CD8阳性T细胞亚群在肺癌外周血的检测及分析

目的检测肺癌患者外周血清中CD8^+T细胞亚群CD28^+及CD57^+的表达程度,探讨其临床意义。方法合肥市第二人民医院经细胞学或病理学诊断为肺癌的初次治疗患者30例,TNM分期(UICC,第7版)Ⅲ期12例,Ⅳ期18例。病理类型腺癌15例,鳞癌8例,小细胞肺癌7例。流式细胞仪分别检测肺癌患者组治疗前后及健康对照组人群的血清中CD8^+T细胞CD28^+和CD57^+的表达水平,分析该表达水平变化及与肺癌临床分期和病理学类型之间的关系。结果肺癌患者治疗前血清中CD28^+T细胞亚群比例为(12.34±3.72)%,CD57^+T细胞亚群比例为(19.53±5.26)%。而健康对照组血清中CD28^+T细胞亚群比例为(23.53±4.15)%,CD57^+T细胞亚群比例为(11.37±2.73)%,差异有统计学意义(P<0.05),该类指标与肿瘤病理类型无关,而随着不同临床分期增加,CD8^+CD57^+T细胞未见差异,而CD8^+CD28^+T细胞表达差异有统计学意义(P<0.05)。经两周期化疗后,缓解组(完全缓解+部分缓解)患者血清中CD28^+、CD57^+T细胞亚群比与健康对照组患者相比,差异无统计学意义(P>0.05),而未缓解组(稳定+进展)患者的CD28^+、CD57^+T细胞亚群比例分别为(10.62±2.74)%、(20.45±4.36)%.与健康对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺癌患者血清中CD8^+CD28^+T细胞表达较正常人群明显减低,而CD8^+CD57^+T细胞表达较正常人群明显升高,联合该两种T细胞亚群检测不仅可以了解肺癌患者免疫状况,同时可以评估肺癌患者预后,有一定临床应用价值。

二甲双胍介导的增强CD8阳性T细胞肿瘤浸润与增加的肿瘤灌注的相关性

目的探讨二甲双胍产生的增强CD8阳性T细胞肿瘤浸润作用与增加的肿瘤灌注之间的相关性。方法 6～8周雌性小鼠乳腺脂肪垫接种4T1细胞后9d,随机分为对照组及二甲双胍干预组。提取标本前15min,经尾静脉注射TRITC标记的Lectin溶液,提取标本并制备成冰冻切片后行CD8抗体荧光染色,用激光共聚焦显微镜采集结果。用Spearman分析方法观察相关性。结果二甲双胍干预组的CD8阳性细胞浸润数量[(120.8±26.9)个/mm^2 vs.(67.9±22.9)个/mm^2]及Lectin阳性信号面积[(18 357.0±5 865.0)像素/μm^2 vs.(10 233.0±4 434.0)像素/μm^2]显著高于对照组(P<0.05)。两组的CD8阳性T细胞浸润数量与Lectin阳性信号面积均呈线性相关(对照组:R=0.884,P=0.007;二甲双胍组:R=0.928,P<0.001)。结论增加的肿瘤灌注与二甲双胍介导的增强CD8阳性T细胞肿瘤浸润密切相关。

白细胞介素-38对乳腺癌患者CD8^(+)T淋巴细胞功能的影响

目的探讨白细胞介素-38(IL-38)在乳腺癌患者中的表达及其对CD8^(+)T细胞功能的调控作用。方法纳入2020年7月—2022年9月在新乡医学院第一附属医院就诊的44例乳腺癌患者、25例乳腺良性肿瘤患者和20例对照者。分离所有受试者的血浆和外周血单个核细胞,分离乳腺癌患者肿瘤组织中的肿瘤浸润淋巴细胞,纯化CD8^(+)T细胞。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-38蛋白水平,应用实时定量PCR检测组织IL-38 mRNA相对表达量。使用重组人IL-38刺激乳腺癌患者外周血和肿瘤组织分离的CD8^(+)T细胞,建立CD8^(+)T细胞与乳腺癌细胞系MCF-7的共培养系统,通过测定乳酸脱氢酶水平计算靶细胞死亡比例,ELISA法检测培养上清中穿孔素、颗粒酶B、干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,流式细胞术检测CD8^(+)T细胞的免疫检查点分子表达。结果乳腺癌患者血浆IL-38水平(74.23±19.88 pg/mL)高于乳腺良性肿瘤患者(62.87±16.27 pg/mL,P=0.018)和对照者(61.77±12.75 pg/mL,P=0.013)。乳腺癌患者肿瘤组织中IL-38 mRNA相对表达量显著高于癌旁组织(1.57±0.22 vs.1.00±0.18,P<0.001)。外周血和肿瘤浸润CD8^(+)T细胞诱导靶细胞死亡比例、穿孔素和颗粒酶B分泌在直接接触共培养组中的水平高于间接接触共培养组(P<0.05),但干扰素-γ和TNF-α分泌水平在直接接触共培养组和间接接触共培养组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。在直接接触共培养组内,靶细胞死亡比例、穿孔素、颗粒酶B、干扰素-γ、TNF-α在IL-38刺激组中的水平低于无刺激组(P<0.05)。在间接接触共培养组内,靶细胞死亡比例、干扰素-γ、TNF-α在IL-38刺激组中的水平亦低于无刺激组(P<0.05),但穿孔素和颗粒酶B水平在间接接触共培养组内的IL-38刺激组和无刺激组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。CD8^(+)T细胞中免疫检查点分子表达水平在无刺激组和IL-38刺激组之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌患者中高表达的IL-38可能参与诱导CD8^(+)T细胞功能衰竭。

CD4^(+)和CD8^(+)T细胞在结核病免疫应答中的作用

结核分枝杆菌是世界范围内单一感染源致死亡的主要原因,并且已有大量人群被感染后处于长期潜伏感染状态。机体清除结核分枝杆菌主要依赖于特异性免疫应答,其中T淋巴细胞作为参与机体细胞免疫的主要细胞,其增殖和活化在机体特异性免疫应答中发挥着至关重要的作用。笔者分析了结核分枝杆菌感染机体后,T淋巴细胞亚群中的CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞在结核分枝杆菌感染免疫应答中的作用,并且对机体抗结核分枝杆菌感染免疫应答的机制进行总结,为进一步深入探索适应性免疫的抗结核感染网络、结核病的诊断及临床研制新型疫苗提供借鉴。

牛痘样水疱病样原发性皮肤CD8阳性T细胞淋巴瘤一例

一例13岁女孩面部和四肢为主反复出现红斑、丘疹、水疱样皮损9年,皮疹形态与牛痘水疱病相似(hydroa vacciniforme,HV)。在病情急性进展期,伴高热,体温39℃以上。皮肤科检查:面部水肿,面部和四肢较多的萎缩性圆形和椭网形痘疮样瘢痕,散在红斑、丘疹、坏死和结痂;四肢数个水肿性红色斑块,中心有圆形破溃面。组织学上,在真皮的血管和附属器周围,可见大量表达CD8异形淋巴细胞浸润,诊断CD8^+皮肤T细胞淋巴瘤。糖皮质激素和免疫抑制剂可使病情缓解,随诊至今,无系统受累情况。

髓母细胞瘤分子亚型中CD8+T淋巴细胞浸润的临床病理特点

目的:研究CD8+T细胞在髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)各个分子亚型中的浸润特点,分析CD8+T细胞浸润与患者预后的关系,以及C-X-C基序趋化因子11(C-X-C motif chemokine ligand 11)的表达及其受体CXCR3在CD8+T细胞中的表达情况,为进一步探索MB中CD8+T细胞浸润可能的调节机制提供临床病理依据。方法:筛选2012—2019年间来自多所医学中心、具有完整临床资料的MB患者共48例(4个分子亚型各12例),利用NanoString PanCancer IO360 TM基因表达检测平台对48例MB患者的肿瘤标本进行转录组学分析,对患者肿瘤组织的石蜡切片进行CD8免疫组织化学染色分析,验证各亚型MB中CD8+T细胞数量的差异。通过数据库生物信息学分析,探讨CD8+T细胞浸润与患者预后的关系及各种趋化因子在各亚型MB中的表达差异,并采用双重免疫荧光染色验证MB中CD8+T细胞表面CXCR3受体的表达情况,探讨CD8+T细胞浸润至肿瘤内的可能分子机制。结果:MB的WNT亚型中的CD8+T细胞特征指数相对较高,提示WNT亚型中的CD8+T细胞数量显著高于其他三个亚型,这一现象通过CD8免疫组织化学染色方法以及R2在线数据分析平台对美国基因表达数据库Gene Expression Omnibus(GEO)进行数据挖掘得到了证实,且CD8+T细胞增多与患者的生存期呈正相关。数据库分析显示,CXCL11在WNT亚型MB中的表达量明显高于其他三个亚型。免疫荧光染色结果显示,CD8+T细胞表面存在CXCL11的受体CXCR3,提示CD8+T细胞可能通过表面受体CXCR3受CXCL11趋化至MB的微环境中。结论:CD8+T细胞在WNT亚型MB中的浸润相对多于其他亚型,其机制可能与CXCL11-CXCR3趋化因子系统的激活相关,且肿瘤内CD8+T细胞浸润较多的患者预后较好,此结果可能为MB中CD8+T细胞浸润调节机制提供有益的临床病理依据,为未来MB的免疫治疗提供新的潜在治疗靶点。

CD8+T淋巴细胞在非酒精性脂肪性肝炎中的作用

非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是一种与代谢综合征密切相关的肝脏疾病,其发病机制包括胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱、炎症反应等方面。本文简述了CD8+T淋巴细胞通过Fas-Fas配体(FasL)信号通路、释放穿孔素和颗粒酶以及分泌肿瘤坏死因子(TNF)α等细胞因子三种途径发挥细胞毒性作用特异性杀伤病毒及肿瘤靶细胞参与免疫调节;同时总结了CD8+T淋巴细胞促进巨噬细胞招募且与自然杀伤T淋巴细胞协同参与脂肪组织炎症发展,并通过自身攻击及表观遗传学机制导致肝损伤,促进NASH发病。由此得知CD8+T淋巴细胞可能成为NASH新的治疗靶点,未来继续深入研究CD8+T淋巴细胞在NASH中影响发病进程的具体机制有利于进一步指导临床治疗。

外周血CD4/CD8双阳性T细胞在类风湿性关节炎中的表达及意义

目的分析类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血CD4/CD8双阳性T细胞(double positive T cells,DPT)的表达水平及功能,并探讨DPT在RA发病中的作用。方法通过流式细胞术检测25例RA患者及25例健康人对照外周血CD3^+细胞中CD4^+/CD8^+双阳性细胞的比例;ELISA法检测RA患者及健康人对照血清中抗环瓜氨酸肽抗体(ACCP)、IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-12的表达水平,全自动生化分析仪检测C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)。结果与健康人对照组相比,RA患者组DPT占CD3+T细胞的比例明显升高,两组间差异具有统计学意义(t=4.63,P<0.01);RA患者组的ESR、CRP、RF、ACCP、IL-6和TNF-α水平均高于健康人对照组,差异有统计学意义(t分别为3.71,2.99,8.42,4.25,2.12,3.23;P分别为0.000 5,0.004 3,0.01,0.01,0.039,0.002 3)。DPT的表达水平与RA患者的年龄,ACCP,RF及血清中IFN-γ、TNF-α、IL-12的水平不相关,而与患者ESR,CRP,IL-6水平呈正相关(r分别为0.65,0.4,0.46;P分别为0.000 4,0.04,0.02)。结论RA患者外周血DPT表达水平明显升高,在RA发病及进展中发挥重要作用。

急性和慢性EB病毒感染儿童外周血CD8^+T细胞活化差异比较

Epstein-Bar（rEB）病毒属人疱疹病毒,EB病毒感染与许多恶性增殖性疾病密切相关,是儿科较为常见的病毒感染性疾病。CD8^＋T细胞对EB病毒感染的控制起重要作用。本研究旨在探讨不同类型EB病毒感染所引起的机体不同的免疫病理机制,为EB病毒感染研究及治疗提供依据。

人类免疫缺陷病毒1感染者外周血CD_8^+ T淋巴细胞表面CD_(38)和人类白细胞抗原DR表达的研究

目的探索人类免疫缺陷病毒(HIV)-1感染者外周血CD_8^+T淋巴细胞表面CD_(38)(CD_(38)^+/CD_8^+)、人类白细胞抗原DR(HLA-DR)(HLA-DR^+/CD_8^+)表达水平的变化及其与疾病进展的关系。方法选取2012年5-8月河南省淮阳县中医院、西平县中医院、驻马店驿城区中医院、泌阳县中医院、博爱县中医院收治的经河南省疾病预防控制中心确诊的HIV-1感染者409例为HIV-1感染组,河南中医学院第一附属医院体检健康者28例为对照组。采用流式细胞仪检测外周血CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞计数和百分比,计算CD_4^+/CD_8^+,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测血浆病毒载量,应用全血染色、流式细胞术检测HIV-1感染者CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+。根据CD_4^+T淋巴细胞计数分为4组:<200 cells/μl组87例、200~<350 cells/μl组119例、350~<500 cells/μl组99例、≥500 cells/μl组104例,比较不同CD_4^+T淋巴细胞计数者间CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+。结果 HIV-1感染组CD_4^+T淋巴细胞计数、百分比低于对照组,CD_8^+T淋巴细胞计数、百分比高于对照组(P<0.001);HIV-1感染组CD_4^+/CD_8^+低于对照组(P<0.001)。HIV-1感染者血浆病毒载量为(38 415±1 067)copies/ml。Pearson相关分析表明,HIV-1感染者CD_4^+T淋巴细胞计数与血浆病毒载量呈负相关(r=-0.246,P<0.001);CD_(38)^+/CD_8^+与CD_4^+T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.260,P<0.001);CD_(38)^+/CD_8^+与血浆病毒载量呈正相关(r=0.409,P<0.001);HLA-DR^+/CD_8^+与CD_4^+T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.225,P<0.001);HLA-DR^+/CD_8^+与血浆病毒载量呈正相关(r=0.378,P<0.001)。200~<350 cells/μl组、350~<500 cells/μl组、≥500 cells/μl组CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+低于<200 cells/μl组(P<0.05)。结论 HIV-1感染者CD_4^+T淋巴细胞计数、百分比降低,CD_8^+T淋巴细胞计数、百分比升高,CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+与血浆病毒载量呈正相关。CD_4^+T淋巴细胞计数、CD_8^+T淋巴细胞计数结合CD_8^+T淋巴细胞的活化水平可以更全面地反映HIV-1感染者免疫功能受损的程度,HIV-1感染后CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+的变化可作为评价疾病进展的新指标。

Notch信号通路对慢性丙型肝炎患者CD8^+T淋巴细胞功能的影响

目的观察Notch信号通路对慢性丙型肝炎患者CD8^+T淋巴细胞功能的影响,初步阐释Notch信号通路在慢性丙型肝炎发病中的作用。方法收集2016年1月-8月在陕西省人民医院就诊的慢性丙型肝炎初治患者38例和健康志愿者17例,分选CD8^+T淋巴细胞,应用实时定量PCR法检测CD8^+T淋巴细胞中Notch1和Notch2 mRNA的表达水平。分别应用直接接触培养系统和间接接触培养系统将从HLA-A2限制性丙型肝炎患者分选的CD8^+T淋巴细胞与HCV感染的Huh7.5细胞共培养,加入Notch信号通路抑制剂DAPT,通过检测乳酸脱氢酶和细胞因子水平分析CD8^+T淋巴细胞的细胞毒性和非细胞毒性功能的变化。2组间计量资料的比较采用t检验。结果 Notch1和Notch2 mRNA在慢性丙型肝炎患者CD8^+T淋巴细胞中的表达水平较健康志愿者均显著升高,分别升高约10倍和4倍,差异均有统计学意义(t值分别为6.63、18.88,P值分别为0.003、<0.001)。抑制Notch信号通路可增加直接接触培养系统中细胞死亡的比例[(26.41±4.76)%vs(13.65±4.65)%,t=3.32,P=0.029];但抑制Notch信号通路对间接接触培养细胞中CD8^+T淋巴细胞毒性无明显影响。抑制Notch信号通路后,IFNγ的表达在直接接触培养系统[(52.19±12.38)pg/ml vs(18.62±5.66)pg/ml,t=4.27,P=0.013]和间接接触培养系统[(18.86±3.09)pg/ml vs(5.52±2.52)pg/ml,t=5.79,P=0.004]中均显著升高。TNFα的表达在抑制Notch信号通路后仅在直接接触培养系统中显著升高[(1296.0±293.3)pg/ml vs(585.3±32.62)pg/ml,t=4.17,P=0.014],而在间接接触培养系统中无明显变化[(297.3±175.4)pg/ml vs(273.7±105.9)pg/ml,t=0.20,P=0.851]。结论抑制Notch信号通路可增强慢性丙型肝炎患者中CD8^+T淋巴细胞的细胞杀伤和非细胞杀伤功能,Notch信号通路在慢性HCV感染中可能通过抑制CD8^+T淋巴细胞功能发挥诱导免疫耐受的作用。

哮喘模型小鼠脾脏和肺脏CD8^+ T细胞的作用机制研究

目的建立哮喘小鼠模型,探讨CD8+T细胞在哮喘中的作用。方法将32只BALB/c小鼠随机均分为对照组和哮喘组,哮喘组小鼠建立哮喘模型。测定两组小鼠的气道反应性,对肺泡灌洗液(BALF)行细胞学分类和计数,观察肺组织的病理变化。用免疫磁珠纯化柱纯化两组小鼠脾、肺组织的CD8+T细胞,加入卵蛋白(OVA)刺激,用ELISA法检测培养96h后CD8+T细胞上清中IL-4、IL-10及IFN-γ的水平。结果哮喘组小鼠存在气道高反应性,证明模型构建成功。哮喘组BALF中的细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的比例均较对照组明显增加(P<0.05),巨噬细胞比例明显降低(P<0.05)。哮喘组肺间质中有大量炎性细胞浸润,气道上皮损伤,杯状细胞肥大增生,有大量黏液分泌,黏膜下胶原纤维沉积。对照组无明显的炎症改变。哮喘组肺CD8+T细胞分泌的IL-4(203.20±16.59pg/ml)较对照组(3.29±1.61pg/ml)明显增加(P<0.05),IL-4在两组脾CD8+T细胞培养上清中均未检出。哮喘组脾CD8+T细胞分泌IFN-γ水平(4997.05±189.07pg/ml)较对照组(4509.73±378.10pg/ml)明显增加(P<0.05),而肺IFN-γ水平(237.30±36.96pg/ml)较对照组(429.70±19.98pg/ml)明显减少(P<0.01)。哮喘组小鼠肺、脾CD8+T细胞分泌IL-10的水平(分别为265.24±36.98、22.49±6.70pg/ml)均较对照组(分别为14.42±4.41、5.82±3.24pg/ml)明显增加(P<0.05)。结论CD8+T细胞中也有具有调节性作用的细胞群,称为CD8+调节性T细胞,在哮喘发病中发挥重要作用。CD8+T细胞分泌的细胞因子水平在脾、肺中存在差异。

卡介菌多糖核酸对尖锐湿疣病人外周血CD8^+T细胞细胞因子表达影响

目的:研究卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对尖锐湿疣(CA)病人外周血CD8q+T细胞内白细胞介素类(IL-2、IL-4、IL-12)和干扰素γ(IFN-γ)表达的影响。方法:60例CA病人分为2组,均采用CO_2激光去除疣体。BCG-PSN组40例,激光术后开始加用BCG-PSN 1.0mg,im,qod,连续18次,36d为一个疗程。病例对照组20例,激光术后未再用任何药物治疗。另设正常对照组20例。采用流式细胞仪测定3组外周血CD8+T细胞IL-2、IL-4、IL-12、IFN-γ的水平。结果:治疗前CA病人外周血IL-2、IL-12和IFN-γ阳性CD8+T细胞百分率显著低于正常对照组,Tcl/Tc2亦显著低于正常对照组(P<0.01)。治疗后BCG-PSN组外周血IL-2、IL-12和IFN-γ阳性CD8+T细胞百分率显著升高(P<0.01),病例对照组无显著变化(P>0.05),2组变化差异非常显著(P<0.01)。BCG-PSN组治愈率82％,显著高于病例对照组(45％,P<0.01);复发率18％,低于病例对照组(55％,P<0.01)。结论:CA病人存在Tcl/Tc2失调,BCG-PSN可通过上调CA病人外周血CD8+T细胞IL-2、IL-12、IFN-γ的表达,纠正机体细胞因子失调而提高CA病人临床疗效、减少其复发。

γ链细胞因子对慢性乙型肝炎患者CD8^+T细胞上TIM-3表达的调节

目的通过检测T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子(TIM-3)在慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)CD8+T细胞上的表达,探讨共用γ链细胞因子对CHB患者CD8+T细胞上TIM-3表达的影响。方法选取2014年1-5月在第四军医大学唐都医院传染科就诊的CHB初治患者15例,以及健康体检者8例。抽取两组全血,利用Ficoll密度梯度离心法分离出PBMC。分别给予γ链细胞因子白细胞介素(IL)2、IL-7、IL-15、IL-21和人抗CD3/CD28刺激,未刺激孔作为阴性对照。培养4 d后,用单克隆抗体染色,采用流式细胞仪检测CD8+T细胞上TIM-3的表达情况。计量资料比较采用成组t检验。结果与未刺激组相比,TIM-3在CD8+T细胞上表达如下:人抗CD3/CD28和IL-2、IL-15、IL-7刺激组显著升高,分别为(9.629±9.916)%,P=0.000 1;(3.817±2.694)%,P=0.000 6;(5.772±4.732)%,P=0.005 4;(3.560±2.045)%,P=0.030 2。IL-21刺激组表达虽有所增加,为(2.503±2.117)%,但差异无统计学意义,P=0.934 1。结论人抗CD3/CD28、γ链细胞因子中的IL-2、IL-7和IL-15都能够有效上调TIM-3在CHB患者CD8+T细胞上的表达,提示通过抑制它们不仅可以下调TIM-3的表达,而且可能会增强CHB患者体内CD8+T细胞的杀伤作用。

浙江省丽水市强直性脊柱炎患者外周血CD_4^+T淋巴细胞和CD_8^+T淋巴细胞程序性死亡因子1的表达及意义研究

目的检测浙江省丽水市强直性脊柱炎(AS)患者外周血CD_4^+T淋巴细胞、CD_8^+T淋巴细胞程序性死亡因子1(PD-1)阳性率,分析其与疾病活动性临床指标的关系,初步探讨其在AS发生发展中的作用。方法收集2013年12月—2014年4月浙江省丽水市中心医院收治的AS患者35例,根据Bath强直性脊柱炎活动指数(BASDAI)分为活动组(BASDAI>4)21例和稳定组(BASDAI≤4)14例,另选取同时期本院体检健康者20例为对照组。应用流式细胞术检测外周血CD_4^+T淋巴细胞、CD_8^+T淋巴细胞PD-1阳性率,分析AS患者外周血CD_4^+T淋巴细胞、CD_8^+T淋巴细胞PD-1阳性率与疾病活动性临床指标的相关性。结果活动组CD_4^+T淋巴细胞PD-1阳性率高于对照组和稳定组(P<0.05);稳定组和活动组CD_8^+T淋巴细胞PD-1阳性率高于对照组(P<0.05)。AS患者外周血CD_4^+T淋巴细胞PD-1阳性率与CD_4^+T淋巴细胞百分比、CD_4^+/CD_8^+呈负相关(P<0.05),与CD_8^+T淋巴细胞百分比、BASDAI、红细胞沉降率(ESR)呈正相关(P<0.05),与C反应蛋白(CRP)无直线相关关系(P>0.05)。AS患者外周血CD_8^+T淋巴细胞PD-1阳性率与CD_4^+T淋巴细胞百分比、CD_8^+T淋巴细胞百分比、CD_4^+/CD_8^+、BASDAI、ESR、CRP无直线相关关系(P>0.05)。结论浙江省丽水市AS患者外周血CD_4^+T淋巴细胞、CD_8^+T淋巴细胞PD-1表达增加,CD_4^+T淋巴细胞PD-1阳性率在AS活动期明显增加,与疾病的炎性反应指标相关,可能在AS的免疫病理中起重要作用。

CD_8T淋巴细胞在大鼠缺血再灌注脑组织中表达的变化

目的观察大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)脑缺血模型再灌注不同时间点的脑组织中CD8T淋巴细胞表达的动态变化,探讨CD8T淋巴细胞与缺血性脑损伤的关系。方法选择成年雄性SD大鼠35只,随机分为假手术组,缺血再灌注24h、3d、5d、7d、10d和14d组,每组5只。采用Zea-Longa线栓法制作大鼠MCAO脑缺血模型,HE染色显示脑缺血再灌注组织病理学形态,SP法免疫组织化学染色显示CD8分子表达的变化,光镜下计数CD8T淋巴细胞数。结果再灌注7d和10d组,脑组织大量神经元细胞质、胞核界限模糊、核固缩溶解,细胞间出现大小不等的空泡。CD8T淋巴细胞于再灌注24h组即开始表达,再灌注7、10d组达到高峰,随后下降。再灌注各时间点组CD8T淋巴细胞数显著高于假手术组(P<0.01)。CD8T淋巴细胞大量表达于缺血再灌注脑组织,且主要分布于脑梗死边缘区。结论 CD8T淋巴细胞参与了脑缺血再灌注损伤。

WT1特异性CD8^+T细胞治疗乳腺癌的实验研究

目的通过检测Wilms’肿瘤基因1(WT1)特异性CD8+T细胞对乳腺癌细胞的杀伤活性,探讨正常外周血中提取的WT1特异性CD8+T细胞用于治疗乳腺癌的可行性。方法运用流式细胞仪检测20例人白细胞抗原(HLA)-A2血清阳性健康志愿者外周血中WT1特异性CD8+T细胞的浓度,通过WT1/主要组织相容性复合体(MHC)连锁状多聚体磁珠分选WT1特异性CD8+T细胞并进行培养,细胞毒性实验检测WT1特异性CD8+T细胞的功能。结果 20例HLA-A2血清阳性健康志愿者外周血中均可检测到WT1特异性CD8+T细胞,12例健康外周血中WT1特异性CD8+T细胞的浓度>0.5%,其中4例>1%。WT1/MHC连锁状多聚体磁珠分选后,其浓度明显增加至80%左右。WT1特异性CD8+T细胞可特异性杀伤WT1多肽负载的乳腺癌细胞株。结论健康志愿者外周血中可检测到WT1特异性CD8+T细胞,该细胞可能对乳腺癌细胞具有特异性杀伤作用,提示WT1特异性CD8+T细胞用于乳腺癌过继性免疫治疗的可能性。

活动性肺结核与潜在感染者CD8＋、CD4＋记忆T细胞表达水平的比较

【目的】探讨CD8^＋、CD4^＋记忆T细胞表达水平在活动性肺结核与潜伏感染者中的表达差异及其意义。【方法】本院确诊的25例活动性肺结核患者（A组）、25例肺结核潜伏感染者（B组）、30例健康人群作为健康对照组（C组），检测各组外周血CD4^＋记忆T细胞、CD8^＋记忆T细胞的表达水平，并探讨其与高分辨率CT评分（HRCT）的相关性。【结果】B组的CD4^＋Tcm、CD8^＋Tcm水平显著高于A组、C组（P〈0．05），A组的CD4^＋Tcm、CD8^＋Tcm水平显著的高于C组（P〈0．05）。B组、A组的CD4^＋Tem、CD8^＋Tem水平显著的低于C组（P〈0．05），B组、A组的CD4^＋Tem、CD8^＋Tem水平相比差异无显著性（P〉0．05）。A组患者CD4^＋Tcm、CD8^＋Tcm水平与HRCT评分呈显著的负相关关系（P〈0．05）；A组患者CD4^＋Tem、CD8^＋Tem水平与HRCT评分无显著的相关系（P〉0．05）。[结论]CD4^＋、CD8^＋中心记忆性T细胞在活动性肺结核与潜伏感染者中水平差异显著，并且与肺结核患者病例损伤程度有关。

共刺激分子CD28、CD137在喉癌患者T淋巴细胞中的表达及其与细胞免疫功能失调的关系

目的探讨共刺激分子CD28、CD137与喉癌患者细胞免疫功能状况的关系。方法应用梯度离心法分离并纯化外周血和肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL),流式细胞术检测喉癌患者外周血T细胞CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD28+细胞亚群分布和双香豆素(phytohemagglutinin,PHA)刺激前后患者外周血T细胞及TIL中CD137的表达。结果喉癌患者CD8+T细胞比率为(32.11±5.07)%,CD8+CD28-T细胞比率为(21.03±5.69)%,均明显高于正常对照组(均P<0.01);CD28+T细胞比率为(45.53±4.51)%,CD8+CD28+T细胞比率为(12.70±3.41)%,均明显低于正常对照组(P均<0.01)。CD137+T细胞活化增殖能力与CD28的阳性表达呈明显的正相关,喉癌患者外周血T细胞和TIL在未受PHA刺激时CD137+T细胞比率分别为(1.90±0.71)%和(3.52±1.64)%,明显高于正常对照组(P均<0.01)。但经PHA刺激48小时后,外周血和TIL中CD137+-48h/CD137+-0h值为分11.48±4.03和10.39±3.02,均明显低于正常对照组,P均<0.01。结论共刺激分子CD28在CD8+T细胞亚群中的表达失调使免疫效应性CD137+T细胞活化增殖能力下降,是引起喉癌患者细胞免疫功能紊乱的重要原因之一。

CD8＋T细胞水平对膀胱癌患者预后的预测价值

【目的】CD8＋T细胞水平对膀胱癌患者预后预测价值。【方法】收集2014年1月至2015年1月于本院泌尿外科住院治疗的膀胱癌患者122例，应用免疫组化的方法确定膀胱癌标本中CD8＋T细胞的分布特征，计算5个独立高倍镜视野CD8＋T细胞数目的平均值，并分为高密度组66例（大于40个／高倍镜视野）和低密度组56例（小于40个／高倍镜视野）。比较两组患者临床病理指标、复发率、肿瘤进展情况和生存分析等。【结果】高密度组病理高分级所占比例显著低于低密度组，肿瘤大小〈3cm所占比例显著低于低密度组，肿瘤数目单发所占比例显著低于低密度组，差异均具有统计学意义（均P〈0．05）。所有入选患者随访患者12-36个月，原发灶复发患者共计15例，其中，高密度组患者11例，低密度组4例；继发灶复发患者共计15例，其中，高密度组10例，低密度组5例，组间比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。高密度组肿瘤进展率显著低于低密度组，差异具有统计学意义（P〈0．05）。比较两组患者1～5年生存率，结果表明，高密度组生存率显著低于低密度组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。【结论】膀胱癌组织中CD8＋T细胞广泛分布，其细胞密度与患者的总体生存时间分布分别呈正相关，监测CD8＋T细胞密度，有利于监测病情发展、预测患者预后，值得临床推广。