白细胞介素-38对乳腺癌患者CD8^(+)T淋巴细胞功能的影响

目的探讨白细胞介素-38(IL-38)在乳腺癌患者中的表达及其对CD8^(+)T细胞功能的调控作用。方法纳入2020年7月—2022年9月在新乡医学院第一附属医院就诊的44例乳腺癌患者、25例乳腺良性肿瘤患者和20例对照者。分离所有受试者的血浆和外周血单个核细胞,分离乳腺癌患者肿瘤组织中的肿瘤浸润淋巴细胞,纯化CD8^(+)T细胞。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-38蛋白水平,应用实时定量PCR检测组织IL-38 mRNA相对表达量。使用重组人IL-38刺激乳腺癌患者外周血和肿瘤组织分离的CD8^(+)T细胞,建立CD8^(+)T细胞与乳腺癌细胞系MCF-7的共培养系统,通过测定乳酸脱氢酶水平计算靶细胞死亡比例,ELISA法检测培养上清中穿孔素、颗粒酶B、干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,流式细胞术检测CD8^(+)T细胞的免疫检查点分子表达。结果乳腺癌患者血浆IL-38水平(74.23±19.88 pg/mL)高于乳腺良性肿瘤患者(62.87±16.27 pg/mL,P=0.018)和对照者(61.77±12.75 pg/mL,P=0.013)。乳腺癌患者肿瘤组织中IL-38 mRNA相对表达量显著高于癌旁组织(1.57±0.22 vs.1.00±0.18,P<0.001)。外周血和肿瘤浸润CD8^(+)T细胞诱导靶细胞死亡比例、穿孔素和颗粒酶B分泌在直接接触共培养组中的水平高于间接接触共培养组(P<0.05),但干扰素-γ和TNF-α分泌水平在直接接触共培养组和间接接触共培养组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。在直接接触共培养组内,靶细胞死亡比例、穿孔素、颗粒酶B、干扰素-γ、TNF-α在IL-38刺激组中的水平低于无刺激组(P<0.05)。在间接接触共培养组内,靶细胞死亡比例、干扰素-γ、TNF-α在IL-38刺激组中的水平亦低于无刺激组(P<0.05),但穿孔素和颗粒酶B水平在间接接触共培养组内的IL-38刺激组和无刺激组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。CD8^(+)T细胞中免疫检查点分子表达水平在无刺激组和IL-38刺激组之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌患者中高表达的IL-38可能参与诱导CD8^(+)T细胞功能衰竭。

髓母细胞瘤分子亚型中CD8+T淋巴细胞浸润的临床病理特点

目的:研究CD8+T细胞在髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)各个分子亚型中的浸润特点,分析CD8+T细胞浸润与患者预后的关系,以及C-X-C基序趋化因子11(C-X-C motif chemokine ligand 11)的表达及其受体CXCR3在CD8+T细胞中的表达情况,为进一步探索MB中CD8+T细胞浸润可能的调节机制提供临床病理依据。方法:筛选2012—2019年间来自多所医学中心、具有完整临床资料的MB患者共48例(4个分子亚型各12例),利用NanoString PanCancer IO360 TM基因表达检测平台对48例MB患者的肿瘤标本进行转录组学分析,对患者肿瘤组织的石蜡切片进行CD8免疫组织化学染色分析,验证各亚型MB中CD8+T细胞数量的差异。通过数据库生物信息学分析,探讨CD8+T细胞浸润与患者预后的关系及各种趋化因子在各亚型MB中的表达差异,并采用双重免疫荧光染色验证MB中CD8+T细胞表面CXCR3受体的表达情况,探讨CD8+T细胞浸润至肿瘤内的可能分子机制。结果:MB的WNT亚型中的CD8+T细胞特征指数相对较高,提示WNT亚型中的CD8+T细胞数量显著高于其他三个亚型,这一现象通过CD8免疫组织化学染色方法以及R2在线数据分析平台对美国基因表达数据库Gene Expression Omnibus(GEO)进行数据挖掘得到了证实,且CD8+T细胞增多与患者的生存期呈正相关。数据库分析显示,CXCL11在WNT亚型MB中的表达量明显高于其他三个亚型。免疫荧光染色结果显示,CD8+T细胞表面存在CXCL11的受体CXCR3,提示CD8+T细胞可能通过表面受体CXCR3受CXCL11趋化至MB的微环境中。结论:CD8+T细胞在WNT亚型MB中的浸润相对多于其他亚型,其机制可能与CXCL11-CXCR3趋化因子系统的激活相关,且肿瘤内CD8+T细胞浸润较多的患者预后较好,此结果可能为MB中CD8+T细胞浸润调节机制提供有益的临床病理依据,为未来MB的免疫治疗提供新的潜在治疗靶点。

外周血CD8^(+)T淋巴细胞亚群检测对过敏性鼻炎临床疗效的评估价值

目的探讨外周血CD8^(+)T淋巴细胞亚群检测对过敏性鼻炎(AR)临床疗效的评估价值。方法前瞻性选取2021年3月~2022年2月温州市中西医结合医院耳鼻咽喉科门诊治疗的120例AR患者和40例健康志愿者,分别设为研究组和对照组,比较两组外周血CD8^(+)T细胞、CD8^(+)CD28^(+)T细胞、CD8^(+)CD28-T细胞比率;研究组接受鼻用激素联合口服抗组胺药物治疗方案,根据治疗效果分为有效组(n=107)和无效组(n=13),比较有效组和无效组治疗前CD8^(+)T细胞、CD8^(+)CD28^(+)T细胞、CD8^(+)CD28-T细胞比率;Pearson相关性分析法分析外周血CD8^(+)T淋巴细胞亚群水平与鼻部症状总评分(totalnose symptomscore,TNSS)的相关性;以受试者工作特征(ROC)曲线分析治疗前CD8^(+)T淋巴细胞亚群对AR临床疗效的预测价值。结果研究组治疗前外周血CD8^(+)CD28^(+)T细胞比率高于对照组,CD8^(+)CD28-T细胞比率低于对照组(P<0.05)。研究组总有效率为89.17%;有效组治疗前CD8^(+)CD28^(+)T细胞比率低于无效组,CD8^(+)CD28-T细胞比率高于无效组(P<0.05);Pearson相关性分析显示,CD8^(+)CD28^(+)T细胞比率与TNSS评分呈正相关(r=0.324,P=0.006),CD8^(+)CD28-T细胞比率与TNSS评分呈负相关(r=-0.541,P=0.000)。ROC曲线结果显示,CD8^(+)T细胞、CD8^(+)CD28^(+)T细胞、CD8^(+)CD28-T细胞比率评估AR治疗无效的曲线下面积(AUC)(95%CI)分别为0.647(0.555~0.732)、0.683(0.592~0.765)、0.911(0.845~0.955),其中CD8^(+)CD28-T细胞的评估效能优于CD8^(+)T细胞、CD8^(+)CD28^(+)T细胞比率(P<0.05)。结论AR患者外周血CD8^(+)CD28^(+)T细胞比率升高,CD8^(+)CD28-T细胞比率降低,CD8^(+)T细胞比率相对稳定,治疗前CD8^(+)CD28-T细胞比率可作为预测AR患者的临床疗效的参考指标。

CD4^(+)和CD8^(+)T细胞在结核病免疫应答中的作用

结核分枝杆菌是世界范围内单一感染源致死亡的主要原因,并且已有大量人群被感染后处于长期潜伏感染状态。机体清除结核分枝杆菌主要依赖于特异性免疫应答,其中T淋巴细胞作为参与机体细胞免疫的主要细胞,其增殖和活化在机体特异性免疫应答中发挥着至关重要的作用。笔者分析了结核分枝杆菌感染机体后,T淋巴细胞亚群中的CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞在结核分枝杆菌感染免疫应答中的作用,并且对机体抗结核分枝杆菌感染免疫应答的机制进行总结,为进一步深入探索适应性免疫的抗结核感染网络、结核病的诊断及临床研制新型疫苗提供借鉴。

人类免疫缺陷病毒1感染者外周血CD_8^+ T淋巴细胞表面CD_(38)和人类白细胞抗原DR表达的研究

目的探索人类免疫缺陷病毒(HIV)-1感染者外周血CD_8^+T淋巴细胞表面CD_(38)(CD_(38)^+/CD_8^+)、人类白细胞抗原DR(HLA-DR)(HLA-DR^+/CD_8^+)表达水平的变化及其与疾病进展的关系。方法选取2012年5-8月河南省淮阳县中医院、西平县中医院、驻马店驿城区中医院、泌阳县中医院、博爱县中医院收治的经河南省疾病预防控制中心确诊的HIV-1感染者409例为HIV-1感染组,河南中医学院第一附属医院体检健康者28例为对照组。采用流式细胞仪检测外周血CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞计数和百分比,计算CD_4^+/CD_8^+,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测血浆病毒载量,应用全血染色、流式细胞术检测HIV-1感染者CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+。根据CD_4^+T淋巴细胞计数分为4组:<200 cells/μl组87例、200~<350 cells/μl组119例、350~<500 cells/μl组99例、≥500 cells/μl组104例,比较不同CD_4^+T淋巴细胞计数者间CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+。结果 HIV-1感染组CD_4^+T淋巴细胞计数、百分比低于对照组,CD_8^+T淋巴细胞计数、百分比高于对照组(P<0.001);HIV-1感染组CD_4^+/CD_8^+低于对照组(P<0.001)。HIV-1感染者血浆病毒载量为(38 415±1 067)copies/ml。Pearson相关分析表明,HIV-1感染者CD_4^+T淋巴细胞计数与血浆病毒载量呈负相关(r=-0.246,P<0.001);CD_(38)^+/CD_8^+与CD_4^+T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.260,P<0.001);CD_(38)^+/CD_8^+与血浆病毒载量呈正相关(r=0.409,P<0.001);HLA-DR^+/CD_8^+与CD_4^+T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.225,P<0.001);HLA-DR^+/CD_8^+与血浆病毒载量呈正相关(r=0.378,P<0.001)。200~<350 cells/μl组、350~<500 cells/μl组、≥500 cells/μl组CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+低于<200 cells/μl组(P<0.05)。结论 HIV-1感染者CD_4^+T淋巴细胞计数、百分比降低,CD_8^+T淋巴细胞计数、百分比升高,CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+与血浆病毒载量呈正相关。CD_4^+T淋巴细胞计数、CD_8^+T淋巴细胞计数结合CD_8^+T淋巴细胞的活化水平可以更全面地反映HIV-1感染者免疫功能受损的程度,HIV-1感染后CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+的变化可作为评价疾病进展的新指标。

Notch信号通路对慢性丙型肝炎患者CD8^+T淋巴细胞功能的影响

目的观察Notch信号通路对慢性丙型肝炎患者CD8^+T淋巴细胞功能的影响,初步阐释Notch信号通路在慢性丙型肝炎发病中的作用。方法收集2016年1月-8月在陕西省人民医院就诊的慢性丙型肝炎初治患者38例和健康志愿者17例,分选CD8^+T淋巴细胞,应用实时定量PCR法检测CD8^+T淋巴细胞中Notch1和Notch2 mRNA的表达水平。分别应用直接接触培养系统和间接接触培养系统将从HLA-A2限制性丙型肝炎患者分选的CD8^+T淋巴细胞与HCV感染的Huh7.5细胞共培养,加入Notch信号通路抑制剂DAPT,通过检测乳酸脱氢酶和细胞因子水平分析CD8^+T淋巴细胞的细胞毒性和非细胞毒性功能的变化。2组间计量资料的比较采用t检验。结果 Notch1和Notch2 mRNA在慢性丙型肝炎患者CD8^+T淋巴细胞中的表达水平较健康志愿者均显著升高,分别升高约10倍和4倍,差异均有统计学意义(t值分别为6.63、18.88,P值分别为0.003、<0.001)。抑制Notch信号通路可增加直接接触培养系统中细胞死亡的比例[(26.41±4.76)%vs(13.65±4.65)%,t=3.32,P=0.029];但抑制Notch信号通路对间接接触培养细胞中CD8^+T淋巴细胞毒性无明显影响。抑制Notch信号通路后,IFNγ的表达在直接接触培养系统[(52.19±12.38)pg/ml vs(18.62±5.66)pg/ml,t=4.27,P=0.013]和间接接触培养系统[(18.86±3.09)pg/ml vs(5.52±2.52)pg/ml,t=5.79,P=0.004]中均显著升高。TNFα的表达在抑制Notch信号通路后仅在直接接触培养系统中显著升高[(1296.0±293.3)pg/ml vs(585.3±32.62)pg/ml,t=4.17,P=0.014],而在间接接触培养系统中无明显变化[(297.3±175.4)pg/ml vs(273.7±105.9)pg/ml,t=0.20,P=0.851]。结论抑制Notch信号通路可增强慢性丙型肝炎患者中CD8^+T淋巴细胞的细胞杀伤和非细胞杀伤功能,Notch信号通路在慢性HCV感染中可能通过抑制CD8^+T淋巴细胞功能发挥诱导免疫耐受的作用。

浙江省丽水市强直性脊柱炎患者外周血CD_4^+T淋巴细胞和CD_8^+T淋巴细胞程序性死亡因子1的表达及意义研究

目的检测浙江省丽水市强直性脊柱炎(AS)患者外周血CD_4^+T淋巴细胞、CD_8^+T淋巴细胞程序性死亡因子1(PD-1)阳性率,分析其与疾病活动性临床指标的关系,初步探讨其在AS发生发展中的作用。方法收集2013年12月—2014年4月浙江省丽水市中心医院收治的AS患者35例,根据Bath强直性脊柱炎活动指数(BASDAI)分为活动组(BASDAI>4)21例和稳定组(BASDAI≤4)14例,另选取同时期本院体检健康者20例为对照组。应用流式细胞术检测外周血CD_4^+T淋巴细胞、CD_8^+T淋巴细胞PD-1阳性率,分析AS患者外周血CD_4^+T淋巴细胞、CD_8^+T淋巴细胞PD-1阳性率与疾病活动性临床指标的相关性。结果活动组CD_4^+T淋巴细胞PD-1阳性率高于对照组和稳定组(P<0.05);稳定组和活动组CD_8^+T淋巴细胞PD-1阳性率高于对照组(P<0.05)。AS患者外周血CD_4^+T淋巴细胞PD-1阳性率与CD_4^+T淋巴细胞百分比、CD_4^+/CD_8^+呈负相关(P<0.05),与CD_8^+T淋巴细胞百分比、BASDAI、红细胞沉降率(ESR)呈正相关(P<0.05),与C反应蛋白(CRP)无直线相关关系(P>0.05)。AS患者外周血CD_8^+T淋巴细胞PD-1阳性率与CD_4^+T淋巴细胞百分比、CD_8^+T淋巴细胞百分比、CD_4^+/CD_8^+、BASDAI、ESR、CRP无直线相关关系(P>0.05)。结论浙江省丽水市AS患者外周血CD_4^+T淋巴细胞、CD_8^+T淋巴细胞PD-1表达增加,CD_4^+T淋巴细胞PD-1阳性率在AS活动期明显增加,与疾病的炎性反应指标相关,可能在AS的免疫病理中起重要作用。

CD_8T淋巴细胞在大鼠缺血再灌注脑组织中表达的变化

目的观察大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)脑缺血模型再灌注不同时间点的脑组织中CD8T淋巴细胞表达的动态变化,探讨CD8T淋巴细胞与缺血性脑损伤的关系。方法选择成年雄性SD大鼠35只,随机分为假手术组,缺血再灌注24h、3d、5d、7d、10d和14d组,每组5只。采用Zea-Longa线栓法制作大鼠MCAO脑缺血模型,HE染色显示脑缺血再灌注组织病理学形态,SP法免疫组织化学染色显示CD8分子表达的变化,光镜下计数CD8T淋巴细胞数。结果再灌注7d和10d组,脑组织大量神经元细胞质、胞核界限模糊、核固缩溶解,细胞间出现大小不等的空泡。CD8T淋巴细胞于再灌注24h组即开始表达,再灌注7、10d组达到高峰,随后下降。再灌注各时间点组CD8T淋巴细胞数显著高于假手术组(P<0.01)。CD8T淋巴细胞大量表达于缺血再灌注脑组织,且主要分布于脑梗死边缘区。结论 CD8T淋巴细胞参与了脑缺血再灌注损伤。

GP96-肽复合物免疫小鼠脾淋巴细胞CD8^+细胞内的CA^(2+)浓度变化

目的:检测GP96-肽复合物免疫小鼠脾淋巴细胞特定亚群CD8+细胞内的钙离子浓度变化,从而进一步探讨GP96-肽复合物疫苗的免疫效应和机制。方法:以GP96-肽复合物免疫小鼠的脾淋巴细胞作为研究对象, 用QUANTUM-RED标记的抗膜表面抗原CD8+进行膜表面染色的同时,进行FLUO-3/AM负载及细胞内CA2+浓度的检测,以双色流式细胞术检测特定亚群淋巴细胞内的CA2+浓度的变化,钙离子载体A23187、MNCL2和CON A作为小鼠脾淋巴细胞CD8+细胞[CA2+]I的刺激因素。结果:经GP96-肽复合物免疫小鼠脾淋巴细胞CD8+细胞[CA2+]I有一定水平的上调。与对照组相比,A23187和CON A可显著提高GP96-肽复合物免疫小鼠脾淋巴细胞CD8+细胞[CA2+]I 的水平。结论:[CA2+]I浓度的上升可能与GP96-肽复合物促进淋巴细胞CD8+T淋巴细胞的活化及增殖有关。

共刺激分子CD28、CD137在喉癌患者T淋巴细胞中的表达及其与细胞免疫功能失调的关系

目的探讨共刺激分子CD28、CD137与喉癌患者细胞免疫功能状况的关系。方法应用梯度离心法分离并纯化外周血和肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL),流式细胞术检测喉癌患者外周血T细胞CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD28+细胞亚群分布和双香豆素(phytohemagglutinin,PHA)刺激前后患者外周血T细胞及TIL中CD137的表达。结果喉癌患者CD8+T细胞比率为(32.11±5.07)%,CD8+CD28-T细胞比率为(21.03±5.69)%,均明显高于正常对照组(均P<0.01);CD28+T细胞比率为(45.53±4.51)%,CD8+CD28+T细胞比率为(12.70±3.41)%,均明显低于正常对照组(P均<0.01)。CD137+T细胞活化增殖能力与CD28的阳性表达呈明显的正相关,喉癌患者外周血T细胞和TIL在未受PHA刺激时CD137+T细胞比率分别为(1.90±0.71)%和(3.52±1.64)%,明显高于正常对照组(P均<0.01)。但经PHA刺激48小时后,外周血和TIL中CD137+-48h/CD137+-0h值为分11.48±4.03和10.39±3.02,均明显低于正常对照组,P均<0.01。结论共刺激分子CD28在CD8+T细胞亚群中的表达失调使免疫效应性CD137+T细胞活化增殖能力下降,是引起喉癌患者细胞免疫功能紊乱的重要原因之一。

白细胞介素33在肝细胞癌患者中的表达及其对CD8^(+)T淋巴细胞功能的调节作用

目的观察肝细胞癌(HCC)患者外周血白细胞介素33(IL-33)的变化,探讨IL-33对HCC患者CD8^(+)T淋巴细胞的调节作用和可能机制。方法选择2019年4月—2020年1月陕西省人民医院收治的44例HCC患者和20例健康对照者为研究对象。采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC),酶联免疫吸附试验检测血浆IL-33及其受体肿瘤抑制素2(ST2)的水平,实时定量PCR法检测PBMC中IL-33和ST2 mRNA相对表达量。纯化CD8^(+)T淋巴细胞,使用重组IL-33刺激培养,CCK-8法检测细胞增殖,酶联斑点吸附试验检测穿孔素和颗粒酶B分泌,流式细胞术检测程序性死亡受体-1(PD-1)、淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)表达,比较IL-33刺激前后细胞增殖、毒性分子分泌、免疫检查点分子的变化。CD8^(+)T淋巴细胞与HepG2细胞共培养,通过检测乳酸脱氢酶表达计算CD8^(+)T淋巴细胞诱导HepG2细胞死亡比例,比较IL-33刺激前后CD8^(+)T淋巴细胞杀伤功能的变化。计量资料两组间比较采用t检验或配对t检验,相关性分析采用Pearson分析法。结果HCC组血浆IL-33水平低于对照组[(269.80±63.08)pg/mL vs(339.50±64.43)pg/mL,t=4.072,P<0.001],HCC组PBMC中IL-33 mRNA相对表达量低于对照组(1.07±0.14 vs 2.45±0.87,t=10.250,P<0.001)。血浆ST2水平和PBMC中ST2 mRNA相对表达量在HCC组和对照组之间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。CD8^(+)T淋巴细胞比例与血浆IL-33、ST2水平均无明显相关性(P值均>0.05)。HCC组CD8^(+)T淋巴细胞分泌穿孔素、颗粒酶B的水平均低于对照组(P值均<0.05),而HCC组CD8^(+)T淋巴细胞中PD-1、LAG-3、CTLA-4阳性细胞比例均高于对照组(P值均<0.05)。重组IL-33刺激对两组CD8^(+)T淋巴细胞增殖和免疫检查点分子表达均无显著影响(P值均>0.05),但可促进穿孔素、颗粒酶B的分泌(P值均<0.05)。HCC组CD8^(+)T淋巴细胞杀伤活性较对照组降低(P<0.05),重组IL-33刺激可提升CD8^(+)T淋巴细胞杀伤功能,主要表现为诱导HepG2细胞死亡比例升高(P<0.05),IFNγ和TNFα分泌水平增加(P值均<0.05)。结论HCC患者血浆IL-33水平降低。IL-33可通过促进穿孔素和颗粒酶B的分泌增强HCC患者CD8^(+)T淋巴细胞杀伤活性,为HCC治疗提供新的靶点。

扶正化瘀方通过改变急性肝损伤小鼠模型肝脏CD8^(+)T淋巴细胞表型功能预防肝纤维化的价值分析

目的观察应用扶正化瘀方后急性肝损伤小鼠模型肝脏CD8^(+)T淋巴细胞对共培养的肝星状细胞的影响,探讨扶正化瘀方预防肝纤维化的作用机制。方法18只SPF级雄性C57BL/6NCrl Vr小鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀方组,每组6只。扶正化瘀方组提前给予扶正化瘀方灌胃5 d。实验前12 h以2 mL/kg体质量的剂量腹腔注射10%的CCl_(4),腹主静脉取血,留取血清并检测ALT、AST,留取部分肝脏做病理观察;应用流式细胞术分选小鼠肝脏CD8^(+)T淋巴细胞,预先小鼠体内用药,再与小鼠肝星状细胞株(JS 1)以2∶1比例共培养于96孔板中24 h、48 h,使用qPCR方法检测各组Col.ⅠmRNA和α-SMA mRNA表达变化。符合正态分布的计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用SNK-q或LSD-t检验。结果模型组的ALT和AST水平均显著高于正常组(P值均<0.0001)。扶正化瘀方组小鼠的ALT升高的幅度明显小于模型组(P<0.001)。HE染色显示,扶正化瘀方组小鼠肝细胞变性、坏死程度较模型组有所减轻。与正常组比较,模型组总淋巴细胞、CD45、CD4-CD8^(+)T、CD8^(+)CD28-T显著上升,而扶正化瘀方组与模型组相比较,上述淋巴细胞比例显著降低(P值均<0.001)。自各组小鼠肝脏分离的CD8^(+)T淋巴细胞与JS 1共培养48 h,模型组与对照组(JS 1单培养)和正常组相比α-SMA mRNA的表达明显增加(P值均<0.01);Col.ⅠmRNA表达也明显高于对照组和正常组(正常小鼠肝脏CD8^(+)T淋巴细胞与JS 1共培养)(P值均<0.001)。扶正化瘀方组α-SMA mRNA和Col.ⅠmRNA表达显著低于模型组(P值均<0.01)。结论扶正化瘀方能通过改变小鼠肝脏CD8^(+)T淋巴细胞功能表型间接抑制活化的肝星状细胞。

IL-35对慢加急性肝衰竭患者外周血CD8^+ T淋巴细胞功能的影响

目的观察慢加急性肝衰竭(ACLF)患者血清IL-35表达水平,评估IL-35对ACLF患者CD8^+T淋巴细胞功能的影响。方法纳入2018年11月-2019年4月在海南省人民医院就诊的ACLF患者28例和健康对照者14例,采用ELISA法检测血清IL-35水平。分选外周血CD8^+T淋巴细胞,使用重组人IL-35刺激培养,应用实时定量PCR法检测CD8^+T淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶B和颗粒溶素mRNA水平,流式细胞术检测CD8^+T淋巴细胞中程序性死亡分子-1(PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的表达。应用直接接触和间接接触共培养系统将HLA-A2限制性CD8^+T淋巴细胞与HepG2细胞共培养,加入重组人IL-35后通过检测靶细胞死亡比率和细胞因子分泌评估CD8^+T淋巴细胞的细胞毒性和非细胞毒性功能的变化。符合正态分布的计量资料2组间比较采用两独立样本t检验或配对t检验;不符合正态分布的计量资料2组间比较采用Mann-Whitney U检验;相关性分析采用Spearman秩相关分析。结果 ACLF患者血清IL-35水平[72.32(54.04~111.30) pg/ml]较健康对照者[46.00(27.02~82.29) pg/ml]显著升高(Z=2.184,P=0.020)。ACLF患者存在CD8^+T淋巴细胞功能耗竭,主要表现为CD8^+T淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B mRNA相对表达量降低、PD-1和CTLA-4阳性细胞比例升高、细胞杀伤(诱导靶细胞死亡)和非细胞杀伤功能(分泌IFNγ)下降(P值均<0.05)。使用重组IL-35刺激后,ACLF患者和健康对照者CD8^+T淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B mRNA的相对表达量均显著降低,PD-1和CTLA-4的比例则显著升高,CD8^+T淋巴细胞的直接细胞杀伤功能均显著降低(P值均<0.05)。结论升高表达的IL-35抑制ACLF患者CD8^+T淋巴细胞的直接细胞杀伤功能,提示IL-35在ACLF中可能诱导细胞免疫功能耗竭。

CFSE标记结合流式细胞术检测肝星状细胞抑制CD4^+/CD8^(+)T淋巴细胞增殖的研究

目的研究羟基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺脂(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)标记结合流式细胞术在检测体外共培养体系中T淋巴细胞亚群增殖中的应用,并利用此方法研究小鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)对T淋巴细胞亚群增殖的影响。方法采用磁珠分选雄性C57/B6小鼠脾脏T淋巴细胞,经CFSE标记后与脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)刺激或不刺激的C57/B6来源的小鼠肝星状细胞系JSl共培养3 d,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群的增殖,flowjo软件分析增殖动力模型。结果JSl可以抑制CD4^+和CD8^(+)T淋巴细胞增殖的能力,并且当JSl/T细胞比值增加时,抑制作用更强。LPS的刺激不影响JSl对CD4^+和CD8^(+)T细胞增殖的抑制作用。结论肝星状细胞JS1具有免疫抑制能力,CFSE标记结合流式细胞术是一种可靠的分析淋巴细胞增殖的工具,可以有效检测出共培养体系中细胞亚群的增殖情况,在研究体外淋巴细胞功能中具有重要的应用价值。

ALL病儿T淋巴细胞CD28表达及意义

目的探讨儿童B细胞型急性淋巴细胞白血病(ALL)治疗前后外周血T淋巴细胞表面CD28的表达及临床意义。方法采用流式细胞术,检测27例初发的B细胞型ALL病儿化疗前后外周血T淋巴细胞表面CD28的表达,其中经化疗后达到完全缓解(CR)21例,未缓解(NR)6例。以同期23例健康体检儿童作为正常对照组。结果与正常对照组比较,治疗前初发ALL病儿外周血CD4+T淋巴细胞表面、CD8+T淋巴细胞表面CD28的表达均显著降低(t=21.56、44.02,P<0.05)。化疗后CR组病儿外周血CD4+T淋巴细胞表面、CD8+T淋巴细胞表面CD28较治疗前均显著升高(t=10.84、25.30,P<0.05),而NR组病儿CD4+T淋巴细胞表面、CD8+T淋巴细胞表面CD28与治疗前比较差异无显著性(P>0.05)。结论 CD28是参与ALL发病的重要共刺激分子,其表达异常可能是ALL的发病因素之一;其表达水平可能是判断ALL预后及化疗敏感性的因素之一。

HCV感染者直接抗病毒药物治疗前后CD8^+T淋巴细胞衰老和功能相关指标的变化

目的观察HCV感染者DAA治疗前后CD8^+T淋巴细胞衰老、功能相关指标变化,并探讨其临床意义。方法选取2017年1月-2018年12月于空军军医大学第二附属医院就诊的HCV感染者26例,患者接受索磷布韦联合达卡他韦片治疗。并纳入治愈者22例,健康对照者20例。采用流式细胞仪检测CD8+T淋巴细胞上SIRT1、CD57、PD-1、Tim-3等相关分子表达,并采用RT-PCR方法检测p21、p53表达水平,Luminex液相悬浮芯片检测样本外周血衰老相关分泌表型。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 SIRT1、PD-1、Tim-3在3组间表达差异均有统计学意义(F值分别为6. 712、4. 202、4. 575,P值均<0. 05)。与健康对照组相比,HCV组CD8+T细胞上SIRT1、PD-1、Tim-3表达水平明显上升(P值均<0. 05),HCV治愈组Tim-3表达水平明显上升(P <0. 05),HCV治愈组SIRT1、PD-1表达水平无明显变化(P值均> 0. 05)。p53、p21在3组间表达差异有统计学意义(F值分别为11. 144、6. 594,P值均<0. 05)。与健康对照组相比,HCV治愈组和HCV组p53表达水平明显下降(P值均<0. 001),p21表达水平明显下降(P值均<0. 05),HCV组和HCV治愈组比较差异均无统计学意义(P值均> 0. 05)。IL-6、TNFα在3组间差异均有统计学意义(F值分别为3. 920、6. 337,P值均<0. 05),与健康对照组相比,HCV组外周血的IL-6和TNFα表达水平明显升高(P值均<0. 05),HCV治愈组IL-6和TNFα表达水平无明显变化(P值均> 0. 05),与HCV组相比,HCV治愈组TNFα表达水平明显下降(P=0. 007)。结论 HCV感染者CD8+T淋巴细胞衰老,经DAA治疗后衰老缓解,CD8+T淋巴细胞功能部分恢复。

IL-6对肝细胞癌患者CD8^(+)T淋巴细胞程序性死亡受体1表达和功能的影响

目的观察血浆IL-6及程序性死亡受体(PD-1)在肝细胞癌(HCC)患者外周血CD8^(+)T淋巴细胞中的表达,评估IL-6对HCC患者CD8^(+)T淋巴细胞中PD-1表达和功能的影响。方法纳入2019年1月—2019年9月期间在陕西省人民医院或空军军医大学第二附属医院(第四军医大学唐都医院)就诊的HCC患者44例(HCC组),同时纳入年龄和性别匹配的健康对照者19例(HC组),采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞,分选CD8^(+)T淋巴细胞,ELISA法检测血浆IL-6水平,流式细胞术检测PD-1在CD8^(+)T淋巴细胞中的表达水平。使用IL-6中和抗体刺激分选的CD8^(+)T淋巴细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖,ELISA法检测培养上清IFNγ和TNFα水平,实时定量PCR法检测穿孔素、颗粒酶B和颗粒溶素mRNA相对表达量,Western blot法检测STAT3和Src磷酸化水平。计量资料两组间比较采用t检验或配对t检验;计数资料组间比较采用χ2检验。结果HCC组患者血浆IL-6水平较HC组显著升高[(99.67±20.92)pg/mL vs(81.05±16.76)pg/mL,t=3.427,P=0.0011]。虽然CD3^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例在HCC组和HC组患者之间的差异无统计学意义(P>0.05),但PD-1^(+)CD8^(+)细胞比例在HCC组患者中显著升高(3.79%±1.36%vs 2.20%±0.47%,t=5.335,P<0.0001)。使用IL-6中和抗体抑制HCC组患者CD8^(+)T淋巴细胞的IL-6虽不影响细胞增殖,但可降低PD-1表达(2.67%±0.91%vs 3.33%±1.12%,t=2.177,P=0.035),增加IFNγ分泌[(13.50±3.82)pg/mL vs(10.82±1.37)pg/mL,t=3.170,P=0.0028],穿孔素和颗粒酶B mRNA相对表达量亦显著升高(t值分别为6.161、14.140,P值均<0.0001),同时伴有磷酸化STAT3水平降低(P<0.0001)。结论抗人IL-6中和抗体可能通过增加穿孔素和颗粒酶B水平、增强细胞因子分泌以及抑制PD-1表达增强HCC患者CD8^(+)T淋巴细胞的功能。

CD8阳性T细胞亚群在肺癌外周血的检测及分析

目的检测肺癌患者外周血清中CD8^+T细胞亚群CD28^+及CD57^+的表达程度,探讨其临床意义。方法合肥市第二人民医院经细胞学或病理学诊断为肺癌的初次治疗患者30例,TNM分期(UICC,第7版)Ⅲ期12例,Ⅳ期18例。病理类型腺癌15例,鳞癌8例,小细胞肺癌7例。流式细胞仪分别检测肺癌患者组治疗前后及健康对照组人群的血清中CD8^+T细胞CD28^+和CD57^+的表达水平,分析该表达水平变化及与肺癌临床分期和病理学类型之间的关系。结果肺癌患者治疗前血清中CD28^+T细胞亚群比例为(12.34±3.72)%,CD57^+T细胞亚群比例为(19.53±5.26)%。而健康对照组血清中CD28^+T细胞亚群比例为(23.53±4.15)%,CD57^+T细胞亚群比例为(11.37±2.73)%,差异有统计学意义(P<0.05),该类指标与肿瘤病理类型无关,而随着不同临床分期增加,CD8^+CD57^+T细胞未见差异,而CD8^+CD28^+T细胞表达差异有统计学意义(P<0.05)。经两周期化疗后,缓解组(完全缓解+部分缓解)患者血清中CD28^+、CD57^+T细胞亚群比与健康对照组患者相比,差异无统计学意义(P>0.05),而未缓解组(稳定+进展)患者的CD28^+、CD57^+T细胞亚群比例分别为(10.62±2.74)%、(20.45±4.36)%.与健康对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺癌患者血清中CD8^+CD28^+T细胞表达较正常人群明显减低,而CD8^+CD57^+T细胞表达较正常人群明显升高,联合该两种T细胞亚群检测不仅可以了解肺癌患者免疫状况,同时可以评估肺癌患者预后,有一定临床应用价值。

A2aR在弥漫大B细胞淋巴瘤组织和CD8^＋T细胞上的表达和预后价值的研究

目的:探讨A2a R在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)组织和CD8^+T细胞上的表达及与患者临床病理特征和预后的相关性。方法:回顾性分析2010年1月1日至2015年12月31日就诊于天津医科大学肿瘤医院初治的72例DLBCL患者临床病理资料。采用多重免疫组织化学法检测组织中A2a R、CD8的表达,采用χ2检验分析其与患者临床病理特征的相关性,应用Kaplan-Meier法进行生存资料分析。结果:DLBCL组织中A2a R总表达阳性率为41.7%(30/72),与患者分期、IPI评分、Ki-67、β2-MG、B症状相关(P<0.05);A2a R^+组患者总生存期(overall survival,OS)较A2a R-组差(P<0.05)。DLBCL组织中CD8^+T细胞上A2a R表达阳性率为22.2%(16/58),与患者分期、IPI评分、Ki-67、β2-MG、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、结外受累数目、B症状相关(P<0.05);A2a R^+CD8^+组患者OS较A2a R-CD8^+组显著更差(P<0.001)。结论:A2a R总表达及CD8^+T细胞上A2a R表达与DLBCL患者临床病理特征及预后密切相关。检测CD8^+T细胞上A2a R表达可更好地评价DLBCL患者的预后。

急性和慢性EB病毒感染儿童外周血CD8^+T细胞活化差异比较

Epstein-Bar（rEB）病毒属人疱疹病毒,EB病毒感染与许多恶性增殖性疾病密切相关,是儿科较为常见的病毒感染性疾病。CD8^＋T细胞对EB病毒感染的控制起重要作用。本研究旨在探讨不同类型EB病毒感染所引起的机体不同的免疫病理机制,为EB病毒感染研究及治疗提供依据。