白细胞介素-38对乳腺癌患者CD8^(+)T淋巴细胞功能的影响

目的探讨白细胞介素-38(IL-38)在乳腺癌患者中的表达及其对CD8^(+)T细胞功能的调控作用。方法纳入2020年7月—2022年9月在新乡医学院第一附属医院就诊的44例乳腺癌患者、25例乳腺良性肿瘤患者和20例对照者。分离所有受试者的血浆和外周血单个核细胞,分离乳腺癌患者肿瘤组织中的肿瘤浸润淋巴细胞,纯化CD8^(+)T细胞。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-38蛋白水平,应用实时定量PCR检测组织IL-38 mRNA相对表达量。使用重组人IL-38刺激乳腺癌患者外周血和肿瘤组织分离的CD8^(+)T细胞,建立CD8^(+)T细胞与乳腺癌细胞系MCF-7的共培养系统,通过测定乳酸脱氢酶水平计算靶细胞死亡比例,ELISA法检测培养上清中穿孔素、颗粒酶B、干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,流式细胞术检测CD8^(+)T细胞的免疫检查点分子表达。结果乳腺癌患者血浆IL-38水平(74.23±19.88 pg/mL)高于乳腺良性肿瘤患者(62.87±16.27 pg/mL,P=0.018)和对照者(61.77±12.75 pg/mL,P=0.013)。乳腺癌患者肿瘤组织中IL-38 mRNA相对表达量显著高于癌旁组织(1.57±0.22 vs.1.00±0.18,P<0.001)。外周血和肿瘤浸润CD8^(+)T细胞诱导靶细胞死亡比例、穿孔素和颗粒酶B分泌在直接接触共培养组中的水平高于间接接触共培养组(P<0.05),但干扰素-γ和TNF-α分泌水平在直接接触共培养组和间接接触共培养组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。在直接接触共培养组内,靶细胞死亡比例、穿孔素、颗粒酶B、干扰素-γ、TNF-α在IL-38刺激组中的水平低于无刺激组(P<0.05)。在间接接触共培养组内,靶细胞死亡比例、干扰素-γ、TNF-α在IL-38刺激组中的水平亦低于无刺激组(P<0.05),但穿孔素和颗粒酶B水平在间接接触共培养组内的IL-38刺激组和无刺激组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。CD8^(+)T细胞中免疫检查点分子表达水平在无刺激组和IL-38刺激组之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌患者中高表达的IL-38可能参与诱导CD8^(+)T细胞功能衰竭。

富含萝卜硫素的西兰花提取物对小鼠外周血CD8^(+)T淋巴细胞活化及肠道菌群的影响

目的:探讨富含萝卜硫素(SFN)的西兰花提取物对小鼠肠道菌群及外周血CD8^(+)T淋巴细胞活化的影响。方法:将15只C57BL/6N小鼠随机分为空白对照(CON)组、阴性对照(NC)组和SFN组,每组5只小鼠,分别给予蒸馏水、不含SFN的西兰花提取物、含0.3 g/L SFN的西兰花提取物125μL灌胃,连续4周。每2 d测量1次体重。实验结束前采集小鼠外周血检测活化的CD8^(+)T淋巴细胞百分比以及CD8^(+)T淋巴细胞中IL-2、TNF-α的含量。收集小鼠粪便,进行肠道菌群分析。结果:3组小鼠不同时间点体重差异无统计学意义(P>0.05)。SNF组小鼠外周血活化的CD8^(+)T淋巴细胞百分比、CD8^(+)T淋巴细胞中IL-2和TNF-α含量高于CON组和NC组(P<0.05)。3组小鼠肠道菌群组成存在差异,SFN组小鼠肠道中疣微菌门及阿克曼菌属的相对丰度高于CON组和NC组(P<0.05)。肠道中阿克曼菌属的相对丰度与CD8^(+)T淋巴细胞中IL-2和TNF-α含量呈正相关(r=0.934和0.664,P<0.05)。结论:长期连续服用富含SFN的西兰花提取物能增加小鼠肠道中阿克曼菌属等有益菌的丰度,同时可增强外周血CD8^(+)T淋巴细胞的功能。

艾滋病合并结核病对CD8^(+)T淋巴细胞的影响

目的探讨艾滋病(AIDS)合并结核病(TB)对CD8^(+)T淋巴细胞的影响。方法将单纯人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者、单纯TB患者、HIV感染合并TB者各200例分别作为HIV组、TB组、HIV/TB组,分析各组血清CD8^(+)T细胞及CD4^(+)T细胞变化。结果三组CD8^(+)T细胞水平比较呈现HIV组>HIV/TB组>TB组,且组间差异有统计学意义(χ2=128.779,P<0.001)。HIV/TB组、HIV组CD8^(+)T细胞水平较正常水平升高(ZHIV/TB=8.343,PHIV/TB<0.001;ZHIV=7.988,PHIV<0.001),而TB组CD8^(+)T细胞较正常水平明显下降(ZTB=8.682,PTB<0.001)。三组CD4^(+)T细胞水平均较正常下降(ZHIV=11.088,PHIV<0.001;ZTB=5.562,PTB<0.001;ZHIV/TB=12.077,PHIV/TB<0.001)。按照CD4^(+)T细胞计数进行分层分析发现,当CD4^(+)T细胞计数≤100 cells/μL时,三组CD8^(+)T细胞水平比较:HIV组>TB组,HIV组>HIV/TB组,且HIV/TB组CD8^(+)T细胞水平较正常显著下降(Z0-100=1.604,P0-100=0.109);当CD4^(+)T细胞≥101 cells/μL时,CD8^(+)T细胞三组比较:HIV/TB组>TB组,HIV组>TB组;当CD4^(+)T细胞>500 cells/μL,三组CD8^(+)T细胞水平均在正常范围内。三组CD8^(+)T细胞与CD4^(+)T细胞变化趋势的差异分析结果提示,以HIV组为参照,随着CD4^(+)T细胞计数的下降,TB组、HIV/TB组的CD8^(+)T细胞均比HIV组下降趋势更明显,差异有统计学意义(斜率分别为0.344和0.216,P<0.001)。结论随着CD4^(+)T细胞的下降,HIV感染合并TB和TB均可导致CD8^(+)T细胞下降,且TB的CD8^(+)T细胞下降更加显著。

CD4^(+)CD8^(-)T细胞大颗粒淋巴细胞白血病的临床分析

目的:探讨CD4^(+)CD8^(-)T细胞大颗粒淋巴细胞白血病(T-LGLL)患者的临床特征及诊疗方案。方法:报告1例CD4^(+)CD8^(-)T-LGLL患者的临床表现、诊断及治疗情况,并结合文献进行回顾性分析。结果:患者为老年女性(70岁),临床进展缓慢,以血小板减少为主要表现,骨髓增生较低下,血涂片以大颗粒淋巴细胞为主,免疫分型及T细胞克隆重排符合T-LGLL应用环磷酰胺50 mg/d联合泼尼松(后逐渐减停)治疗,达到部分缓解(PR)。结论:CD4^(+)CD8^(-)T细胞大颗粒淋巴细胞白血病临床上极为罕见,与CD4^(-)CD8^(+)T-LGLL临床表现存在差异。

肾透明细胞癌来源的IL4I1介导PD1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞募集的相关研究

目的:探讨肾透明细胞癌(ccRCC)来源的白细胞介素4诱导蛋白1(IL4I1)对表达PD1的CD8^(+)肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的诱导与募集作用。方法:利用公共数据库分析ccRCC组织中IL4I1的表达与CD8^(+)T淋巴细胞浸润及免疫功能相关分子表达的关系,通过免疫组织化学法进行验证;构建过表达IL4I1蛋白的769P细胞系并验证;荧光定量PCR(qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测过表达IL4I1 ccRCC细胞表达趋化因子的变化。结果:高表达IL4I1的ccRCC组织中有更多的CD8^(+)T淋巴细胞浸润(P=6.843×10^(-7)),其浸润水平与IL4I1的表达水平呈正相关(r^(2)=0.5764,P<0.001);且浸润的CD8^(+)T细胞多表达抑制型分子PD1。过表达IL4I1的ccRCC 769P细胞所表达的趋化因子配体(CCL2、CCL4、CCL5、CCL17)在mRNA水平显著下调(t=95.16、116.1、21.28、68.47,均P<0.05)。同时,细胞培养上清中CCL4、CCL5浓度明显升高(t=6.760、6.846,均P<0.05)。结论:ccRCC组织中IL4I1与PD1+CD8^(+)T淋巴细胞浸润密切相关,可能通过调控趋化因子的表达,参与免疫抑制型CD8^(+)T淋巴细胞在肿瘤局部的募集。

髓母细胞瘤分子亚型中CD8+T淋巴细胞浸润的临床病理特点

目的:研究CD8+T细胞在髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)各个分子亚型中的浸润特点,分析CD8+T细胞浸润与患者预后的关系,以及C-X-C基序趋化因子11(C-X-C motif chemokine ligand 11)的表达及其受体CXCR3在CD8+T细胞中的表达情况,为进一步探索MB中CD8+T细胞浸润可能的调节机制提供临床病理依据。方法:筛选2012—2019年间来自多所医学中心、具有完整临床资料的MB患者共48例(4个分子亚型各12例),利用NanoString PanCancer IO360 TM基因表达检测平台对48例MB患者的肿瘤标本进行转录组学分析,对患者肿瘤组织的石蜡切片进行CD8免疫组织化学染色分析,验证各亚型MB中CD8+T细胞数量的差异。通过数据库生物信息学分析,探讨CD8+T细胞浸润与患者预后的关系及各种趋化因子在各亚型MB中的表达差异,并采用双重免疫荧光染色验证MB中CD8+T细胞表面CXCR3受体的表达情况,探讨CD8+T细胞浸润至肿瘤内的可能分子机制。结果:MB的WNT亚型中的CD8+T细胞特征指数相对较高,提示WNT亚型中的CD8+T细胞数量显著高于其他三个亚型,这一现象通过CD8免疫组织化学染色方法以及R2在线数据分析平台对美国基因表达数据库Gene Expression Omnibus(GEO)进行数据挖掘得到了证实,且CD8+T细胞增多与患者的生存期呈正相关。数据库分析显示,CXCL11在WNT亚型MB中的表达量明显高于其他三个亚型。免疫荧光染色结果显示,CD8+T细胞表面存在CXCL11的受体CXCR3,提示CD8+T细胞可能通过表面受体CXCR3受CXCL11趋化至MB的微环境中。结论:CD8+T细胞在WNT亚型MB中的浸润相对多于其他亚型,其机制可能与CXCL11-CXCR3趋化因子系统的激活相关,且肿瘤内CD8+T细胞浸润较多的患者预后较好,此结果可能为MB中CD8+T细胞浸润调节机制提供有益的临床病理依据,为未来MB的免疫治疗提供新的潜在治疗靶点。

外周血CD8^(+)T淋巴细胞数量与Ⅲ期结直肠癌患者术后无病生存期的关系

目的:探讨结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者外周血CD8^(+)T淋巴细胞数量与术后无病生存期(disease-free survival,DFS)的关系。方法:选择2019-01-01至2021-12-31河北中石油中心医院临床分期为Ⅲ期的81例CRC患者为研究对象,入组患者均监测术前、术后首次辅助化疗前、术后辅助治疗结束三个节点的外周血CD8^(+)T淋巴细胞数量,并统计临床、病理资料。随访至2022-12-31,记录患者手术时间、出现局部复发或远处转移的时间或死亡时间。采用二元Logistic回归模型进行多因素分析,筛选入组患者肿瘤进展的独立危险因素;依据入组患者三个节点CD8^(+)T淋巴数量变化特点进行分组,采用Kaplan-Meier法绘制各组的生存曲线。结果:多因素分析显示pT4(OR=11.647,95%CI为2.255~60.166,P=0.003),CEA数值(OR=1.044,95%CI为1.010~1.079,P=0.011)是入组患者肿瘤进展的独立危险因素;术后首次辅助化疗前CD8^(+)T淋巴细胞数量(OR=0.973,95%CI为0.951~0.997,P=0.025)是入组患者的独立保护因素。依据三个节点监测CD8^(+)T淋巴数量变化特点进行分组的生存分析显示:CD8^(+)T淋巴细胞数量持续升高患者组(Ⅰ组)的中位无病生存期(mDFS)未达到;CD8^(+)T淋巴细胞数量先升高,再下降患者组(Ⅱ组)mDFS为(28.9±2.7)个月,95%CI为23.6~34.2个月;CD8^(+)T淋巴细胞数量先下降,再升高患者组(Ⅲ组)mDFS为(27.2±2.2)个月,95%CI为22.9~31.5个月;CD8^(+)T淋巴细胞数量持续下降患者组(Ⅳ组)mDFS为(22.8±3.5)个月,95%CI为15.9~29.7个月。Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组的mDFS无统计学区别,Ⅰ组与其他三组的mDFS存在统计学差别,Log-rank P=0.026。结论:Ⅲ期CRC患者术后首次辅助化疗前的CD8^(+)T淋巴细胞总数越高,患者的DFS越长,预后越好;在Ⅲ期CRC患者治疗全程动态监测CD8^(+)T淋巴细胞总数,持续升高的患者DFS要明显优于其他患者。

血清CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值结合MRA与 脑梗死再发的关系研究

目的探讨血清CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值结合磁共振血管造影(MRA)与脑梗死再发的相关性及预测作用。方法选取镇江市第一人民医院2021年1月至2022年2月收治的急性脑梗死患者153例,测定患者CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值,MRA评估血管狭窄评分、侧支循环充盈评分,对患者进行1年随访,其中34例脑梗死再发患者作为脑梗死再发组,107例脑梗死未再发患者作为脑梗死未再发组,排除其他各种原因失访12例患者,并绘制各指标用于预测患者脑梗死再发的受试者工作特征(ROC)曲线。结果脑梗死再发组CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值明显高于脑梗死未再发组(P<0.05);脑梗死再发组血管狭窄评分、侧枝循环充盈评分均低于脑梗死未再发组(P<0.05)。患者脑梗死再发与CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值、血管狭窄评分、侧枝循环充盈评分均有关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值、血管狭窄评分、侧枝循环充盈评分预测患者脑梗死再发的曲线下面积(AUC)分别为0.975、0.889、0.935,三者联合预测患者脑梗死再发的AUC为0.994,显著高于各指标单独预测患者脑梗死复发的AUC。结论血清CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值结合MRA血管狭窄评分、侧支循环充盈评分诊断脑梗死再发效能较高,对脑梗死再发具有预测价值。

外周血NLR联合CD8^(+)T淋巴细胞对乳腺癌患者保乳术后复发的预测价值

目的分析外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)联合CD8^(+)T淋巴细胞对乳腺癌患者保乳术后复发的预测价值。方法选择宝鸡市妇幼保健院2016年2月至2019年2月就诊的乳腺癌患者106例,年龄(45.82±9.57)岁,肿瘤最大径(2.37±0.85)cm,所有患者均接受保乳手术治疗。术后随访5年,根据复发情况分为复发组与非复发组。对比复发组与非复发组外周血CD8^(+)、NLR水平及临床资料,分析乳腺癌保乳术后复发的影响因素,外周血CD8^(+)、NLR水平及二者联合对乳腺癌保乳术后复发的预测价值。采用t检验、χ^(2)检验、Fisher确切概率法,影响因素分析采用logistic回归模型。结果随访5年,106例患者中失访3例,随访率为97.17%(103/106),复发12例,复发率为11.65%(12/103),未复发91例(88.35%,91/103)。复发组外周血CD8^(+)水平低于非复发组[(23.17±3.36)%比(29.45±4.23)%],复发组外周血NLR水平高于非复发组[(2.64±0.39)比(1.72±0.24)],两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。复发组淋巴结转移例数占比高于非复发组[58.33%(7/12)比24.18%(22/91)],复发组术后足程放疗、术后规范化疗例数占比低于非复发组[25.00%(3/12)比93.41%(85/91)、33.33%(3/12)比89.01%(81/91)],两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。logistic回归分析结果显示,外周血CD8^(+)降低(OR=0.285,95%CI 0.125~0.647)、外周血NLR升高(OR=4.175,95%CI 1.835~9.796)、淋巴结转移(OR=5.013,95%CI 2.204~11.403)、术后无足程放疗(OR=0.255,95%CI 0.112~0.579)为乳腺癌保乳术后复发的影响因素(均P<0.05)。外周血CD8^(+)、NLR水平及二者联合预测乳腺癌保乳术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.799、0.844、0.905,二者联合的AUC更高(P<0.05)。结论外周血CD8^(+)T淋巴细胞、NLR可用于预测乳腺癌患者保乳术后复发,且二者联合的预测价值更高。

FOXP3^(+)肿瘤浸润性淋巴细胞与乳腺癌病理特征和预后的相关性研究

目的探讨FOXP3^(+)肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)与乳腺癌临床病理特征之间的相关性及其预后的意义。方法选取2009年1月至2013年5月期间首都医科大学附属北京世纪坛医院治疗的156例浸润性乳腺癌患者,采用免疫组化方法检测FOXP3^(+)和CD4^(+)的蛋白表达,记录患者的年龄、肿瘤大小、肿瘤分期、淋巴结转移情况、组织学分级、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体-2(HER-2)、Ki-67指数、无病生存(DFS)率和总生存(OS)率,探讨FOXP3^(+)TILs与临床病理特征之间的相关性,使用Kaplan-Meier曲线和Cox比例风险模型进行生存分析。结果156例浸润性乳腺癌患者的中位年龄为51岁(32~70岁),乳腺癌组织中,FOXP3^(+)高表达的患者51例(32.7%),FOXP3^(+)的表达在肿瘤的组织学分级(P=0.021)、PR(P=0.016)、HER-2(P=0.018)、Ki-67指数(P=0.042)、腋窝淋巴结转移(P=0.001)方面的差异均有统计学意义。CD4^(+)TILs的表达与所有患者的临床病理特征均无明显相关性。生存分析显示,FOXP3^(+)高表达患者的OS率低于FOXP3^(+)低表达患者的OS率(64.7%比87.6%,χ^(2)=15.3,P<0.001)。FOXP3^(+)高表达患者的DFS率也低于低表达患者的DFS率(56.9%比80.0%,χ^(2)=13.1,P<0.001),差异有统计学意义。在74例腋窝淋巴结转移阳性的患者中,FOXP3^(+)高表达患者的DFS率低于FOXP3^(+)低表达患者的DFS率,差异有统计学意义(χ^(2)=5.730,P<0.001)。在多因素Cox生存分析显示,FOXP3^(+)TILs是乳腺癌患者OS[HR=2.732(95%CI=1.174~6.207),P=0.023]和DFS[HR=2.092(95%CI=1.068~4.088),P=0.032]预后不良的独立影响因素。结论FOXP3^(+)高表达患者的OS率和DFS率均低于FOXP3^(+)低表达患者,FOXP3^(+)TILs可作为乳腺癌患者的独立不良预后因素。

肿瘤微环境中与CD8^(+)T细胞耗竭相关的分化及代谢重编程的研究进展

CD8^(+)T细胞耗竭是导致机体免疫应答减弱及恶性肿瘤复发转移的核心原因。T细胞不仅在迁移进入肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)时需要突破重重屏障,而且在浸润至肿瘤微环境的T细胞的分化及代谢过程依然受到多因素的调控,往往造成CD8+T细胞抗肿瘤活性受到抑制,进一步形成耗竭性T细胞,导致免疫逃逸。因此,研究导致T细胞耗竭的相关因素及发生机制是逆转机体低免疫应答的关键,为抗肿瘤免疫治疗提供坚实的基础及依据。该文综述了近年来关于CD8^(+)T细胞在肿瘤微环境中的浸润分化、代谢重编程及耗竭性T细胞形成的相关过程,以期为改善T细胞抗肿瘤疗效提供潜在策略。

肿瘤浸润淋巴细胞、CD8、PD-L1和CTLA-4在乳腺癌新辅助治疗效果中的预测价值

目的评估CD8、PD-L1和CTLA-4联合肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)在HER2阳性或三阴性乳腺癌(TNBC)新辅助治疗效果中的预测价值。方法回顾性分析43例接受新辅助治疗的HER2阳性或TNBC乳腺癌患者,根据Miller&Payne(MP)分级评估系统评估乳房原发灶的新辅助治疗效果。经苏木精-伊红染色评估肿瘤基质内TILs,使用免疫组织化疗染色法评估CD8、PD-L1和CTLA-4表达。结果CD8高表达组与低表达组、PD-L1高表达组与低表达组病理完全缓解(bpCR)差异均有统计学意义(均P<0.05),TILs和CTLA-4高表达组与低表达组bpCR差异均无统计学意义(均P>0.05)。CD8高表达T细胞在HER2阳性乳腺癌中占61.3%(19/31),而在TNBC中占75%(9/12)。PD-L1高表达在HER2阳性乳腺癌中占25.6%(8/31),在TNBC中占75%(9/12)。在HER2阳性乳腺癌中,5例CD8高表达且PD-L1高表达的乳腺癌患者经新辅助治疗后MP分级均为5级,全部获得bpCR。而在TNBC中,仅50%(4/8)CD8高表达且PD-L1高表达患者的新辅助治疗疗效评估为MP分级5级。结论CD8、PD-L1可以作为乳腺癌新辅助治疗疗效反应的潜在预测指标,尤其在HER2阳性乳腺癌中,CD8高表达且PD-L1高表达的乳腺癌患者经新辅助治疗后更易获得bpCR。

乳腺癌切片CD8^(+)T细胞表达水平及肿瘤浸润淋巴细胞与患者病理特征的关系

目的检验乳腺癌切片CD8^(+)T细胞的表达水平,探讨肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)与乳腺癌患者病理特征之间的关联。方法选取2020年10月至2022年10月陇南市第一人民医院收治的84例乳腺癌确诊患者为研究对象,所有患者均顺利完成手术治疗,且术后石蜡标本保存完好。采用免疫组化法检测乳腺癌切片中CD8^(+)T细胞表达情况,对切片进行伊红染色(HE)法并检测TIL水平,分析CD8+T细胞表达水平、TIL检测结果与患者病理特征之间的关系。结果TIL高水平、低水平患者的肿瘤分化程度、TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移、人表皮生长因子受体2(HER-2)受体阳性等指标差异均无统计学意义(均P>0.05),CD8^(+)T阳性与CD8^(+)T阴性患者的肿瘤分化程度、TNM分期、肿瘤大小差异有统计学意义(均P<0.05)。经Logistic回归分析,CD8^(+)T细胞表达水平与乳腺癌患者的肿瘤分化程度、TNM分期之间存在关联(均P<0.05)。结论TIL检测结果与乳腺癌病理特征间无明显相关性,但乳腺癌切片中CD8^(+)T细胞表达情况与TNM分期、肿瘤分化程度有关,临床应予以关注。

癸酸能够活化CD8^(+)T细胞并提高其抗肿瘤免疫反应能力

目的:探究中链脂肪酸癸酸对CD8^(+)T细胞活化的影响,及其对CD8^(+)T细胞介导的抗肿瘤免疫反应的作用和机制。方法:建立C57BL/6小鼠黑色素瘤B16F10皮下荷瘤模型,随机分为癸酸组(10 mg/kg癸酸灌胃)和对照组(等量溶剂灌胃),观察癸酸对小鼠肿瘤生长以及生存率的影响,采用流式细胞术检测肿瘤微环境中浸润CD8^(+)T细胞的活化水平。建立B16F10-OVA和OT-I T细胞共培养体系,采用流式细胞术检测癸酸对CD8^(+)T细胞的肿瘤细胞杀伤能力的影响。采用α-CD8抗体清除B16F10荷瘤小鼠体内CD8^(+)T细胞,观察对小鼠肿瘤体积的影响。小鼠原代CD8^(+)T细胞经癸酸处理后,采用WB、ELISA及qPCR、流式细胞术检测T细胞受体(TCR)活化、效应细胞因子产生以及增殖和代谢水平。在B16F10荷瘤小鼠模型中,观察α-PD-1抗体联合癸酸给药对小鼠肿瘤生长以及生存率的影响。结果:在小鼠黑色素瘤荷瘤模型中,与对照组相比,癸酸组小鼠移植瘤体积显著降低且生存率显著提高(均P<0.05),肿瘤浸润CD8^(+)T细胞IFN-γ和TNF-α的表达水平显著升高(P<0.01)。经癸酸处理的OT-I T细胞对B16F10-OVA细胞的杀伤水平显著升高(P<0.01)。在荷瘤小鼠模型中用α-CD8抗体清除CD8^(+)T细胞后,癸酸对移植瘤的抑制作用显著降低(P<0.0001)。小鼠原代CD8^(+)T细胞经癸酸处理后,TCR活化水平显著升高、细胞因子IL-2和IFN-γ的产生增多、线粒体代谢水平显著上调(均P<0.05)。在黑色素瘤荷瘤小鼠模型中,癸酸与α-PD-1抗体联用,能够显著抑制小鼠移植瘤生长并提高其生存率(均P<0.05)。结论:癸酸能够促进CD8^(+)T细胞活化、增强其抗肿瘤免疫反应能力。

双氢青蒿素对非小细胞肺癌细胞诱导的CD8^(+)T细胞抗肿瘤免疫应答的影响

目的探讨青蒿素衍生物双氢青蒿素(DHA)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞诱导的CD8^(+)T细胞抗肿瘤免疫功能的调控作用。方法将NSCLC细胞系A549细胞分为二甲基亚砜(DMSO)对照组和DHA处理组;分别用DMSO和不同浓度的DHA(25、50和100μmol/L)处理A549细胞,根据半抑制浓度(IC 50)选择最适浓度的DHA处理A549细胞0、24、48、72 h;CCK-8法和集落形成实验检测DHA对A549细胞增殖和集落形成能力的影响;密度梯度离心法分离健康个体外周血单个核细胞(PBMC),经黏附贴壁法去除单核细胞,随后与丝裂霉素C预处理的A549细胞按照10∶1比例共培养,2周后采用流式细胞术分别检测CD8^(+)T细胞比例及其穿孔素和颗粒酶B的表达水平。结果与对照组相比,25、50和100μmol/L DHA处理24 h后的A549细胞增殖的抑制率均升高(P<0.01);DHA对A549细胞的IC 50为46.26μmol/L;依据IC 50浓度检测50μmol/L DHA处理A549细胞0、24、48、72 h的细胞抑制率分别为1.53%、53.50%、63.84%和69.91%,分别与前一观察时间点即0、24和48 h相比,细胞抑制率均增高(P<0.01);集落形成实验结果显示,与对照组相比,DHA处理组的A549细胞集落形成数减少(P<0.01);流式细胞术结果显示,与对照组相比,DHA预处理组的A549细胞在共培养体系中诱导的CD8^(+)T细胞的比例、表达穿孔素和颗粒酶B的CD8^(+)T细胞比例均更高(P<0.01)。结论DHA能够抑制NSCLC细胞生长,促进NSCLC细胞诱导的CD8^(+)T细胞抗肿瘤免疫应答。

外周血CD8+T淋巴细胞水平和CTC表达对Ⅲ期结直肠癌根治性术后辅助放化疗患者预后的影响

目的探究外周血群集分化8阳性细胞(cluster of differentiation 8-positive cells,CD8+)T淋巴细胞水平和循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)表达对Ⅲ期结直肠癌根治性术后辅助放化疗患者预后的影响。方法选取我院进行治疗的Ⅲ期结直肠癌根治性术后辅助放化疗患者156例作为本次研究对象,对患者进行为期6个月的随访,根据患者在随访期内是否复发进行分组:未复发组112例,复发组44例,对患者术后1 d的T淋巴细胞亚群水平进行检测,并对其CTC表达水平进行检测,探究CTC表达阳性率与患者临床病理特征间的关系,并探究上述指标对患者预后的预测价值。结果与未复发组相比,复发组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较低,但CD8+水平较高(P<0.05)。测定患者外周血中CTC表达情况,未复发组CTC计数为(2.56±0.87)个,复发组CTC计数为(6.68±2.74)个,差异有统计学意义(t=9.782,P<0.05)。患者CTC表达与患者的性别、年龄、淋巴结是否转移、组织分化程度无关(P>0.05)。采用ROC曲线分析T淋巴细胞亚群水平及CTC表达对患者复发的预测价值,CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及CTC表达对患者术后复发曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.852、0.703、0.712、0.747、0.920,对上述指标联合应用对患者的复发情况进行预测,其AUC值为0.954。结论患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低表达,CD8+及CTC高表达会增加Ⅲ期结直肠癌根治性术后辅助放化疗患者术后复发概率,且各指标联合检测对患者预后结局具有一定预测价值。

结直肠癌肿瘤微环境中CD8^(+)T细胞研究进展

结直肠癌(CRC)在全球的发病率逐年上升,是全球最常见的消化道恶性肿瘤之一。CD8^(+)T细胞是CRC肿瘤免疫中的主要效应细胞,也是免疫治疗主要靶细胞,对CRC患者的治疗和预后具有重要影响。但由于肿瘤微环境中各种细胞、细胞因子、代谢产物的抑制作用,CD8^(+)T细胞常常处于功能失活状态。因此,了解CD8^(+)T细胞与CRC肿瘤微环境中的相互作用对研发更加有效的治疗策略十分必要。文章就此领域的研究进展做一综述。

CT影像组学对T_(1)期非小细胞肺癌中CD8^(+)T淋巴细胞浸润程度的分析

目的探讨CT影像组学对于T_(1)期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者中CD8^(+)T淋巴细胞浸润程度的预测价值。方法选取113例T_(1)期NSCLC患者,根据CD8^(+)T淋巴细胞浸润程度分为高浸润组(58例)及低浸润组(55例),比较组间临床特征。按照8∶2比例随机分为训练集及验证集,提取CT影像组学特征并构建影像组学模型及临床-影像组学模型。通过受试者工作特征曲线(ROC)的曲线下面积(AUC)评价模型的预测性能。结果年龄在CD8^(+)T淋巴细胞高浸润组与低浸润组间差异有统计学意义(P<0.05)。构建的影像组学模型在验证集AUC值为0.77,准确度为78.0%,灵敏度为64.0%,特异度为82.0%。将年龄与影像组学模型联合构建临床-影像组学模型,该模型验证集的AUC值为0.71,准确度为75.0%,灵敏度为73.0%,特异度为73.0%。结论影像组学模型对T_(1)期NSCLC患者中CD8^(+)T淋巴细胞浸润程度具有良好的预测性能。

结肠癌患者肿瘤浸润淋巴细胞表型与临床病理特征和肠道菌群的关系研究

目的探究结肠癌患者肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)表型与临床病理特征和肠道菌群的关系。方法选取2017年6月至2023年2月湖北省十堰市太和医院收治的76例结肠癌患者为结肠癌组,并选择同期体检的76例健康人为对照组。检测两组受试者TIL表型表达水平,荧光定量PCR检测肠道菌群,收集结肠癌患者临床病理资料。采用Spearman分析TIL表型与肠道菌群的相关性。结果与对照组相比,结肠癌组CD4^(+)T细胞水平显著升高[(28.05±5.48)%比(32.49±6.13)%],CD3^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞水平显著降低[(60.47±6.53)%比(53.17±6.37)%]、[(30.69±6.38)%比(24.85±6.42)%](P<0.05)。根据结肠癌患者CD3^(+)T细胞(52.62%)、CD8^(+)T细胞(25.87%)、CD4^(+)T细胞(31.94%)的中位值,将其分为CD3^(+)T细胞高表达38例,CD3^(+)T细胞低表达38例,CD8^(+)T细胞高表达38例,CD8^(+)T细胞低表达38例,CD4^(+)T细胞高表达38例,CD4^(+)T细胞低表达38例。有淋巴结转移、肿瘤分化程度越高、TNM分期越高,在CD3^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞高表达、低表达患者间差异有统计学意义(χ2=5.330、4.659、6.786;χ2=7.962、10.483、4.343;χ2=11.120、7.280、13.300;P<0.05)。与对照组相比,结肠癌组脆弱拟杆菌、大肠埃希菌、肠球菌数量显著增加[(6.58±0.83)lgN/g比(8.59±1.36)lgN/g]、[(7.36±1.04)lgN/g比(9.73±1.25)lgN/g]、[(7.21±1.08)lgN/g比(9.28±1.74)lgN/g],乳酸杆菌、双歧杆菌数量显著下降[(8.85±1.46)lgN/g比(6.34±1.22)lgN/g]、[(8.94±1.09)lgN/g比(6.17±1.32)lgN/g](P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,结肠癌患者脆弱拟杆菌、大肠埃希菌、肠球菌与CD3^(+)、CD8^(+)T细胞占比呈负相关(r=-0.482、-0.459、-0.532,P<0.05;r=-0.438、-0.472、-0.508,P<0.05),乳酸杆菌、双歧杆菌与CD3^(+)、CD8^(+)T细胞占比呈正相关(r=0.581、0.507,P<0.05;r=0.536、0.467,P<0.05),脆弱拟杆菌、大肠埃希菌、肠球菌与CD4^(+)T细胞占比呈正相关(r=0.483、0.495、0.461,P<0.05),乳酸杆菌、双歧杆菌与CD4^(+)T细胞占比呈负相关(r=-0.563、-0.579,P<0.05)。结论结肠癌患者TIL中表型CD3^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞与临床病理特征和肠道菌群存在一定关系。

S180腹水癌小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中CD4^+CD25^+Treg细胞在肿瘤逃逸中的作用

目的:研究肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中CD4+CD25+Treg细胞及免疫监视功能的变化,探讨CD4+CD25+Treg细胞在肿瘤免疫逃逸中的作用。方法:建立小鼠S180腹水癌模型,采集S180腹水癌小鼠TIL、脾脏细胞及对照组小鼠脾脏细胞,采用流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞、CD8+T细胞、NK细胞的数量及NKG2D的表达水平,采用RT-PCR方法检测Foxp3 mRNA的表达水平,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CD8+T细胞的杀伤功能。结果:与对照组小鼠比较,S180腹水癌小鼠脾脏、TIL中CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达均明显增高(P<0.05),并且肿瘤组小鼠TIL中CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达较肿瘤组小鼠脾脏均明显增高(P<0.05);TIL中CD8+T细胞数量明显增高(P<0.05),其杀伤功能却有所下降;TIL中NK细胞数量及NKG2D表达均明显增高(P<0.05)。结论:肿瘤局部CD4+CD25+Treg细胞数量增加、功能增强,可能是肿瘤逃避免疫监视的机制之一。