CD69^+/NKG2D^+比值在保健食品评价中应用

目的研究小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)细胞分化抗原CD69+/NKG2D+检测在保健食品免疫调节作用评价中的应用。方法以左旋咪唑25mg(kg·bw)连续灌胃3d设立左旋咪唑阳性对照;进行小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69+/NKG2D+检测和脾NK细胞活性测定试验,观察0.83,1.67g/(kg·bw)剂量组蛋白粉对小鼠NK细胞免疫功能的影响。结果与阴性对照组比较,左旋咪唑对照组和0.83,1.67g/(kg·bw)剂量组蛋白粉剂量组外周血NK细胞CD69-/NKG2D+、CD69+/NKG2D+比值以及脾NK细胞活性均明显升高。结论外周血NK细胞CD69+/NKG2D+检测与传统的NK细胞免疫检测结果有较好一致性,且方法敏感性较好,在保健食品免疫调节功能评价中有较好应用价值。

可溶性MICA对外周血淋巴细胞受体NKG2D、CD69表达的影响

为了分析可溶性MHCⅠ类相关分子A(sM ICA)对淋巴细胞活化性受体NKG 2D及早期活化标志性受体CD 69表达的影响,从U 937细胞中经RT-PCR扩增出sM ICA的cDNA片段,经酶切后插入原核表达载体pQE 3.1,并命名为pQEM ICA。IPTG大量诱导表达后溶解包涵体,所得6个H is重组蛋白经N i+树脂纯化、稀释复性,最后与外周血单个核细胞作用。结果发现sM ICA蛋白可抑制NKG 2D的表达,并通过NKG 2D的下调而抑制CD 69的表达。该研究不仅为探讨sM ICA分子对淋巴细胞特别是NK细胞生物学特性影的研究响奠定基础,也为探讨M ICA介导的肿瘤免疫逃逸机制提供工具。

1565nm非剥脱点阵激光联合侧柏叶酊对斑秃小鼠IFN-γ信号及NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞比例的影响

目的研究1565 nm非剥脱点阵激光联合侧柏叶酊干预对斑秃小鼠干扰素-γ(IFN-γ)信号与NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞的影响。方法将50只雄性C3H/HeJ小鼠随机分为正常组、模型组、点阵激光组、侧柏叶酊组及点阵激光联合侧柏叶酊组,每组10只。除正常组外,其余组小鼠均采用环磷酰胺诱导斑秃。在造模期间,点阵激光组给予1565 nm非剥脱点阵激光治疗;侧柏叶酊组给予5%侧柏叶酊在脱毛部位轻微按摩2~3 min;点阵激光联合侧柏叶酊组给予1565 nm非剥脱点阵激光及5%侧柏叶酊按摩治疗。观察各组小鼠皮肤状态和毛发生长情况;实验第7天取血,流式细胞术检测血液中NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞比例,Western blot法检测毛囊组织中IFN-γ及其受体IFNGR1和IFNGR2表达情况。结果模型组小鼠斑秃部位的毛发出现断裂、变细,裸露皮肤表面出现黑点;各干预组斑秃情况均较模型组轻,其中点阵激光联合侧柏叶酊组最轻。模型组血液中NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞比例和毛囊组织中IFN-γ、IFNGR1、IFNGR2蛋白相对表达量均明显高于正常组(P均<0.05)。点阵激光组、侧柏叶酊组仅毛囊组织中IFN-γ蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05),点阵激光联合侧柏叶酊组血液中NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞比例和毛囊组织中IFN-γ、IFNGR1、IFNGR2蛋白相对表达量均明显低于模型组及点阵激光组、侧柏叶酊组(P均<0.05)。结论1565 nm非剥脱点阵激光联合侧柏叶酊外用可通过抑制IFN-γ信号通路和NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞的积累,从而有效改善斑秃。

NOD鼠体内CD_4^+NKG2D^+T细胞与CD_8^+T细胞间关系

目的探讨NOD鼠体内CD_4^+NKG2D^+T细胞与CD_8^+T细胞间关系。方法动态监测NOD鼠外周血中CD_4^+NKG2D^+T及CD8+NKG2D^+T细胞在不同周龄频率。利用IGRP206-214特异性CTL清除的NOD鼠,对其外周血中CD_4^+NKG2D+/CD_4^+T及CD8+NKG2D+/CD_8^+T细胞频率进行分析。将磁珠分选所得CD_4^+NKG2D^+T细胞分别与经CFSE标记的纯CD_4^+NKG2D-T细胞、CD_8^+T细胞共培养4 d,检测体系中CD_4^+NKG2D-T细胞、CD_8^+T细胞CFSE的荧光强度变化。结果 NOD鼠外周血CD_4^+NKG2D+/CD_4^+T及CD8+NKG2D+/CD_8^+T细胞频率均随其1型糖尿病疾病进程发展逐渐升高,且二者之间呈正相关。IGRP206-214特异性CTL清除的NOD鼠,外周血中CD_4^+NKG2D+/CD_4^+T细胞频率随CD8+NKG2D+/CD_8^+T细胞频率降低显著下降。与单独培养的CD_4^+NKG2D-T细胞相比,加入CD_4^+NKG2D^+T细胞的培养体系中,CD_4^+NKG2D-T细胞增殖加快。但CD_4^+NKG2D^+T细胞对CD_8^+T增殖作用不明显。结论 NOD鼠体内存在着一群与1型糖尿病疾病进程正相关的CD_4^+NKG2D^+T细胞,且该群细胞极有可能是通过直接作用于CD_4^+NKG2D-T细胞而间接对CD_8^+T细胞产生作用。

CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞联合hs-CRP在急性脑梗死肺部感染中的诊断价值

目的检测CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞在急性脑梗死肺部感染患者外周血中的表达水平,并分析其与超敏C反应蛋白(hs-CRP)联合检测对急性脑梗死肺部感染的预测价值。方法选取2019年6月—2020年12月于徐州医科大学附属医院确诊的50例急性脑梗死合并肺部感染患者作为研究对象,并以同期住院的50例未合并肺部感染的急性脑梗死患者作为对照组。比较2组患者的临床资料以及外周血CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞的表达水平。采用单因素和多因素Logistic回归分析筛查急性脑梗死合并肺部感染的危险因素,结合受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞百分比和hs-CRP单独检测以及联合应用的预测价值。结果与无肺部感染组相比,肺部感染组美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分更高且多合并吞咽困难,血清中IL-6及hs-CRP水平更高,外周血CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。经单因素和多因素Logistic回归分析显示,CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞百分率、hs-CRP水平升高是急性脑梗死合并肺部感染的危险因素。ROC曲线显示,CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞百分率、hs-CRP单独作为肺部感染预测指标时,其曲线下面积AUC分别为0.941和0.814,二者联合应用时AUC为0.962。结论CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞百分率与外周血hs-CRP水平联合应用对急性脑梗死并发肺部感染具有良好的诊断价值,可作为急性脑梗死发病早期预测并发肺部感染的生物学标志物。

环磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型建立与评价

目的建立环磷酰胺致免疫低下模型,应用流式细胞术检测小鼠自然杀伤细胞(NK)细胞分化抗原CD69+/自然杀伤细胞G2D受体(NKG2D+)和T淋巴细胞分化抗原CD69+/CD3+评价其免疫低下动物模型中的应用。方法以环磷酰胺强化注射、少量多次注射、一次大剂量注射分别建立免疫低下模型,30 d后处死,取外周血和脾,分别检测小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69+/NKG2D+和外周血T淋巴细胞CD69+/CD3+亚群,同时进行脾NK细胞活性测定,ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,观察环磷酰胺对外周血T淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响。结果环磷酰胺强化注射、少量多次注射均可使小鼠外周血和牌的活化的NK细胞和T淋巴细胞比例及T淋巴细胞转化增殖能力、脾NK细胞活性降低。结论环磷酰胺强化注射可以长时降低小鼠细胞免疫功能的作用,适用于建立长期免疫低下模型;流式细胞术检测T淋巴细胞和NK细胞分化抗原在免疫调节功能评价中有较好应用价值。

免疫低下模型的建立及流式细胞术的检测研究

目的:探讨环磷酰胺致免疫低下模型的建立,并试图研究应用流式细胞术检测小鼠自然杀伤细胞(NK)和T淋巴细胞的应用。方法:以环磷酰胺强化注射、少量多次注射、一次大剂量注射分别建立免疫低下模型,30 d后处死,取外周血和脾,分别检测小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群和外周血T淋巴细胞亚群,同时进行脾NK细胞活性测定、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,观察环磷酰胺对外周血T淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响。结果:环磷酰胺强化注射、少量多次注射均可使小鼠外周血和脾的活化的NK细胞和T淋巴细胞比例及T淋巴细胞转化增殖能力、脾NK细胞活性降低。结论:环磷酰胺强化注射可以长时降低小鼠细胞免疫功能的作用,适用于建立保健食品免疫低下模型;流式细胞术检测T淋巴细胞和NK细胞分化抗原在保健食品免疫调节功能评价中有较好应用价值。

多种血液肿瘤中NK细胞受体表达差异的临床意义

目的:检测几种血液肿瘤患者中自然杀伤(NK)细胞受体变化,以探究NK细胞功能状态。方法:收集多发性骨髓瘤(MM)患者38例,其中IgG-k型18例、IgG-λ型10例、IgA-k型4例、IgA-λ型6例;非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者27例,其中弥漫性大B细胞淋巴瘤18例、边缘区淋巴瘤3例、滤泡性淋巴瘤1例、套细胞淋巴瘤2例、免疫母性T细胞淋巴瘤1例、外周T细胞淋巴瘤2例;慢性髓系细胞白血病(CML)患者10例;30例健康志愿者为正常对照组。通过流式细胞术测定外周血中NK细胞占有核细胞比例,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测NK细胞表面抑制性受体(PD-1)及活化性受体(CD69、NKG2D)的基因表达水平。结果:与正常对照组比较,MM、NHL患者外周血NK细胞占有核细胞比例比较,差异无统计学意义(P均>0.05);而CML患者NK细胞占有核细胞数显著减少(P<0.05);MM、NHL及CML患者的NK细胞表面活化性受体(CD69、NKG2D)水平较正常对照组明显降低,NK细胞表面抑制性受体(PD-1)表达显著高于正常对照组(P均<0.05);MM、NHL及CML患者间受体(PD-1、CD69、NKG2D)表达比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。结论:MM、NHL及CML患者外周血NK细胞表面活化性受体(CD69、NKG2D)水平明显降低,抑制性受体(如PD-1)表达明显增高,提示NK细胞功能耗竭。

珍奥酵母核酸对环磷酰胺致小鼠免疫功能低下的影响

目的通过环磷酰胺致小鼠免疫功能低下,建立BALB/C小鼠免疫功能低下模型,评价珍奥酵母核酸对小鼠免疫功能低下的作用。方法选用BALB/C小鼠,随机分组,分别给予相应的处理,选择T淋巴细胞亚群CD69+/CD3+比值、NK细胞亚群CD69+/NKG2D+比值、淋巴细胞转化率及血清IL-2含量作为细胞免疫的指标。结果核酸各剂量组和添加剂组均可使免疫低下小鼠外周血和脾的T淋巴细胞亚群CD69+/CD3+比值、NK细胞亚群CD69+/NKG2D+比值提高,同时可提高免疫低下小鼠淋巴细胞转化率及IL-2水平,尤以高、中剂量核酸组和添加剂组明显(P<0.05)。结论珍奥酵母核酸可以提高免疫低下小鼠的免疫功能,以其为珍奥酵母核酸的临床应用及提高机体免疫力提供了实验依据。

灵芝孢子粉增强免疫力模型的建立及流式细胞术检测的研究

目的:探讨环磷酰胺建立的免疫低下动物模型应用于保健食品增强免疫力检验的研究,并试图应用流式细胞术研究小鼠自然杀伤细胞(NK)细胞分化抗原CD69+/NKG2D+和T淋巴细胞分化抗原CD69+/CD3+检测在免疫低下动物模型评价中的应用。方法:以环磷酰胺一次较大剂量造模、适时强化建立免疫低下模型,灌胃给予灵芝孢子粉,30 d后处死,取外周血和脾,分别检测小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69+/NKG2D+和外周血T淋巴细胞CD69+/CD3+亚群,同时进行脾NK细胞活性测定、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,观察环磷酰胺对外周血T淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响。结果:灵芝孢子粉可使环磷酰胺降低的小鼠外周血和脾的活化的NK细胞和T淋巴细胞比例及T淋巴细胞转化增殖能力、脾NK细胞活性增强。结论:灵芝孢子粉可有效增强小鼠细胞免疫功能,流式细胞术检测T淋巴细胞和NK细胞分化抗原在免疫调节功能评价中有较好应用价值。