CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg及CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中的水平变化及其与疾病活动度的关系

目的研究CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎中的水平变化与及其与病活动度的关系。方法选取我院于2018年10月至2020年10月收治的108例狼疮性肾炎患者作为研究组,根据系统性红斑狼疮的疾病活动指数(SLEDAI)分为轻度活动度组(38例)、中度活动度组(44例)、重度活动度组(26例),另选取同期于我院行肾穿刺活检证实为微小病变患者为对照组(50例)。检测受试者外周血中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞水平,分析各组间细胞水平差异,采用ROC曲线分析CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞诊断狼疮性肾炎的价值,采用Pearson相关性分析各细胞与疾病活动度间的相关性。结果研究组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平均显著高于对照组(P<0.05),而CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg明显低于对照组(P<0.05)。不同严重程度狼疮性肾炎患者外周血CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平差异有统计学意义(P<0.05),其中重度组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平最高。Pearson相关性分析显示,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞分别与SLEDAI评分呈现负、正相关性,相关系数r分别为-0.458、0.468。采用ROC曲线分析显示,CD19^(+)CD69^(+)B细胞、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg诊断狼疮性肾炎的曲线下面积分别为0.801(95%CI=0.722~0.880)、0.839(95%CI=0.775~0.903)。两者联合诊断的曲线下面积为0.885(95%CI=0.826~0.944),高于单独检测(P<0.05)。结论CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中处于异常水平状态,且水平与疾病活动度相关,两者联合检测可作为诊断狼疮性肾炎的新指标。

体外激活CD8^+T细胞表达CD69及γ-干扰素的研究

目的 :研究正常人外周血CD8+T细胞体外活化表达早期活化标志CD69分子及γ -干扰素 (IFN -γ)的规律 方法 :以佛波醇酯 (PDB) +离子霉素 (Ion)或植物血凝素 (PHA)体外活化人外周血单个核细胞 (PBMC) ,利用流式细胞术分析CD8+T细胞表达CD69及IFN -γ的情况 结果 :PDB +Ion和PHA活化CD8+T细胞CD69的表达率 ( % )分别为 78.4± 5.3和 2 7.4± 4 .4 ( x±s) ,明显高于对照组 ( 1.5± 0 .6) (P <0 .0 5) 当monensin存在时以PDB +Ion及PHA刺激 4h后IFN -γ阳性CD8+T细胞的百分比分别为 2 9.7± 6.5及 5.9± 1.8,均明显高于对照组 ( 0 .7± 0 .2 ) (P <0 .0 5) ,其中前者表达率高于后者 (P <0 .0 5) 结论 :PDB +Ion和PHA均可刺激CD8+T细胞表达CD69以及IFN -γ 。

CD_(69)^+CD_3^+比值和左旋咪唑对照在评价保健食品免疫调节作用中的应用研究

〔目的〕研究左旋咪唑阳性对照和外周血T淋巴细胞CD+ 6 9 CD+ 3检测在保健食品免疫调节作用评价中的应用。〔方法〕以左旋咪唑 ( 2 5mg kgbw)连续灌胃 3d的方法设立左旋咪唑阳性对照 ;进行外周血T淋巴细胞亚群CD+6 9 CD+3检测、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验、NK细胞活性测定、迟发型变态反应试验 ,观察低、中、高剂量 (分别为 3 .75、7.5 0、15 .0ml kgbw)参茸膏对小鼠细胞免疫功能的影响。〔结果〕与阴性对照组比较 ,左旋咪唑对照组各项试验指标均明显升高 ,参茸膏低、中剂量组T淋巴细胞转化增殖能力、各剂量组外周血T淋巴细胞CD+ 6 9 CD+ 3比值以及中剂量组迟发型变态反应能力均明显升高。〔结论〕左旋咪唑有明显增强小鼠细胞免疫功能的作用 ,可以作为保健食品免疫调节功能评价中的阳性对照 ;外周血T淋巴细胞CD+ 6 9 CD+ 3检测与传统的细胞免疫检测结果有较好一致性 ,且方法敏感性较好 ,在保健食品免疫调节功能评价中有较好应用价值。

CD69^+/NKG2D^+比值在保健食品评价中应用

目的研究小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)细胞分化抗原CD69+/NKG2D+检测在保健食品免疫调节作用评价中的应用。方法以左旋咪唑25mg(kg·bw)连续灌胃3d设立左旋咪唑阳性对照;进行小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69+/NKG2D+检测和脾NK细胞活性测定试验,观察0.83,1.67g/(kg·bw)剂量组蛋白粉对小鼠NK细胞免疫功能的影响。结果与阴性对照组比较,左旋咪唑对照组和0.83,1.67g/(kg·bw)剂量组蛋白粉剂量组外周血NK细胞CD69-/NKG2D+、CD69+/NKG2D+比值以及脾NK细胞活性均明显升高。结论外周血NK细胞CD69+/NKG2D+检测与传统的NK细胞免疫检测结果有较好一致性,且方法敏感性较好,在保健食品免疫调节功能评价中有较好应用价值。

卵巢癌细胞对CD8^+ T细胞活化分子CD69表达的影响

目的:探讨卵巢癌细胞对CD8+T细胞活化分子CD69表达的影响。方法:采用流式细胞术检测3株卵巢癌细胞(OVCAR3、CAOV3和SKOV3)培养上清液对CD8+T细胞表达早期活化分子CD69表达的百分率,酶联免疫吸附法(ELISA)测定CD8+T细胞分泌的细胞因子IFN-γ的水平。结果:与对照组比较,3株卵巢癌细胞培养上清液可对CD8+T细胞CD69的表达产生明显的抑制作用(F=29.90,P<0.01),CD8+T细胞分泌的细胞因子IFN-γ水平显著降低(F=16.31,P<0.01)。结论:卵巢癌细胞早期就能抑制CD8+T细胞的活化,CD69可作为评价免疫效应细胞功能的指标。

小儿类风湿关节炎患者外周血CD4^+、CD8^+ T细胞CD_(69)表达及意义

目的分析小儿类风湿关节炎(RA)患者的外周血CD4+、CD8+T细胞CD69表达水平,探讨其在小儿关节炎症发生过程中的免疫病理作用。方法收集32例RA患儿和30例健康儿童外周血标本,利用流式细胞仪检测CD4+、CD8+T细胞CD69表达,分析它们在疾病发展过程中的作用。结果RA患儿外周血CD4+、CD8+T细胞CD69表达明显升高,与健康者比较有统计学差异(P<0·05),所有患儿均接受了有效的药物治疗,待症状控制后,分析发现患者的CD4+、CD8+T细胞表达CD69水平显著下降(P<0·05)。结论RA患儿外周血T细胞表达CD69水平明显升高,提示T细胞在关节炎症病变过程中激活、增殖,参与关节滑膜组织及全身免疫应答。

选择性去除表达CD25^+、CD69^+的同种异体反应T细胞的实验研究

目的探讨体外选择性去除表达CD25+、CD69+的同种异体反应T细胞协调移植物抗宿主病和移植物抗肿瘤的可能性。方法流式细胞仪检测初次单向混合淋巴细胞反应CD25+、CD69+表达情况,磁性细胞分离系统在细胞表达高峰去除CD25+、CD69+同种异体反应T细胞。MTT法在各时间点检测不同抗原组再次混合淋巴细胞反应的细胞增殖情况。结果再次单向混合淋巴细胞反应显示明显降低了对相同刺激原的反应性(48·82±13·71)%,保留大部分对无关刺激原的反应性(65·47±9·84)%和肿瘤刺激原的反应性(64·83±3·65)%。结论体外选择性去除表达CD25+、CD69+的同种异体反应T细胞可以协调移植物抗宿主病和移植物抗肿瘤。

CD69在慢性乙肝患者CD4^+、CD8^+T淋巴细胞的表达

目的:观测慢性乙肝患者外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞早期激活标志CD69的表达。方法:静脉采集慢性乙肝患者普通肝素抗凝血2ml,在植物血凝素(PHA)20μg/ml条件下进行全血培养,4h后用双色免疫荧光标记流式细胞术检测CD4+、CD8+T淋巴细胞CD69的表达。结果:正常人外周血只有很少量CD4+与CD8+T淋巴细胞表达CD69分子,经PHA刺激后CD4+与CD8+T淋巴细胞CD69的表达率明显升高,较刺激前有统计学差异(P<0.01)。同样,慢性乙肝患者在激活前后也有统计学差异(P<0.01);慢性乙肝患者在PHA刺激前有一部分CD4+、CD8+T淋巴细胞表达CD69分子,明显高于对照组(P<0.01)。结论:本研究结果可能与乙肝患者体内病毒免疫紊乱有关系。

一种CD3^＋ T细胞细胞内CD69分子的检测方法

目的建立一种人外周血CD3^+ T细胞细胞内CD69的检测方法。方法分离获取健康人PBMC,用PMA^+ IM(佛波醇酯^+ 离子霉素)刺激PBMC,用蛋白转运抑制剂(Brefeldin A,BFA)阻断细胞内因子的分泌,用皂角素(Saponin)破膜,流式细胞术检测CD3^+ T细胞胞内CD69阳性率,以确定最佳的破膜时间。结果最佳的破膜时间为15 min,CD3^+ T细胞胞内CD69表达的阳性率较高,可达87.82%。结论流式细胞术是一种检测CD3^+ T细胞内CD69的较好方法,这一方法也为CD3^+ T细胞内其他分子的检测分析奠定了方法学基础。

选择性去除表达CD25^+、CD69^+的同种异体反应T细胞的实验研究

目的探讨体外选择性去除表达CD25^＋．CD69^＋的同种异体反应T细胞协调移植物抗宿主瘴和移植物抗肿瘤的可能性。方法流式细胞仪检测初次单向混合淋巴细胞反应CD25^＋，CD69^＋表达情况，磁性细胞分离系统在细胞表达高峰去除CD25＋、CD69^＋同种异体反应T细胞。MTT法在各时间点检测不同抗原组再次混合淋巴细胞反应的细胞增殖情况。结果再次单向混合淋巴细胞反应显示明显降低了对橱同刺激原的反应性（48．82＋13．71%，保留大部分对无关刺激原的反应性（65．47±9．84瑚和肿瘤刺激原的反应性（64．83±3．65）％。结论体外选择性去除表达CD25^＋．CD69^＋的同种异体反应T细胞可以协调移植物抗宿主病和移植物抗肿瘤。

MicroRNA-31对HIV感染者CD4^+T细胞CD69表达的影响及机制

目的探讨微小RNA(microRNA,miR)-31对HIV感染者CD4^+T细胞表面CD69表达的影响及作用机制。方法通过流式细胞仪分析健康对照与HIV感染者的CD4^+T细胞活化后CD69表达情况。在健康人外周血单个核细胞中转染antagomir-miR-31抑制miR-31表达,观察CD4^+T细胞活化后CD69表达情况。采用生物信息学方法预测miR-31靶基因及相关通路,并在293T细胞系中过表达和抑制miR-31,通过实时荧光定量PCR检测相关靶基因的表达。结果与健康对照相比,HIV感染者CD4^+T细胞在抗-CD3/CD28抗体刺激活化后CD69表达更低。抑制miR-31表达后,CD4^+T细胞活化时CD69的表达与对照相比显著下降。miR-31低表达后T细胞活化信号通路KSR2和DUSP7表达升高。结论miR-31可以有效调节CD4^+T细胞表面CD69的表达,对HIV感染者早期免疫活化起重要作用。

口腔鳞状细胞癌患者外周血淋巴细胞计数及CD69表达

目的 分析外周血淋巴细胞计数及CD69的表达在口腔鳞状细胞癌发生及进展中的意义。方法 选取2018-2020年北京口腔医院收治的口腔鳞癌患者45例作为患者组,健康对照组65例。采用流式细胞术检测两组受试者外周血中淋巴细胞计数、细胞毒性T淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69的表达,分析患者组与对照组、不同临床分期及不同病理分级口腔鳞癌患者外周血淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69表达的差异。结果 患者组外周血淋巴细胞计数、T淋巴细胞计数、细胞毒性T淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69表达显著低于对照组(P<0.01);淋巴细胞计数在Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ~Ⅳ期口腔鳞癌中无显著性差异(P>0.05),Ⅲ~Ⅳ期口腔鳞癌患者组外周血T淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69的表达低于Ⅰ~Ⅱ期患者组(P<0.05)。不同病理分级口腔鳞癌患者外周血淋巴细胞计数、T淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞计数、CD69表达及T淋巴细胞CD69的表达差异不显著。结论 口腔鳞癌患者外周血T淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞计数降低,CD69表达降低及T淋巴细胞CD69表达降低,可能与肿瘤的发生及进展相关。

α干扰素对类风湿关节炎患儿CD_4^+、CD_8^+T细胞CD_(69)、CD_(25)表达影响研究

目的探讨α干扰素对类风湿关节炎患儿CD+4、CD+8T细胞CD69、CD25表达影响。方法选取我院儿科收治的类风湿关节炎患儿92例,随机分为对照组46例,予一般治疗及非甾体抗炎药、抗风湿药及糖皮质激素等常规治疗,6个月为一个疗程,治疗1个疗程;实验组46例,在常规治疗的基础上加用注射用重组人干扰素α-1b,3×106U肌注,每周三次,6个月为一个疗程,治疗1个疗程。正常组46例,为正常健康体检儿童。治疗结束后,对比治疗前后患而CD69+CD+4T细胞、CD69+CD+8T细胞、CD25+CD+4T细胞、CD25+CD+8T细胞含量水平及临床疗效。结果 1治疗后两组患儿血清中CD69+CD+4T细胞、CD69+CD+8T细胞、CD25+CD+4T细胞、CD25+CD+8T细胞含量水平改善,且实验(1)组患儿血清中CD69+CD+4T细胞、CD69+CD+8T细胞、CD25+CD+4T细胞、CD25+CD+8T细胞含量水平较对照组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);(2)治疗后实验组患儿临床治疗有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论类风湿关节患儿血清中CD69、CD25表达水平明显增高,T细胞在关节炎病症中能够被激活,并参与全身免疫应答。

复方扶芳藤合剂影响免疫抑制小鼠CD11b^(+)单核细胞CD69的表达

目的:探讨复方扶芳藤合剂(compound fufangteng mixture,CFM)对免疫抑制小鼠脾及外周血CD11b^(+)单核细胞表面活化分子CD2、CD69及耗竭分子PD-1、CD95表达水平的影响。方法:将30只SPF级Balb/c雄性小鼠随机分为空白组(Control组)、免疫抑制模型组(CTX组)、复方扶芳藤合剂高、中、低剂量干预组(CTX+CFM-H组、CTX+CFM-M组、CTX+CFM-L组)、黄芪(astragalus particles,AP)干预组(CTX+AP组)。各组小鼠连续3 d腹腔注射环磷酰胺(CTX)70 mg/kg,遂按照分组方案分别给药10 d,末次给药24 h后取材。流式细胞术检测小鼠外周血CD11b^(+)单核细胞表面活化分子(CD2、CD69)和耗竭分子(PD-1、CD95)的表达。结果:与Control组相比,CTX+CFM-H组、CTX+CFM-M组、CTX+CFM-L组脾CD11b^(+)CD69表达水平均有改善趋势,并随着复方扶芳藤合剂剂量梯度降低。结论:复方扶芳藤合剂可调节免疫抑制小鼠脾CD11b^(+)细胞CD69的免疫功能。

ConA激活的小鼠T细胞CD69表达动力学的体内外研究

目的为明确 CD6 9体内外表达动力学并进一步探讨其作用。方法 Con A体内外刺激小鼠 T细胞后 ,选取不同时间点 ,流式细胞仪观察 T细胞 CD6 9表达率。结果 Con A刺激后 2 h CD6 9即有明显表达 ,6～ 8h达到峰值 ;CD8-与 CD8+T细胞相比无明显差异 ;体外条件对 CD6 9的表达有显著的影响。结论结果提示 CD8-和 CD8+T细胞的活化均需要 CD6 9的参与 ;T细胞可能在活化早期一过性高表达 CD6 9;CD6 9很可能是一个

结直肠癌围手术期患者外周血T淋巴细胞CD69、HLA-DR表达变化及意义

目的观察结直肠癌患者围手术期外周血T淋巴细胞CD69、HLA-DR的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用流式细胞仪检测40例结直肠癌患者(观察组)术前、术后第5、10天外周血T淋巴细胞CD69、HLA-DR的表达,并与同期检测15例健康体检者(对照组)进行比较,分析CD69、HLA-DR表达与临床病理参数的关系。结果观察组术前CD69、HLA-DR表达明显低于对照组(P<0.05),术后CD69、HLA-DR表达水平均较术前明显提高(P<0.05)。HLA-DR表达与淋巴结转移、远处转移、TNM分期有关(P<0.05),与其余临床病理参数无关(P均﹥0.05)。结论结直肠癌患者术前外周血T淋巴细胞CD69、HLA-DR表达明显降低,术后逐渐升高;检测二者表达有助于病情判断,进一步指导结直肠癌免疫治疗。

紫杉醇对小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖作用的流式细胞术分析

目的研究紫杉醇对多克隆刺激剂作用下小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖的影响,并探讨其机制。方法利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的百分率;以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDASE)标记技术结合流式细胞术分析PDB+Ion(Ionomycin)或ConA刺激下T细胞增殖指数。结果PTX无论对ConA或PDB刺激组T细胞CD69表达均无抑制作用(P>0.05),而对T细胞CD25表达有明显抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系;PTX无论对ConA或PDB+Ion刺激组T细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系。但在ConA及PDB+Ion刺激初立即或是24h后加入不同浓度的PTX,PTX抑制T细胞增殖作用无差异(P>0.05)。结论PTX可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞中后期活化及增殖,其作用机制可能与早期活化相关蛋白PTK及PKCθ无关,而与PKCθ下游活化信号相关。

TF3-H4对CD4^+CD25^+调节性T细胞和CD4^+CD25^-效应性T细胞早期活化的影响

目的观察1',2',3',7'-四氢茶黄素-3,3'-双没食子酸酯(TF3-H4)对CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞早期活化的影响,分析TF3-H4对两群功能相反的CD4+T细胞的作用。方法免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞,加入ConA或PDB,和TF3-H4共同孵育12 h后收集细胞,流式细胞仪分析细胞表面早期活化标志CD69的表达。结果在ConA和PDB的作用下,两群细胞早期活化标志CD69的表达均升高。TF3-H4(20 mg.L-1)不能抑制PKC激动剂PDB激活的CD4+CD25-效应性T细胞CD69的表达,却能抑制ConA激活的CD4+CD25-效应性T细胞CD69表达;同时,TF3-H4也能明显抑制ConA激活的CD4+CD25+调节性T细胞的CD69表达。结论茶黄素衍生物TF3-H4可能经由TCR活化途径的上游抑制CD4+CD25-效应性T细胞活化;TF3-H4对CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞早期活化的抑制作用,可能是该类化合物发挥抗炎、抗肿瘤作用的机制之一。

放线菌酮体外强烈抑制小鼠活化T淋巴细胞CD69表达

目的 :利用淋巴细胞的早期活化标记物CD6 9的表达 ,探讨放线菌酮 (CHX)对T淋巴细胞体外活化的影响 ,以进一步揭示CHX对免疫系统的影响 .方法 :分离小鼠淋巴结细胞 ,与CHX预孵 1h ,加入多克隆刺激剂继续培养 ,总计培养 2 4h后收获细胞 ,进行双色免疫荧光标记 ,以流式细胞术对T细胞的CD6 9分子表达情况进行分析 .结果 :在CHX(终浓度 10 μmol/L)作用下 ,ConA和PDB活化的T细胞CD6 9表达百分率依次为 12 33%± 4 75 %、13 0 7%± 11 0 5 %,与对照组比较均有显著差异 (P <0 0 1) .结论 :CHX(10 μmol/L)对ConA、PDB活化的T淋巴细胞均显示了强烈的抑制效应 .

ConA对CD4^+CD25^+调节性T细胞早期活化和功能的影响

目的:观察常用丝裂原ConA对CD4+CD25+调节性T细胞抑制功能的影响与早期活化标志CD69之间的关系。方法:用免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞、CD4+CD25-效应性T细胞,加入不同浓度的ConA,12 h后收集细胞,流式细胞术分析其CD69的表达。CFSE标记CD4+CD25-效应性T细胞,按2∶1比例与CD4+CD25+调节性T细胞共同培养,培养同时加ConA,3 d后流式细胞仪分析ConA对CD4+CD25+调节性T细胞抑制CD4+CD25-效应性T细胞增殖的影响。结果:ConA能剂量依赖性地升高CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞CD69的表达,对两群细胞CD69的升高表现出了相似的作用;另外,ConA在上述浓度能剂量依赖激活CD4+CD25+调节性T细胞的抑制功能。结论:ConA在体外对CD4+CD25+调节性T细胞活化和功能具有促进作用。ConA能一定程度模拟抗原,因而可用于评价药物对调节性T细胞的活化和功能影响。