外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、hCMV-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化的关系

目的探讨外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、人巨细胞病毒(hCMV)-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死(As-ACI)患者颈动脉粥样硬化的关系。方法选取89例As-ACI患者(脑梗死组),另选取健康体检者43例(对照组)。根据颈内动脉超声结果将As-ACI患者分为内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组。比较各组外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平、单个核细胞TLR4表达水平、hCMV-IgM抗体阳性率和内膜中膜厚度(IMT)。分析As-ACI患者颈动脉狭窄的危险因素,分析CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4与IMT的相关性及其对颈动脉狭窄的预测价值。结果脑梗死组CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、HDLC水平低于对照组,TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性率、TC、TG、LDLC、hs-CRP水平、IMT高于对照组(P<0.05)。内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平依次降低,TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性率、IMT依次增高(P<0.05)。CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平与IMT呈负相关,TLR4表达与IMT呈正相关(P<0.05)。高血压、CD4^(+)CD25^(+)Treg表达、TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性是As-ACI患者颈动脉狭窄的危险因素(P<0.05)。CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4表达水平联合检测的预测价值高于单独检测(P<0.05)。结论外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、hCMV-IgM抗体阳性率与As-ACI患者颈动脉粥样硬化进展有关,外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4联合可以较好预测病变过程。

RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2在胃癌患者中的表达及对预后和生存时间的影响

目的:探讨RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、成髓细胞瘤转录因子第2亚型(MYBL2)在胃癌患者中的表达及对预后和生存时间的影响。方法:选取2017年1月至2019年1月于本院就诊的134例胃癌患者术后癌组织标本作为研究对象,另选取其中62例胃癌患者相应的癌旁组织标本及40例同期非胃癌患者正常胃黏膜组织标本进行对照,检测癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2的表达情况,分析其对胃癌预后及生存时间的影响。结果:RhoA,CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2在癌组织中的阳性率均明显高于癌旁组织和正常胃黏膜组织(P<0.05)。胃癌患者术后平均生存时间为(28.61±1.34)个月,其中RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2阳性患者的生存时间均短于阴性患者(P<0.05)。RhoA(+)、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞(+)、MYBL2(+)是胃癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论:检测RhoA,CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2的表达可作为胃癌病情严重程度、预后及生存时间评估的重要补充手段。

冠心病患者外周血CD4^+CD28^-T细胞和CD4^+CD25^+T细胞亚群变化

目的探讨冠心病患者外周血CD4^+CD28^-T细胞和CD4^+CD25^+调节性T细胞(Treg)亚组的变化及意义。方法入选病例为我院从2005年6月到2005年12月共28例行冠状动脉支架术治疗的冠心病患者(不稳定性心绞痛16例、稳定性心绞痛12例),以同时冠脉造影正常11例胸痛综合症患者为对照。借助三色荧光标记技术对外周血CD4^+CD28^-T细胞和CD4^+CD25^+Treg占CD4^+T细胞比例进行流式细胞术测定。结果不稳定性心绞痛患者外周血Treg/CD4^+T细胞比例[(6.55±2.45)%]显著低于稳定性心绞痛组[(14.01±4.92)%]和胸痛综合征组[(13.55±3.87)%](P<0.05),而CD4+CD28-/CD4+T细胞比例[(10.55±4.76)%]则明显高于稳定性心绞痛组[(2.64±1.33)%]和胸痛综合征组[(2.75±1.55)%](P<0.05)。结论不稳定性心绞痛患者外周血Treg比例减少而CD4+CD28-T细胞比例升高,Treg比例降低可能使外周免疫耐受失去平衡,参与了动脉粥样硬化的发生发展。

CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg及CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中的水平变化及其与疾病活动度的关系

目的研究CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎中的水平变化与及其与病活动度的关系。方法选取我院于2018年10月至2020年10月收治的108例狼疮性肾炎患者作为研究组,根据系统性红斑狼疮的疾病活动指数(SLEDAI)分为轻度活动度组(38例)、中度活动度组(44例)、重度活动度组(26例),另选取同期于我院行肾穿刺活检证实为微小病变患者为对照组(50例)。检测受试者外周血中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞水平,分析各组间细胞水平差异,采用ROC曲线分析CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞诊断狼疮性肾炎的价值,采用Pearson相关性分析各细胞与疾病活动度间的相关性。结果研究组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平均显著高于对照组(P<0.05),而CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg明显低于对照组(P<0.05)。不同严重程度狼疮性肾炎患者外周血CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平差异有统计学意义(P<0.05),其中重度组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平最高。Pearson相关性分析显示,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞分别与SLEDAI评分呈现负、正相关性,相关系数r分别为-0.458、0.468。采用ROC曲线分析显示,CD19^(+)CD69^(+)B细胞、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg诊断狼疮性肾炎的曲线下面积分别为0.801(95%CI=0.722~0.880)、0.839(95%CI=0.775~0.903)。两者联合诊断的曲线下面积为0.885(95%CI=0.826~0.944),高于单独检测(P<0.05)。结论CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中处于异常水平状态,且水平与疾病活动度相关,两者联合检测可作为诊断狼疮性肾炎的新指标。

CD69+CD4+CD25-T在自身免疫性胰腺炎患者外周血中表达升高及临床意义

目的检测CD69+CD4+CD25-T细胞在自身免疫性胰腺炎(AIP)患者外周血中的表达情况,进一步分析其临床意义。方法收集2014年9月~2016年12月长海医院血液科诊断的32例AIP患者与同期体检的32例健康个体外周血分别作为实验组与对照组。采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs),用流式细胞术检测PBMCs中的CD69+CD4+CD25-T,以ELISA法检测血浆中细胞因子的表达状况。两组间变量的比较采用两独立样本<检验,两计量资料间的关系以Pearson相关系数表示。结果实验组与对照组CD69+CD4+CD25-T表达水平为10.36%±3.68%vs3.99%±1.45%,(t=9.110,P<0.000 1);TGF-β的表达水平为399.86±121.88vs 143.87±56.22 pg/ml,(t=10.79,P<0.000 1),差异均具有统计学意义。实验组CD69+CD4+CD25-T细胞与TGF-β呈正相关(r=0.653,P<0.001),与IL-4,IFN-γ,IL-2呈负相关(r=-0.442,-0.567,-0.351,P<0.05),差异具有统计学意义。结论 CD69+CD4+CD25-T细胞可能参与了AIP的免疫病理过程,是临床诊断与治疗潜在的生物学指标。

妊娠早期外周血和蜕膜CD4^+CD25^+FoxP3^+/CD127^-T细胞检测及意义

目的研究妊娠早期外周血和蜕膜组织中CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127-T细胞的数量变化,并探讨相关性。方法17例原因不明复发性流产(URSA)患者(URSA组)和20名正常健康早孕者(对照组)于人工流产时分别采集外周血和蜕膜组织,Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞悬液,分别加入CD4-PE-Cy5.5、CD25-FITC或CD25-APC和细胞表面标记CD127-PE或细胞内标记FoxP3-PE,流式细胞仪检测样本中CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127-T细胞的百分比,并进行线性相关分析。结果与对照组比较,URSA组蜕膜组织中CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127-T细胞百分比明显降低(均P<0.05);两组间外周血CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127-T细胞百分比比较差异无统计学意义。组内比较显示,两组外周血和蜕膜组织中CD4+CD25+FoxP3+与CD4+CD25+CD127-T细胞百分比比较,差异均无统计学意义(均P(0.05)。相关分析显示,两组CD4+CD25+FoxP3+与CD4+CD25+CD127-T细胞的百分比在外周血(r=0.9858,r=0.6870)和蜕膜组织(r=0.6089,r=0.9583)均呈显著正相关(均P(0.05)。结论URSA的发生可能与蜕膜CD4+CD25+调节性T细胞数量减少有关,而外周血CD4+CD25+调节性T细胞可能不参与URSA的免疫发病机制。细胞表面标记CD127可能成为鉴定和分离CD4+CD25+调节性T细胞的一种新的特异性标记物。

人CD4^+CD25^+T细胞和CD4^+CD25^-T细胞蛋白质组的双向电泳分析

目的 用双向电泳技术分析人CD4+ CD2 5 + T细胞和CD4+ CD2 5 -T细胞表达的蛋白质组 ,建立二者之间的差异表达谱。方法 从人脾脏分选CD4+ CD2 5 + T细胞和CD4+ CD2 5 -T细胞 ,用双向电泳技术分析两种细胞蛋白质组的表达差异。结果 分选细胞纯度分别为CD4+ CD2 5 + T细胞 82 .3 % ,CD4+ CD2 5 -T细胞 96.5 % ,双向电泳分析发现有 4个蛋白点明显仅于CD4+ CD2 5 + T细胞检测到表达 ,有 9个蛋白点明显仅于CD4+ CD2 5 -T细胞检测到表达。结论 CD4+ CD2 5 + T细胞和CD4+ CD2 5

IL-7联合IL-2对脐血CD4^+CD25^-T细胞体外诱导扩增影响的研究

目的:初步探讨IL-7联合IL-2对脐血CD4+CD25-T细胞体外扩增的促进作用,建立稳定的体外培养扩增脐血CD4+CD25-Tregs的培养体系,比较诱导扩增后的CD4+CD25+Tregs和自然分选的CD4+CD25+Tregs对PBMCs功能活性的影响。方法:采用免疫磁珠分选法分选出脐血CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞;加入不同浓度的细胞因子IL-7结合适当浓度的IL-2作为诱导剂,分析IL-7体外诱导CD4+CD25-T细胞增殖的有效性及最适浓度。我们利用流式细胞术检测体外扩增后的CD4+CD25-T细胞表型变化;MTS法检测体外诱导扩增的CD4+CD25+Tregs及自然分选的CD4+CD25+Tregs分别对成人外周血中单个核细胞增殖的抑制作用;RT-PCR方法分析体外诱导扩增的CD4+CD25+Tregs及自然分选的CD4+CD25+Tregs FOXP3基因、IL-10基因和TGF-β基因的cDNA表达的变化。结果:经3周体外培养、各组细胞均有明显的扩增。IL-7诱导组的扩增最强。体外抑制试验显示体外扩增的Tregs对成人外周血中单个核细胞有明显的抑制作用,IL-7联合IL-2诱导CD4+CD25-T细胞生成的CD4+CD25+Tregs具有较自然分选的CD4+CD25+Tregs稍弱的免疫抑制功能,其中IL-7浓度为4 ng/ml,IL-2浓度为2 000 U/ml时诱导CD4+CD25-T细胞生成的CD4+CD25+Tregs杀伤活性最强。结论:成功建立了CD4+CD25+Tregs的体外培养体系,联合应用IL-7、大剂量的IL-2和CD3/CD28单抗是体外诱导扩增CD4+CD25-T细胞成为CD4+CD25+Tregs的优选方法,并且扩增倍数高、可持续高表达CD4及CD25细胞表型。

外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平对早期宫颈癌患者腹腔镜根治术后预后的预测价值

目的分析外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平对早期宫颈癌(CC)患者腹腔镜根治术后预后的预测价值。方法招募2018年9月至2020年9月于儋州市人民医院接受腹腔镜根治术治疗的早期CC患者204例,根据患者术后随访期间预后情况分为预后不良组(43例)和预后良好组(161例)。比较两组临床资料。采用Spearman秩相关分析外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞水平与CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平的相关性。采用多因素logistic回归分析早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平对早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良的预测价值。结果预后不良组CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)水平,术后切缘阳性占比以及术中宫旁浸润占比高于预后良好组,CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示,早期CC患者外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞水平与CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平呈负相关(r_(s)=-0.478,P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,较高的CEA、CA125、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞水平是促进早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良发生的独立危险因素(P<0.05),较高的CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平是抑制早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良发生的独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平能有效预测早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良(P<0.05),两项指标联合可进一步提高预测效能[AUC(95%CI)=0.939(0.898~0.979),P<0.001],灵敏度和特异度分别为86.00%、88.20%。结论外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平与早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良有关,二者能有效预测早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良。

脑卒中患者外周血CD4^+CD25^+及CD4^+CD28^-T细胞的变化及临床意义

目的:研究脑卒中患者外周血CD4^+CD25^+及CD4^+CD28^-T细胞的变化及其与神经元损害标志物、炎症细胞因子、斑块稳定性指标的相关性。方法:选择在我院诊断为急性缺血性脑卒中的患者作为研究的脑卒中组,另取同期体检的健康志愿者作为对照组。采集外周血并测定CD4^+CD25^+及CD4^+CD28^-T细胞的含量,采集血清并测定神经元损害标志物、炎症细胞因子、斑块稳定性指标的含量。结果:脑卒中组外周血中CD4^+CD25^+的含量以及血清中BDNF、IGF-1、IL-10、TGF-β1、TIMP2、Vaspin的含量低于对照组,外周血中CD4^+CD28^-T细胞的含量以及血清中NSE、VILIP-1、ET-1、IL-6、CX-CL12、VCAM-1、P-selectin、ox-LDL、CatS、ICTP、VEGF的含量的含量高于对照组;脑卒中组外周血中CD4^+CD25^+的含量与血清中BDNF、IGF-1、IL-10、TGF-β1、TIMP2、Vaspin的含量呈正相关,NSE、VILIP-1、ET-1、IL-6、CXCL12、VCAM-1、P-selectin、ox-LDL、CatS、ICTP、VEGF的含量呈负相关;外周血中CD4^+CD28^-T细胞的含量与血清中BDNF、IGF-1、IL-10、TGF-β1、TIMP2、Vaspin的含量呈负相关,NSE、VILIP-1、ET-1、IL-6、CXCL12、VCAM-1、P-selectin、ox-LDL、CatS、ICTP、VEGF的含量呈正相关。结论:脑卒中患者外周血CD4^+CD25^+及CD4^+CD28^-T细胞的变化能够加重神经元损害、促进炎症反应激活及斑块稳定性下降。

CD4^+CD25^+、CD4^+CD69^+和CD4^+HLA-DR^+T淋巴细胞的昼夜节律性变化

目的:探讨CD4+CD25+、CD4+CD69+和CD4+HLA-DR+T淋巴细胞的昼夜节律性变化情况。方法:10名健康男性志愿者,年龄24～30岁,平均25岁。预先在昼夜节律模式条件(16h-light:8h-dark cycle,LD)下生活1周:室温25±1oC,起床时间:7:00,睡眠时间(无光照期):23:00～7:00,早餐时间:7:30～8:00,午餐时间:11:30～12:00,晚餐时间:5:00～6:00;睡眠时光照强度<0.1 Lux;受试者自由饮水,无烟酒嗜好,日常活动和饮食成分基本一致。随后在一昼夜内每隔4h抽取各受试者外周血3ml,用流式细胞仪测定CD4+CD25+、CD4+CD69+和CD4+HLA-DR+T淋巴细胞占CD4+T细胞的百分比,通过余弦法和Clock Lab软件获取节律参数,并经振幅检验分析是否存在昼夜节律。结果:在自然光制下,CD4+CD25+、CD4+CD69+和CD4+HLA-DR+T淋巴细胞的相对数量均呈现昼高夜低的节律性振荡(P<0.05),但各细胞相对数量变化的峰谷时点略有不同。结论:人外周血CD4+CD25+、CD4+CD69+和CD4+HLA-DR+T淋巴细胞的变化均存在着昼夜节律性特征。

人Foxp3基因真核载体的构建及在CD4^+CD25^-T细胞中的表达和功能

目的:构建人Foxp3基因的真核表达载体并转染人CD4+CD25-T细胞,观察其在CD4+CD25-T细胞中的表达及功能。方法:构建人Foxp3基因pEGFP-N1真核表达载体,经酶切及双向测序鉴定基因序列的正确性。通过电穿孔法将重组载体转入人CD4+CD25-T细胞中,利用荧光显微镜及流式细胞术检测转染效率,采用3H-TdR掺入法检测转染细胞对单个核细胞增殖能力的影响。结果:酶切及测序鉴定pEGFP-N1-Foxp3重组质粒基因序列完全正确,转染的CD4+CD25-T细胞Foxp3阳性表达率为23.7%,并显著抑制了单个核细胞的增殖能力。结论:成功构建了pEGFP-N1-Foxp3真核表达载体,并使转染的CD4+CD25-T细胞具有调节性T细胞的功能。

双向电泳-质谱法分析人CD4^+CD25^+T细胞与CD4^+CD25^-T细胞蛋白质组差异

目的 用双向凝胶电泳-质谱法(2-DE/MS)分析人CD4+ CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞表达的蛋白质组,建立二者之间的差异表达谱。方法提取人脾脏源CD4+ CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞总蛋白质,双向电泳分离蛋白,比较两种细胞的蛋白质组表达差异,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser des-orption/ionization time of flying mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)进行鉴定。结果胶图差异分析发现25个表达水平存在明显差异的蛋白质点,其中17个点在CD4+CD25-T细胞上调,8个点在CD4+CD25+T细胞上调。质谱初步鉴定出15个差异蛋白质点。结论CD4+ CD25+T细胞和CD4+ CD25-T细胞表达蛋白质组存在差异,这种蛋白质组的差异分析有助于进一步研究调节性T细胞功能相关蛋白质。

系统性红斑狼疮患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞中转录因子Bach2的表达及其影响

目的·研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞中转录因子BTB与CNC同源基因2(BTB and CNC homology 2,Bach2)的表达及其对细胞功能的影响。方法·采用流式细胞仪分选获得活动期SLE患者(SLE组)和健康对照者(对照组)外周血CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞,荧光定量PCR和Western blotting检测该类细胞中Bach2的表达;分析SLE患者该类细胞中Bach2的平均荧光强度(median fluorescence intensity,MFI)与SLE疾病活动指数(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)的相关性。采用流式细胞术比较SLE患者IL-17+CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞和IL-17-CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞中Bach2的MFI。在Bach2过表达体系中,采用流式细胞术检测CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞表达IL-17的细胞比例,采用ELISA方法检测细胞培养上清液中IL-17的含量。结果·与对照组相比,SLE组CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞Bach2的m RNA和蛋白表达水平均显著降低(均P<0.01);SLE组Bach2的MFI与SLEDAI呈显著负相关(R2=0.433,P=0.001)。SLE患者IL-17+CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞Bach2的MFI显著低于IL-17-CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞(P=0.013)。当Bach2过表达时,SLE患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞表达炎症因子IL-17的细胞比例明显下降(P=0.032),细胞培养上清液中IL-17含量显著降低(P=0.008)。结论·SLE患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞Bach2表达下降,在该类细胞中过表达Bach2可使IL-17表达下降。

γ-干扰素诱导人外周血CD4^+CD25^-T细胞转化为CD4^+CD25^+调节性T细胞的可行性研究

目的研究γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)将人外周血CD4^+CD25^- T细胞诱导为CD4^+CD25^+调节性T细胞(CD4^+CD25^+Tregs)的可行性。方法采用免疫磁珠法分离19名健康志愿者外周血单个核细胞中的CD4^+CD25^- T细胞,在抗CD3和抗CD28抗体存在条件下给予不同水平IFN-γ刺激72 h,以流式细胞仪检测CD4^+CD25^+T细胞比例并以real time-PCR法检测其特异性表型标志FoxP3表达水平。将诱导生成的CD4^+CD25^+T细胞与自体CD4^+CD25^-T细胞共培养检测诱导生成的CD4^+CD25^+T细胞抑制CD4^+CD25^-T细胞增殖的能力。结果IFN-γ刺激后CD4^+CD25^+T细胞比例上调且其FoxP3表达较诱导前明显增高,当IFN-γ水平为20、40 ng/mL时,CD4^+CD25^+T细胞上调比例最高;40 ng/mL IFN-γ诱导的CD4^+CD25^+T细胞FoxP3表达最高,但不及CD4^+CD25^+Tregs。IFN-γ诱导所得CD4^+CD25^+T细胞可抑制自体CD4^+CD25^-T细胞增殖,40 ng/mL IFN-γ诱导的CD4^+CD25^+T细胞抑制能力与CD4^+CD25^+Tregs相当。结论 IFN-γ可诱导CD4^+CD25^-T细胞转化为CD4^+CD25^+T细胞,当IFN-γ水平为40 ng/mL时诱导率最高且诱导生成的CD4^+CD25^+T细胞表型和功能与CD4^+CD25^+Tregs相当。

大鼠CD4~＋CD25-T细胞的Foxp3基因转染及其表达

背景:调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差。目的:以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP+载体转染大鼠CD4+CD25-T细胞,观察其在大鼠CD4+CD25-T细胞中的表达。方法:以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4+CD25-T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4+CD25-T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4+CD25-T细胞为阴性对照组,CD4+CD25+T细胞为阳性对照组。荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达。结果与结论:成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞,细胞存活率为(94±2)%,慢病毒转染的CD4+CD25-T细胞高表达Foxp3基因。表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4+CD25-T细胞中高表达。

2型糖尿病及大血管病变患者CD4^+CD28^-T细胞、CD4^+CD25^+T细胞亚群的变化及意义

目的:观察外周血CD4+CD28-T细胞、CD4+CD25+T细胞亚群在2型糖尿病患者及大血管病变患者的变化,探讨其在2型糖尿病及大血管病变发病中的作用。方法:应用免疫荧光标记技术和流式细胞仪,检测36例初诊2型糖尿病(单纯DM组)患者和28例糖尿病并大血管病变患者、20例健康对照者的外周血T细胞亚群变化。结果:DM并大血管病变组、单纯DM组CD4+CD28-T细胞明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);而CD4+CD25+T细胞明显低于健康对照组(P<0.05);DM并大血管病变组CD4+CD28-T细胞高于单纯DM组(P<0.05),CD4+CD25+T细胞低于单纯DM组。结论:机体细胞免疫异常在2型糖尿病及大血管病变的发生、发展中发挥着一定的作用。

CD4^＋CD25^＋CD127^low识别人外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的优势

目的:探索可用于检测人外周血中CD4+CD25+Treg细胞的最佳标记物。方法:以52名健康人和47名非血液系统肿瘤患者为研究对象,采用多色免疫荧光素标记和多参数流式细胞术同时检测外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127lowT细胞,并以经典指标CD4+CD25high和CD4+CD25+FoxP3+为标准,分析和比较CD4+CD25+CD127low作为识别CD4+CD25+Treg细胞的可行性及其优势。结果:健康人和肿瘤患者外周血CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127lowT细胞占CD4+T细胞百分比分别为(1.769±0.682)和(2.958±1.392);(2.905±1.772)和(5.128±2.227)以及(5.396±1.306)和(7.175±2.565)。三者呈相同的趋势,即肿瘤患者组>健康人组,且三者之间呈显著正相关(P<0.05)。用两种不同标记法高纯度分选CD4+CD25high和CD4+CD25+CD127lowT细胞群后,FoxP3阳性率分别为90.9和92.7。结论:CD4+CD25+CD127low三标记法可以帮助识别CD4+CD25+Treg和部分激活的CD4+T细胞,提高CD4+CD25+Treg细胞的可检出数量,并且不影响细胞活性度,是反映CD4+CD25+Treg细胞更理想的指标。

TF3-H4对CD4^+CD25^+调节性T细胞和CD4^+CD25^-效应性T细胞早期活化的影响

目的观察1',2',3',7'-四氢茶黄素-3,3'-双没食子酸酯(TF3-H4)对CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞早期活化的影响,分析TF3-H4对两群功能相反的CD4+T细胞的作用。方法免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞,加入ConA或PDB,和TF3-H4共同孵育12 h后收集细胞,流式细胞仪分析细胞表面早期活化标志CD69的表达。结果在ConA和PDB的作用下,两群细胞早期活化标志CD69的表达均升高。TF3-H4(20 mg.L-1)不能抑制PKC激动剂PDB激活的CD4+CD25-效应性T细胞CD69的表达,却能抑制ConA激活的CD4+CD25-效应性T细胞CD69表达;同时,TF3-H4也能明显抑制ConA激活的CD4+CD25+调节性T细胞的CD69表达。结论茶黄素衍生物TF3-H4可能经由TCR活化途径的上游抑制CD4+CD25-效应性T细胞活化;TF3-H4对CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞早期活化的抑制作用,可能是该类化合物发挥抗炎、抗肿瘤作用的机制之一。

中国健康人外周血中具有CD4^+CD25^(nt/hi)CD127^(lo)特征的调节性T细胞频率

目的:初步确定健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo特征的调节性T细胞(Treg)频率,为临床相关疾病的研究及Treg的分选提供参考。方法:采集312名8~60岁(5个年龄组)、不同性别健康人的静脉血,经三重免疫荧光染色,用流式细胞术分析CD4+CD25nt/hiCD127loTreg细胞频率,并观察细胞内Foxp3转录因子的表达。结果:健康人CD4+CD25nt/hiCD127loTreg细胞在外周血中约占CD4+T细胞的(6.55±0.11)%,各年龄组之间有差异(P=0.015),组内性别之间也存在统计学意义(P<0.05);CD25nt/hiCD127lo细胞特异性地表达Foxp3转录因子。结论:初步确定了中国健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo表达特征的细胞频率,为Treg细胞的临床研究奠定了基础;CD25nt/hiCD127lo作为CD4+CD25+Treg细胞表面的特征性标志,可在分选时排除其他细胞干扰,获得较完整的Treg细胞。