MDS与AA患者骨髓CD34^+和CD71^+CD45^-细胞水平的变化

本研究旨在观察MDS和AA患者骨髓血CD34+和CD71+CD45-细胞数的变化。2010年1月至2013年10月在河北联合大学附属医院血液科门诊和住院的25例初治MDS和43例AA患者(其中SAA 18例,NSAA 25例)纳入本研究。对所有患者均进行血常规、骨髓涂片、骨髓活检、染色体核型分析以及骨髓血细胞免疫分型检测(主要是CD34+、CD71+CD45-细胞占有核细胞的比例);比较CD34+和CD71+CD45-细胞在MDS组、AA(SAA、NSAA)组中的变化;比较MDS和NSAA组CD71+CD45-细胞数≥15%或<15%有核细胞数的患者的外周血白细胞数、血小板数和血红蛋白含量的差异。结果表明,MDS组CD34+数明显高于AA组、NSAA组和SAA组(P<0.05);MDS组CD71+CD45-细胞数明显高于SAA组(P<0.05),MDS组与NSAA组间差异无统计学意义。CD71+CD45-≥15%的MDS组外周血小板数明显高于NSAA组(P<0.05);而CD71+CD45-<15%的MDS组白细胞、血小板数和血红蛋白含量与NSAA组比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:MDS组CD34+细胞数显著高于AA组和SAA组。MDS组CD71+CD45-细胞数显著高于SAA组。CD71+CD45-细胞≥15%的MDS组外周血小板数显著高于NSAA组。

慢性高原病患者骨髓CD71^+、CD235a^+有核红细胞增殖及凋亡变化

目的观察慢性高原病(CMS)患者骨髓CD71^+、CD235a^+有核红细胞增殖、凋亡变化。方法提取16例CMS患者(CMS组)及16例单纯陈旧性骨折患者(对照组)骨髓单个核细胞(BMMNCs),用免疫磁珠法分选CD71^+、CD235a^+有核红细胞。用CCK-8法检测骨髓CD71^+、CD235a^+有核红细胞增殖能力,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术测算细胞凋亡率,集落形成实验测算骨髓CD71^+、CD235a^+有核红细胞及BMMNCs克隆形成率。结果与对照组比较,CMS组骨髓CD71^+、CD235a^+有核红细胞增殖能力升高,凋亡率降低(P均<0.05)。培养第7、14天,两组骨髓CD71^+、CD235a^+有核红细胞克隆形成率比较,P均>0.05;两组BMMNCs克隆形成率比较,P均<0.05。结论 CMS患者骨髓CD71^+、CD235a^+有核红细胞增殖增加、凋亡减少。

PD98059对高原红细胞增多症患者骨髓CD71^+、CD235a^+有核红细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究Ras/Raf/MEK/ERK信号通路蛋白激酶MEK特异性抑制剂PD98059对高原红细胞增多症(HAPC)患者骨髓CD71^+、CD235a^+有核红细胞增殖和凋亡影响及HAPC发病机制。方法:采用免疫磁珠法分选16例HAPC患者及16例对照者骨髓CD71^+、CD235a^+有核红细胞,分别加入5、10和20μmol/L不同浓度PD98059及DM SO溶剂,低氧培养72 h,以Annexin V和PI双染流式细胞术测定细胞凋亡,CCK8检测细胞增殖。同时观察加入5、10和20μmol/L等不同浓度PD98059及DMSO溶剂对骨髓单个核细胞(BMMNC)红系集落形成能力。结果:HAPC患者骨髓CD71^+、CD235a^+有核红细胞凋亡率随PD98059浓度增加上升(r=0.807,P<0.01);增殖率随PD98059浓度增加而下降(r=0.502,P<0.01)。HAPC患者骨髓BM M NC红系集落形成率随PD98059浓度增加而下降(r=0.504,P<0.01),7和14 d时各组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论:M EK特异性抑制剂PD98059对HAPC患者CD71^+、CD235a^+有核红细胞具有抑制增殖、促进凋亡作用,对红细胞过度积累有一定的抑制作用。

高原红细胞增多症大鼠骨髓CD71^+细胞EpoR表达、分布变化及意义

目的观察高原红细胞增多症(HAPC)大鼠骨髓CD71+细胞促红细胞生成素受体(EpoR)表达及分布变化,并探讨其意义。方法将48只雄性SD大鼠随机分为HAPC组和对照组,每组24只。HAPC组和对照组分别在海拔4 300、2 250 m自然环境下饲养。饲养40天行血液学参数[RBC、Hb、红细胞压积(HCT)、动脉血氧饱和度(Sa O2)]和骨髓细胞分类计数检测,HAPC组RBC、Hb、HCT及红系细胞数量、中幼红细胞数量、晚幼红细胞数量均高于对照组,Sa O2低于对照组(P均<0.05),证实HAPC模型制备成功。两组均采用密度梯度离心法制备骨髓单个核细胞(MNC)悬液,CCK8法检测MNC增殖能力(以OD450表示),单层半固体培养法检测红系集落形成单位(CFU-E)数量。采用免疫磁珠分选法从两组MNC悬液中分选CD71+细胞,免疫荧光法观察细胞膜表面EpoR荧光情况,ELISA法检测细胞膜和细胞质EpoR表达,Real-time PCR法和Western blotting法检测EpoR mRNA和蛋白相对表达量。结果 HAPC组和对照组OD450分别为1.54±0.04、1.17±0.05,CFU-E数量分别为(61.25±6.84)、(12.90±4.39)个;两组比较P均<0.01。免疫荧光显微镜下可见两组细胞膜表面均有环形或半环形的绿色荧光,但HAPC组细胞膜表面EpoR荧光强度和表达EpoR荧光的细胞数量均高于对照组。HAPC组及对照组CD71+细胞膜EpoR表达分别为2.41±0.03、1.55±0.06(P<0.05);细胞质EpoR表达分别为96.39±0.42、94.49±0.65(P>0.05)。HAPC组CD71+细胞EpoR mRNA和蛋白相对表达量均高于对照组(P均<0.05)。结论 HAPC大鼠骨髓CD71+细胞EpoR表达升高,分布多集中于细胞膜表面;上述变化可能通过促进MNC及骨髓红系细胞增殖而参与HAPC的发生、发展。

CD71^(+)红细胞与新生儿感染的发病机制的关系

新生儿的免疫系统不能像成年人那样有效地控制感染,容易发生感染,传统的理论认为新生儿出生时免疫系统发育尚不成熟。最近有研究证明了新生儿容易感染并非由于新生儿免疫细胞的不成熟,而是CD71^(+)红细胞具有免疫抑制效应,CD71^(+)红细胞在人类(脐带血)和小鼠(新生儿脾脏)中具有免疫抑制活性。新生儿容易发生感染就是因为其体内含有丰富的免疫抑制CD71^(+)红细胞。除此之外,CD71^(+)红细胞在人和小鼠的胎儿母胎界面和妊娠期外周扩展,CD71^(+)红细胞在双侧(母体/胎儿)介导的免疫抑制使胎儿免于母体免疫排斥反应,使胎儿在母体耐受,防止可能导致流产或早产的潜在破坏性免疫反应。新生儿感染症状不典型,诊断困难,需要多种实验室检查协助诊断,但目前常用的检验指标很难快速准确地判断新生儿的感染状况,根据国内外的研究现状,CD71^(+)红细胞比率在新生儿感染性疾病中的表达水平增高,与CRP、血常规比较,其灵敏度、特异度高,可作为新生儿感染的早期诊断指标之一;CD71^(+)红细胞比率水平有助于指导抗生素的选择应用。本文就CD71^(+)红细胞与新生儿感染的发病机制的关系作一综述。

母体外周血液中胎儿有核红细胞的检测及比例与孕周的关系

目的探讨孕周与母体外周血液中胎儿有核红细胞比例的关系。方法回顾性分析我院2008年2月～2011年3月收治入院的孕10～35周的孕妇80例,采用SYSMEX XE-2100血细胞计数仪对孕妇外周血中胎儿有核红细胞进行计数,并对表达转铁蛋白受体的阳性细胞(CD71+细胞)进行技术分选。另外选择我院同期健康体检未孕妇女80例和80例新生儿进行检查对比。结果妊娠组的CD71+细胞比例明显高于健康未孕组和新生儿脐血组(P<0.01)。在孕妇组中,CD71+细胞最高峰值出现于第17、18孕周。结论 SYSMEX XE-2100血细胞计数仪计数特异性、灵敏性较强。利用母体血循环中的胎儿细胞做产前诊断的最佳时间在第17、18孕周。

未成熟CD71 +红细胞免疫功能研究进展

红细胞的主要功能是氧气运输,但其与机体免疫也存在密切关系。越来越多的证据表明不成熟的红细胞在疾病,特别是肿瘤的发展过程中,具有重要作用。本文就未成熟CD71+红细胞在生理和病理等状态下发挥的免疫调控作用研究进展作一综述。

慢性高原病患者骨髓CD71＋有核红细胞凋亡和细胞色素C及线粒体膜电位的变化

目的探讨慢性高原病（CMS）患者骨髓CD71＋有核红细胞凋亡和细胞色素c（Cyt—C）及线粒体膜电位（MMP）的变化情况。方法以14例CMS患者及15例单纯陈旧性骨折患者分别为CMS组和对照组，提取骨髓单个核细胞（BMMNC），CD71单克隆抗体标记、AnnexinV—FITC／PI染色，流式细胞术检测CD71＋有核红细胞的凋亡指数，磁珠分选法分选CD71＋有核红细胞并以RT—qPCR检测Cyt—CmRNA的表达水平；JC-1染色流式细胞术检测CD71＋有核红细胞MMP。结果CMS组骨髓CD71＋有核红细胞凋亡指数为（1．9±1．4）％明显低于对照组（3．2±1．5）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。CMS组Cyt—CmRNA表达水平（0．72±0．14）明显低于对照组（1．00±0．15），差异有统计学意义（P〈0．01）。CMS组MMP（5．0±2．2）明显高于对照组（3．3±0．9），差异有统计学意义（P〈0．05）。CMS患者骨髓CD71＋有核红细胞凋亡指数与血红蛋白水平呈负相关（r=-0．569，P=0．034），凋亡指数、MMP及Cyt—CmRNA间未发现明显相关性。结论CMS患者骨髓CD71＋有核红细胞凋亡指数下降，且与血红蛋白水平呈负相关，说明有核红细胞凋亡下调可能与CMS红细胞积累有关；CD71＋有核红细胞MMP增高，Cyt—CmRNA相对表达水半明显降低，提示线粒体通路变化参与CMS患者骨髓CD71＋有核红细胞凋亡下降机制，而CD71＋有核红细胞凋亡指数、MMP、Cyt—CmRNA水平之间没有发现明显的相关性，提示CMS造血细胞凋广机制的复杂性。

HIV-1感染者外周血增加的CD71^(+)红系细胞特点及临床意义

目的探讨HIV-1感染者外周血CD71^(+)红系细胞的特点及其与疾病进展的关系。方法通过流式细胞术检测HIV-1感染者外周血CD71^(+)红系细胞,分析其与HIV-1 RNA、CD4细胞计数、CD4/CD8细胞比值的相关性。结果入组10例健康对照(HCs)和49例HIV-1感染者,后者包括28例未接受过ART者(TNs)和21例免疫重建成功患者(CRs)。与HCs组(平均值0.69%)相比,TNs组患者CD71^(+)红系细胞频率明显升高(平均值2.79%)。CRs组患者经ART后,CD71^(+)红系细胞频率降低(平均值1.18%),但是未恢复到正常水平。TNs组患者CD71^(+)红系细胞频率与病毒载量呈显著正相关(r=0.503 4,P=0.006 3),与CD4/CD8细胞比值呈明显负相关(r=-0.464 0,P=0.012 9)。与HCs(平均值158 g/L)相比,TNs组患者外周血血红蛋白含量明显降低(平均值149 g/L);CRs组患者经ART后,血红蛋白含量升高(平均值154 g/L),并且恢复到正常水平;TNs组患者CD71^(+)红系细胞频率与血红蛋白含量呈明显负相关(r=-0.462 5,P=0.013 2)。与HCs(平均值53.84%)相比,TNs组患者CD71^(+)红系细胞活性氧(ROS)表达水平明显升高(平均值66.64%);CRs组患者经ART后,CD71^(+)红系细胞表达ROS显著降低(平均值43.82%),并且降至正常水平。结论HIV-1感染导致外周血CD71^(+)红系细胞频率升高,并且与疾病进展和血红蛋白的降低密切相关。