑制RAW264.7细胞的炎性反应。

急性脑梗死患者入院时Hcy、HMGB1、TLR4水平与单核巨噬细胞极化的相关性

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者入院时同型半胱氨酸(Hcy)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)水平与单核巨噬细胞极化的相关性。方法选择2020年8月至2022年8月该院收治的107例ACI患者为病例组,另选取同期体检健康者50例为对照组,比较2组入院时血清Hcy、HMGB1、TLR4水平,比较2组单核巨噬细胞极化情况[M1型细胞比例、M2型细胞比例、M1/M2比值、M1型极化标志物(白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α)、M2型极化标志物(白细胞介素-10、转化生长因子-β)],分析ACI患者Hcy、HMGB1、TLR4水平与单核巨噬细胞极化的关系,分析ACI患者Hcy、HMGB1、TLR4水平与ACI患者预后的关系。根据ACI患者预后情况,将患者分为预后良好组和预后不良组,比较其血清Hcy、HMGB1、TLR4水平。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析Hcy、HMGB1、TLR4对ACI预后的预测效能。结果与对照组比较,病例组血清Hcy、HMGB1、TLR4水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,病例组M1型细胞比例、M1/M2比值、白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α水平明显升高(P<0.05),白细胞介素-10、转化生长因子-β水平明显降低(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,ACI患者血清Hcy、HMGB1、TLR4水平与M1型细胞比例、M1/M2比值、白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α水平呈正相关(P<0.05),与白细胞介素-10、转化生长因子-β水平呈负相关(P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组血清Hcy、HMGB1、TLR4水平明显升高(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,Hcy、HMGB1、TLR4联合预测ACI预后的效能较高,其曲线下面积、灵敏度、特异度依次为0.840、77.80%、80.00%。结论Hcy、HMGB1、TLR4在ACI患者外周血中呈高表达,其水平与单核巨噬细胞极化及预后关系密切,有望成为ACI临床诊治的生物标志物。

CD38经TFEB介导促进溶酶体再生而调节巨噬细胞胆固醇外流

目的:探讨CD38对巨噬细胞溶酶体再生及胆固醇外流的影响。方法:以低密度脂蛋白(LDL)受体敲除(LDLr^(-/-))小鼠的骨髓源性巨噬细胞为细胞模型。采用活细胞成像系统观察烟酸腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAADP)对巨噬细胞溶酶体数量的影响;利用ELISA检测巨噬细胞内NAADP的水平;细胞经NA处理后,利用RT-q PCR检测CD38 m RNA表达,利用Western blot检测CD38蛋白表达和转录因子EB(TFEB)磷酸化水平;利用激光共聚焦技术观察CD38/NAADP信号通路对溶酶体数量和胆固醇外流的影响。结果:NAADP可显著增加巨噬细胞中溶酶体的数量(P<0.05),这种效应可被NAADP拮抗剂NED-19、Ca^(2+)螯合剂BAPTA及钙调磷酸酶抑制剂Cs A明显抑制(P<0.05);CD38可明显促进巨噬细胞中NAADP的合成(P<0.05);NAADP合成底物NA可明显促进CD38 m RNA和蛋白表达(P<0.05);NA还可显著降低TFEB的磷酸化水平,且这一效应也可被NED-19、BAPTA和Cs A明显抑制(P<0.05);阻断CD38/NAADP信号通路可明显抑制NA诱导的溶酶体数量增加和溶酶体游离胆固醇及胞质胆固醇酯的外流(P<0.05);在LDLr/CD38双基因敲除巨噬细胞中,NA诱导的溶酶体数量增加和溶酶体游离胆固醇及胞质胆固醇酯的外流效应消失,CD38基因回补后,这一效应即可恢复(P<0.05)。结论:CD38可经TFEB介导,触发巨噬细胞溶酶体再生,进而促进巨噬细胞溶酶体游离胆固醇和胞质中胆固醇酯的外流。

由mtDNA清除THP-1细胞构建的人单核/巨噬细胞系Rho0细胞周期、凋亡、吞噬功能、炎症因子表达变化

目的 观察由线粒体DNA(mtDNA)清除人单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)构建的人单核/巨噬细胞系Rho0细胞周期、凋亡、吞噬功能、炎症因子表达变化。方法 取THP-1细胞,使用溴化乙锭(EB)清除细胞中mtDNA,构建新的人单核/巨噬细胞Rho0。取Rho0细胞,分别给予1 mg/mL LPS或溶媒刺激24 h(计为Rho0-LPS组、Rho0-溶媒组);另取未经EB处理的THP-1细胞,分别给予1 mg/mL LPS或溶媒刺激24 h(计为Control-LPS组、Control-溶媒组);采用流式细胞术PI染色检测各组细胞周期,流式细胞术Annexin V-FITC/PI法测算各组凋亡细胞数,Red-Zymosan染料吞噬实验评估各组细胞吞噬功能(平均荧光强度)。取Rho0细胞(Rho0组)和取未经EB处理的THP-1细胞(Control组),采用RT-qPCR法检测炎症因子(IL-1α、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 mRNA)。结果 与Control-溶媒组比较,Rho0-溶媒组G0~G1期、S期、G2/M期比例降低及细胞凋亡数增加和平均荧光强度增强,Control-LPS组细胞凋亡数增加和平均荧光强度增强(P均<0.05);与Rho0-溶媒组比较,Rho0-LPS组G0~G1期比例降低及细胞凋亡数增加(P均<0.05)。与Control组比较,Rho0组IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-10 mRNA表达升高(P均<0.05)。结论 清除mtDNA可导致Rho0细胞周期停滞,促进细胞凋亡,增强细胞吞噬功能及促炎功能。

M2型巨噬细胞抑制CD8^(+)T细胞促进食管癌细胞恶性生物行为

目的探讨M2型巨噬细胞通过抑制CD8^(+)T细胞的抗肿瘤能力参与食管癌的恶性生物学行为的作用。方法利用佛波酯(PMA)联合白细胞介素4(IL-4)/IL-13将人单核细胞白血病细胞(THP-1)诱导为M2型巨噬细胞并用实时定量PCR检测相关炎性因子。运用磁珠分选法分选健康志愿者外周血CD8^(+)T细胞,用流式细胞术验证分选纯度。构建CD8^(+)T细胞与食管鳞癌细胞的非接触性共培养体系(CD8^(+)T细胞),和构建M2型巨噬细胞、CD8^(+)T细胞与食管鳞癌细胞的非接触性共培养体系(M2型巨噬细胞联合CD8^(+)T细胞)。平板克隆实验和CCK-8细胞毒性实验检测各组肿瘤细胞增殖能力。Transwell^(TM)实验检测各组肿瘤细胞侵袭和迁移能力。流式细胞术检测并分析各组肿瘤细胞的凋亡情况。运用GraphPadPrism9.5软件进行统计学分析和制图。结果诱导后巨噬细胞IL-10和精氨酸酶1(Arg1)表达上调,IL-12和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达下降,具有M2表型巨噬细胞特征。磁珠分选法成功的分选出CD8^(+)T细胞,其阳性率>90%。食管鳞癌细胞与CD8^(+)T细胞非接触性共培养组的增殖、侵袭、迁移和抗凋亡能力显著低于单独癌细胞组;而食管鳞癌细胞与M2型巨噬细胞条件培养基预处理CD8^(+)T细胞共培养后,其增殖、侵袭、迁移和抗凋亡能力与食管鳞癌和CD8^(+)T细胞共培养组相比显著增强。结论M2型巨噬细胞通过抑制CD8^(+)T细胞的抗肿瘤能力促进食管鳞癌细胞的增殖、侵袭、迁移和抗凋亡。

CXCL8通过增加M2型巨噬细胞浸润及抑制CD8^(+)T细胞浸润促进结直肠癌免疫抑制微环境的形成

目的探讨CXC趋化因子配体8(CXCL8)对结直肠癌(CRC)微环境的免疫调节作用。方法使用过表达CXCL8的鼠源CRC细胞株CT26细胞建立BALB/c小鼠皮下移植瘤模型,监测肿瘤生长情况,成瘤三周后剥离肿瘤组织并取出小鼠脾脏,一方面制备肿瘤单细胞悬液,流式细胞术检测肿瘤微环境中M2型巨噬细胞及CD8^(+)T细胞的浸润情况;另一方面制备脾脏单细胞悬液,分选脾脏CD8^(+)T细胞,在体外将T细胞与过表达CXCL8的CT26细胞共培养,细胞毒性实验检测T细胞杀伤能力。结果过表达CXCL8促进小鼠CRC移植瘤生长;过表达CXCL8的CRC组织中M2型巨噬细胞浸润增加、CD8^(+)T细胞浸润减少;过表达CXCL8的小鼠CRC细胞并不影响CD8^(+)T细胞体外杀伤能力。结论CXCL8过表达CRC细胞通过增加M2型巨噬细胞浸润及抑制CD8^(+)T细胞浸润促进CRC免疫抑制微环境的形成。

佛波酯诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞的条件与机制研究进展

人类白血病单核细胞系THP-1细胞,已被广泛运用于研究单核细胞/巨噬细胞的生物学功能、作用机制和巨噬细胞参与炎症性疾病及肿瘤微环境的模型中。然而,影响THP-1分化为巨噬细胞的因素较多,如佛波酯(PMA)浓度、戒断期长度、PMA刺激持续时间、细胞的基线状态、细胞密度以及环境氧张力等。优化PMA诱导THP-1的分化方案不仅可以助力于实验研究,还可减少实验室之间的结果差异性。本综述旨在总结PMA诱导THP-1单核细胞分化条件的影响因素、优化方案,探讨其作用机制,为单核细胞分化为巨噬细胞的研究提供参考。

单核/巨噬细胞及EBV活化在药疹患者中的免疫状况初探

目的明确不同类型药疹(CDR)单核/巨噬细胞及其相关受体表达情况,明确EBV活化对药疹的影响。方法收集药疹患者和健康对照组,根据其临床表现分为发疹性药疹(MPE)组、重症多形红斑型药疹(SJS)/中毒性大疱表皮松解症(TEN)组、红皮病型药疹(EDE)组和对照组,分析血常规、血生化指标,及单核/巨噬细胞及其受体表达情况。再通过EBV刺激药疹患者及健康对照组外周血单个核细胞,根据EBV是否活化分析单核/巨噬细胞及其受体表达情况,对比分析各组人群的各项检测结果差异。结果本研究发现CDR患者出现巨噬细胞降低,HLA-DR升高;在EDE患者中嗜酸性粒细胞升高,M2/M1偏移,MPE和SJS/TEN患者出现ALT升高,M2/M1轻度偏移甚至不偏移。EBV活化后,CDR患者单核细胞和ALT发生升高,巨噬细胞轻度升高以及M2/M1偏移。结论①HLA-DR升高是药物致敏的评估指标之一;②不同药疹类型其发病机制不同,M2/M1偏移可作为药疹类型评价指标;③单核细胞及ALT升高应高度警惕EBV活化,M2/M1发生偏移是EBV活化的风险指标。

结直肠癌化疗前后循环单核细胞/巨噬细胞亚群变化分析

目的通过分析外周血中单核细胞/巨噬细胞亚群的表型和占比,探究结直肠癌患者中循环单核细胞/巨噬细胞亚群的分布变化,以及化疗对单核细胞/巨噬细胞亚群分布的影响,并探究中间型单核细胞和M2型巨噬细胞评分与肿瘤进展和预后的相关性。方法收集2023年4—8月于北京朝阳区三环肿瘤医院就诊的18例结直肠癌患者(包括12例初治患者和6例后线接受化疗的患者,结直肠癌组)及5例健康志愿者(健康对照组)的外周血样本。分析健康志愿者、化疗前结直肠癌患者和化疗后结直肠癌患者循环单核细胞/巨噬细胞亚群的分布情况。使用标志基因表征肿瘤组织中中间型单核细胞和M2型巨噬细胞,并计算免疫细胞标志基因评分与肿瘤进展的关系。利用多因素回归分析和生存分析探究中间型单核细胞和M2型巨噬细胞评分与患者预后的相关性。结果与健康对照组相比,结直肠癌组患者外周血中M2型巨噬细胞占比显著增加(P<0.05)。相比结直肠癌Ⅲ期组患者,结直肠癌Ⅳ期组患者的中间型单核细胞的比例显著增加(P<0.05),且化疗显著增加了结直肠癌患者循环中间型单核细胞的频率(P<0.05)。中间型单核细胞和M2型巨噬细胞评分升高与患者肿瘤进展呈现相关。生存分析和多因素Cox回归分析显示,中间型单核细胞和M2型巨噬细胞高评分组的结直肠癌患者总生存时间缩短,提示这些评分可以作为结直肠癌患者独立预后因素。结论流式细胞术揭示结直肠癌患者循环M2型巨噬细胞比例显著增加,且化疗能够提升中间型单核细胞的比例。多因素回归分析和生存分析结果表明,中间型单核细胞和M2型巨噬细胞的评分与结直肠癌患者的进展和预后密切相关。

单核–巨噬细胞调控脂质代谢的研究进展

脂质代谢是一个复杂的生理过程,涉及营养调节、激素调节和稳态。脂质代谢紊乱和脂质代谢相关疾病给社会和个人带来巨大的负担,然而这些疾病的具体发病机制尚未明确。免疫代谢领域的发展,揭示了慢性代谢性疾病中复杂的免疫学机制,为这些疾病的治疗开创了很多潜在的新型治疗靶点。单核–巨噬细胞是目前免疫代谢领域中涉及研究最广泛的免疫细胞,其在脂质稳态和脂质代谢紊乱相关疾病中都发挥着重要作用。本文总结了单核–巨噬细胞在调控脂质代谢和促进脂质代谢紊乱中的机制,旨在寻找全新的脂质代谢相关疾病的治疗靶点。

趋化因子CCL3和巨噬细胞CD68+、CD163+在老年结肠癌中的表达及临床意义

结肠癌是常见消化道恶性肿瘤之一,根据WHO发布的《2020年世界癌症进展报告》,全球每年结肠癌发病率位于第3位,致死率位于第2位,老年人更是结肠癌的高发人群[1]。近年来,随着外科手术治疗的进步,靶向治疗、免疫治疗的引入以及个体化临床治疗的广泛应用,结肠癌的治疗取得了很大的进步。但是,由于老年病人身体状况较差,对放化疗的敏感性及耐受性较低,预后不良风险增高[2]。因此,探讨老年结肠癌病人肿瘤进展相关指标,及早预测病人预后,并优化治疗方案尤为必要。

左、右归丸对去卵巢大鼠骨髓单核/巨噬细胞破骨分化的影响

目的基于AMPK/mTOR信号通路研究左、右归丸对去卵巢大鼠骨髓单核/巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage,BMMs)破骨分化的作用及机制。方法将60只雌性大鼠随机分为6组,分别为空白组(KB)、假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、补佳乐组(BJL)、右归丸组(YGW)和左归丸组(ZGW)。KB组不做处置,SHAM组模拟卵巢切除手术过程,后4组均将双侧卵巢切除。各组分别灌胃蒸馏水(SHAM、OVX)、补佳乐(BJL)、右归丸(YGW)和左归丸(ZGW)。12周后取大鼠股骨和胫骨骨髓,用差时贴壁法获得大鼠BMMs并进行破骨分化诱导。用抗酒石酸酸性磷酸酶活性检测试剂盒检测TRAP活性;qrt-PCR法检测TRAP基因的表达;Western blotting法检测TRAP、RANKL、AMPKɑ、p-AMPKɑ、mTORC1、p-mTORC1蛋白的表达。结果左、右归丸能显著降低去卵巢大鼠BMMs破骨诱导后TRAP活性,降低TRAP基因和蛋白的表达,降低与RANK结合的RANKL蛋白的表达。与KB组比较,OVX组AMPKɑ蛋白磷酸化水平降低,mTORC1蛋白磷酸化水平升高;3个用药组皆能对抗上述改变,其中左归丸优于右归丸。结论左、右归丸均能通过AMPK/mTOR信号通路抑制去卵巢大鼠BMMs的破骨分化。

胃癌组织中肿瘤相关巨噬细胞CD68、PD-L1表达与胃癌预后情况分析

目的 探究胃癌微环境中肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages, TAMs)白细胞分化抗原68(cluster of differentiation68, CD 68)CD68、程序性死亡受体-配体1(programmed cell death-ligand 1, PD-L1)表达及对胃癌患者临床预后的影响。方法 收集2019年7—12月东莞市人民医院36例胃癌患者的病理标本和临床信息,采用免疫荧光法检测癌组织和癌旁组织中CD68和PD-L1表达,并进行统计分析。结果 胃癌组织中CD68阳性细胞平均值为(143±63)个,高于癌旁组织(81±35)个,差异有统计学意义(t=-12.713,P<0.05);胃癌组织中CD68和PD-L1双阳性细胞平均值为(56±31)个,高于癌旁组织(39±23)个,差异有统计学意义(t=-11.928,P<0.05);CD68高表达患者平均生存时间为26个月,总生存率(overall survival rate,OS)为27.8%,显著低于CD68低表达患者平均生存时间36个月,OS为63.2%,差异有统计学意义(P<0.05);TAMs PD-L1高表达患者平均生存时间为25个月,OS为33.3%,显著低于TAMs PD-L1低表达患者平均生存时间37个月,OS为53.9%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CD68、PD-L1在胃癌组织中高表达,CD68、PD-L1高表达患者平均生存时间缩短,OS显著降低,预后更差。

感染LM小鼠巨噬细胞外泌体的转录组测序及差异表达miRNA特征分析

[目的]分离和鉴定感染单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)小鼠巨噬细胞外泌体(Exosomes,Exos)并分析其miRNA表达谱,为揭示巨噬细胞Exos miRNA在LM感染中的调控机制奠定研究基础。[方法]以未感染LM的巨噬细胞为对照组,感染LM的巨噬细胞为试验组,采用超速离心法分离提取巨噬细胞上清中的Exos,通过透射电镜、纳米颗粒追踪技术和Western blot对Exos形态、大小及表面标志分子特征进行鉴定。利用Illumina SE50测序平台对2组巨噬细胞Exos miRNA进行Small RNA-seq测序,筛选出显著差异表达的miRNA。使用Targetscan、miRDB和miRWalk数据库对差异表达miRNA靶基因进行预测,并对差异miRNA靶基因进行GO和KEGG-Pathway功能富集分析。利用Cytoscape软件绘制前20位Hub基因的miRNA-mRNA调控网络图。[结果]Exos直径为30~150 nm,具有典型的双层膜结构,Exos表面标志分子CD9、CD63和TSG101呈阳性表达。高通量测序结果显示,与对照组相比,试验组Exos中共筛选出9个显著差异表达的miRNA,其中显著下调基因8个(mmu-miR-7a-5p、mmu-miR-365-2-5p、mmu-miR-122-5p、mmu-miR-122b-3p、mmu-let-7i-5p、mmu-miR-151-3p、mmu-miR-182-5p和mmu-miR-1198-5p),显著上调基因1个(mmu-miR-192-5p),共预测miRNA调控靶基因1064个。GO富集分析结果显示,差异miRNA靶基因主要富集在轴突形成、细胞连接组装、肌动蛋白结合和金属离子跨膜转运等过程;KEGG分析显示,靶基因显著富集在cGMP-PKG信号通路和FcγR介导的吞噬作用通路。[结论]感染LM的小鼠巨噬细胞Exos miRNA表达谱发生了显著改变,其调控的潜在靶基因主要参与感染和免疫反应等信号通路。

巨噬细胞在原发性胆汁性胆管炎发生发展中的作用

原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种持续的炎症性自身免疫性肝病,以肝内小胆管炎症损伤和胆汁淤积为主要特征。目前,PBC的确切发病机制尚不清楚,但一致认为PBC是多种因素协同作用的结果。而在与PBC相关的免疫和炎症级联反应中,巨噬细胞作为必不可少的免疫细胞出现,积极参与对胆管上皮细胞的损伤。本文介绍了巨噬细胞在PBC中的来源定位及异质性变化,综述了巨噬细胞在PBC发病机制中的潜在作用。

外周血CD4^(+)/CD8^(+)、D-二聚体水平与EB病毒感染相关噬血细胞综合征预后的关系探究

目的探究外周血CD4^(+)/CD8^(+)、D-二聚体(D-D)水平与EB病毒感染相关噬血细胞综合征(EBV-HLH)预后的关系。方法选取2021年9月—2023年8月首都医科大学附属北京友谊医院EBV-HLH患者90例设为观察组,同期另选取该院90例传染性单核细胞增多症(IM)患者设为对照组,比较两组外周血CD4^(+)/CD8^(+)、D-D水平,分析EBV-HLH患者外周血CD4^(+)/CD8^(+)、D-D水平与EBV-DNA载量的相关性;比较外周血不同CD4^(+)/CD8^(+)、D-D水平EBV-HLH患者3个月内预后情况,评价外周血CD4^(+)/CD8^(+)、D-D水平对EBV-HLH死亡风险的影响,分析外周血CD4^(+)/CD8^(+)、D-D水平的交互关系。结果观察组外周血CD4^(+)/CD8^(+)低于对照组,D-D水平高于对照组(P<0.05);EBV-HLH患者外周血CD4^(+)/CD8^(+)与EBV-DNA载量呈负相关(P<0.05),D-D水平与EBV-DNA载量呈正相关(P<0.05);外周血CD4^(+)/CD8^(+)高水平患者3个月内死亡率低于低水平患者,D-D高水平患者3个月内死亡率高于低水平患者(P<0.05);EBV-HLH患者外周血CD4^(+)/CD8^(+)低水平时,死亡风险是高水平的6.125倍;D-D高水平时,死亡风险是低水平的14.348倍,且CD4^(+)/CD8^(+)、D-D水平对该病患者死亡存在协同作用。结论EBV-HLH患者外周血CD4^(+)/CD8^(+)水平下降、D-D水平升高,且二者对该病患者死亡存在协同作用,检测其水平,有助于评估病情及预测预后风险。