CD80/IgG融合基因真核表达载体的构建及在CHO细胞中的表达

目的:构建CD80/IgG真核表达载体,使其在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中呈分泌型表达,为白血病免疫基因治疗的研究奠定基础。方法:采用多聚酶链反应(PCR)技术分别从小鼠脾细胞和含小鼠CD80全长互补DNA(cDNA)的质粒pcDNA/B7中扩增出免疫球蛋白IgG1的Fc段和CD80胞外区,以定向克隆的方法将其串联至真核表达载体pcDNA3.0中,获得重组表达载体pcDNA/CD80-IgG;采用脂质体转染技术转染CHO细胞,G418筛选得到稳定表达细胞株;免疫印迹、斑点ELISA及流式细胞术鉴定融合蛋白的表达,并初步检测其活性。结果:DNA测序证明两段基因正确克隆至pcDNA3.0的多克隆位点,CHO细胞的培养上清中可检测到融合蛋白的表达,其分子量大小和预期的基本一致,该融合蛋白可提高白血病细胞表面CD80的表达。结论:成功构建pcDNA/CD80-IgG真核表达载体,并在CHO细胞中分泌性表达有活性的CD80-IgG融合蛋白。

创伤对小鼠腹腔巨噬细胞CD16/32、CD80表达的影响

ＣＤ１６／３２（ＦｃγＲⅢ／Ⅱ）、ＣＤ８０（Ｂ７－１）在巨噬细胞的吞噬及抗原提呈过程中有重要作用，通过观察它们在创伤后不同时相巨噬细胞表面表达的变化情况发现，除第４天外，其余时相点ＣＤ１６／３２、ＣＤ８０的表达均明显增强（Ｐ＜０．０１），提示创伤后巨噬细胞的抗原提呈能力发生变化，但增强还是减弱尚须进一步研究；大多数细胞同时表达ＣＤ１６／３２、ＣＤ８０，表明二者在功能上有着密切的联系。