应用组织芯片技术检测肺癌组织中MRP-1/CD9的表达

目的 MRP 1/CD9是穿膜四超家族成员之一,具有抑制细胞移动的功能,本研究旨在探讨其在肺癌组织中的表达情况及与病理分级、临床分期、转移与预后的关系。方法 应用组织芯片技术,采用免疫组化S P方法检测54例肺癌组织和10例同期正常肺组织中MRP 1/CD9的表达。统计学方法采用χ2检验,检验水准为a=0.05。结果 MRP 1/CD9在肺癌组织中阳性率为42.60%,与正常肺组织相比表达下调,统计学上具有显著性差异(P<0.05);其蛋白表达情况与患者的年龄、性别、肿瘤肉眼类型无关,而与肿瘤的组织学类型、临床分期、分化程度、淋巴结转移有关。其中非小细胞肺癌(NSCLC)组表达显著高于小细胞肺癌(SCLC)组;高中分化组高于低未分化组;早期(Ⅰ+Ⅱ)组高于中晚期(Ⅲ+Ⅳ)组;无淋巴结转移组高于有淋巴结转移组,均具有显著性意义(P<0.05)。结论 肺癌的进展可能与MRP 1/CD9的表达下调密切相关,尤其小细胞肺癌MRP 1/CD9的表达缺失更具有重要意义;MRP 1/CD9的表达降低促进了肿瘤的淋巴结转移,此指标有望成为判断肿瘤预后的新标志。

MRP-1/CD9和HSP60在膀胱癌中的表达

目的:探讨MRP-1/CD9和HSP60的表达与膀胱癌发生发展的关系。方法:应用免疫组织化学技术(SP法)检测CD9和HSP60在75例膀胱移行细胞癌标本,15例正常膀胱组织中的表达。结果:CD9和HSP60在正常膀胱组织均高表达,41.2%和42.7%的膀胱癌对CD9和HSP60显示了表达减低。不同临床分期和病理分级的膀胱癌中CD9的表达有差异(P<0.05),根据预后表浅性膀胱癌的复发浸润组和非浸润组中CD9和HSP60表达有差异(P<0.05)。结论:CD9和HSP60可能与膀胱癌的发生发展有关,它们可能作为判断膀胱癌预后的新指标。

胃癌组织中MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63的表达及意义

目的探讨胃癌组织中MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63的表达及意义。方法收集223例胃癌组织标本,采用组织芯片和免疫组化技术检测MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63的表达,并分析其与胃癌临床病理特征的关系以及三者之间的相关性。结果胃癌组织中MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63阳性表达率分别为58.3%、53.8%和64.1%;MRP1/CD9、KAI1/CD82表达与患者的性别、年龄、分期均无关,与肿瘤的分化程度、淋巴结转移有关,KAI1/CD82表达还与浸润深度有关,而MRP1/CD9表达则与之无关,未发现ME491/CD63表达与胃癌临床病理特征的相关性。MRP1/CD9与KAI1/CD82、ME491/CD63的阳性表达率有显著相关性(r=0.147、0.164,P<0.05),KAI1/CD82与ME491/CD63的阳性表达无相关性。结论 MRP1/CD9、KAI1/CD82的表达可能是判断胃癌生物学行为的重要指标。

肿瘤转移抑制因子CD9/MRP-1基因在小鼠围着床期子宫内膜的动态表达

目的:探讨肿瘤转移抑制基因(CD9)/运动相关蛋白(MRP-1)mRNA和蛋白在胚胎着床过程中的作用。方法:应用RT-PCR和免疫组化技术观察CD9/MRP-1mRNA和蛋白在早孕和假孕小鼠子宫中的表达规律。结果:早孕d1-4小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,且d4表达最多;其蛋白主要表达在d1-4的子宫内膜上皮细胞,且早孕d2-4CD9/MRP-1在子宫基质细胞散在阳性表达。假孕d1-8小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,假孕d5表达开始增加,至d6达到峰值。而CD9/MRP-1蛋白在假孕d1-8子宫内膜腺上皮均有表达,而子宫内膜腔上皮均无表达。假孕d2-5,子宫基质细胞出现散在阳性表达。结论:①CD9/MRP-1在早孕小鼠子宫中呈动态表达,提示它在胚胎精确侵袭子宫内膜的调节中发挥作用。②CD9/MRP-1在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的。

绵羊卵母细胞超低温冷冻对四跨膜蛋白CD9表达的影响

试验旨在探讨不同发育时期卵泡上四跨膜蛋白CD9的表达,以及体外成熟和超低温冷冻对绵羊卵母细胞CD9的影响。采用免疫组织化学技术检测CD9蛋白在卵泡上的表达部位,实时荧光定量PCR技术检测CD9mRNA的表达量,Western blotting技术检测CD9蛋白的含量。免疫组织化学结果发现,在绵羊原始卵泡上就开始检测到CD9荧光信号,且随着卵泡的成熟荧光信号逐渐增强,成熟卵泡时荧光信号达到最强;实时荧光定量PCR检测新鲜MⅡ期卵母细胞中CD9mRNA的表达量显著增高(P<0.05),冷冻GV期卵母细胞CD9mRNA的表达量最少;Western blotting检测得出新鲜MⅡ期卵母细胞中CD9蛋白表达最多,冷冻GV期卵母细胞上表达最少,与实时荧光定量PCR结果一致。卵母细胞的冷冻保存要比胚胎保存应用前景广泛,而四跨膜蛋白CD9在精卵融合中更有着重要的作用,以上结果均显示,冷冻保存降低卵母细胞四跨膜蛋白CD9含量,而CD9的损伤是受精率下降的重要原因之一。

隐球菌脑膜炎患者血清外泌体CD93表达增高及意义

目的检测隐球菌脑膜炎患者血清中外泌体表达CD93的水平,进一步探究其临床意义。方法实验组为2012年11月~2016年12月在上海长海医院和长征医院确诊的38例隐球菌脑膜炎患者的血清,诊断标准为脑脊液染色新生隐球菌阳性或培养阳性;对照组为同期收集的38例健康人血清。血清外泌体的分离采用超高速离心法;外泌体表面抗原的鉴定采用磁珠捕获结合流式细胞仪检测法;血清中细胞因子用ELISA法进行蛋白定量。实验组与对照组检测值的比较采用两独立样本的t检验,两变量之间的相关性以Pearson系数表示。结果流式结果表明,实验组血清外泌体中CD93的表达水平高于对照组为(79.11±19.31vs 23.98±6.56)%,差异具有统计学意义(t=16.66,P<0.000 1)。IFN-γ在实验组与对照组血清中的表达水平为(39.78±10.77vs 58.98±16.99)pg/ml,差异具有统计学意义(t=5.884,P<0.0001);IL-17在实验组与对照组血清中的表达水平为(16.32±4.03vs 3.11±0.87)pg/ml,差异具有统计学意义(t=19.75,P<0.000 1);IL-1β在实验组与对照组血清中的表达水平为(57.12±12.98vs 13.45±4.78)pg/ml,差异具有统计学意义(t=19.46,P<0.000 1)。实验组血清中CD93+exosomes所占的百分比与IFN-γ,IL-17,IL-1β的蛋白表达量呈正相关(r=0.488,0.456,0.532,均P<0.01)。结论隐球菌脑膜炎疾病过程中,CD93在外泌体的表达可能通过影响CD4+T细胞参与了该病病程。

胆囊良恶性病变组织中HMGA2和CD9表达及意义

目的研究胆囊良恶性病变组织中HMGA2和CD9表达水平及其临床病理意义。方法 108例胆囊腺癌、46例癌旁组织、15例腺瘤和35例慢性胆囊炎手术切除标本常规制作石蜡包埋切片,HMGA2和CD9染色方法为EnVision免疫组化法。结果胆囊腺癌HMGA2表达阳性率明显高于癌旁组织(χ2=16.13,P<0.01)、腺瘤性息肉(χ2=8.19,P<0.01)和慢性胆囊炎(χ2=21.41,P<0.01);胆囊腺癌CD9表达阳性率明显低于癌旁组织(χ2=8.76,P<0.01)、腺瘤性息肉(χ2=3.96,P<0.05)和慢性胆囊炎(χ2=14.31,P<0.01);HMGA2表达阳性和(或)CD9表达阴性的良性病例的胆囊上皮均呈中至重度不典型增生。高分化、肿块最大径<2 cm、无淋巴结转移、未侵犯周围组织的病例HMGA2表达阳性率明显低于低分化、肿块最大径≥2 cm、淋巴结转移和侵犯周围组织的病例(P<0.05或P<0.01);高分化腺癌、肿块最大径<2 cm、无淋巴结转移和未侵犯周围组织的病例CD9表达阳性率明显高于低分化腺癌、肿块最大径≥2 cm、淋巴结转移和侵犯周围组织病例(P<0.05或P<0.01)。经Kaplan-Meier生存分析发现HMGA2表达阳性病例术后生存期明显低于阴性表达病例(P=0.020),但CD9表达阳性病例术后生存期明显高于阴性表达病例(P=0.019);Cox多变量回归分析显示HMGA2阳性表达和(或)CD9表达阴性是反映胆囊腺癌预后不良的一个重要指标。结论 HMGA2和CD9表达与胆囊腺癌发生、临床生物学行为及预后有密切关系。

RNF149通过泛素化介导的CD9降解调控细胞增殖

选取功能未知的泛素连接酶RNF149作为研究对象.该分子同GRAIL(gene related to anergy in lymphocytes)具有较高的同源性,属于Ⅰ型跨膜蛋白.激光共聚焦显微镜的观察结果显示,RNF149是一个定位在溶酶体上的蛋白质,它与CD9在细胞内有共定位.免疫共沉淀实验证明RNF149与CD9有相互作用.RNF149通过泛素分子的第48位赖氨酸多泛素化CD9.在HeLa细胞中转染数量一定的CD9质粒和数量梯度增加的RNF149质粒24 h后,蛋白质印迹检测外源RNF149和CD9的表达,结果表明,随外源RNF149表达量梯度增高,外源CD9的表达量梯度降低.在HEK293T细胞内以shRNA敲低内源的RNF149,并检测内源CD9的变化,发现RNF149被敲低后内源CD9的量增多.上述结果提示,CD9很有可能是RNF149的底物,被RNF149通过泛素化降解.此外,RNF149被敲低的HEK293T细胞增殖受到抑制,这可能与其内源CD9的量增多有关,提示RNF149可能是一种细胞增殖的调控因子.

MRP-1/CD9与高转移人乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性行为相关性的体外研究

目的:观察MRP-1/CD9对高转移人乳腺癌细胞系MDA-MB-231体外增殖和侵袭的抑制效应,并初步探讨其作用机制。方法:应用MRP-1/CD9特异性扩增引物,借助RT-PCR获得MRP-1/CD9全长cDNA片段,正向插入pcDNA3.1表达载体中,并将重组质粒导入MDA-MB-231细胞中,G418稳定筛选;应用CFSE-流式细胞仪检测,单层伤口愈合实验,软琼脂克隆形成实验等方法观察了MDA-MB-231细胞转染前后,细胞体外增殖及侵袭能力等指标的变化。Western blot检测AKT、p-AKT和SRC在转染前后的细胞中的表达变化。结果:成功构建全长MRP-1/CD9真核表达载体,将其转染入MDA-MB-231细胞后获得稳定表达MRP-1/CD9的MDA-MB-231克隆株(MDA-MB-231/CD9)。与空质粒转染后的MDA-MB-231细胞相比,MDA-MB-231/CD9细胞运动能力明显减弱,侵袭能力降低;p-AKT和SRC在MDA-MB-231/CD9细胞中表达明显降低。结论:MRP-1/CD9对细胞的运动和侵袭有抑制作用,这种作用与p-AKT和SRC的下调引起E-cadherin介导的粘附增强有关。

组织芯片技术检测MRP1/CD9在胃癌中的表达

目的:探讨运动相关蛋白-1(MRP1/CD9)在胃癌组织中的表达与胃癌生物学行为之间的相关性。方法:采用组织芯片技术及免疫组化方法对223例胃癌组织的MRP1/CD9蛋白表达进行研究。结果:在胃癌组织中MRP1/CD9表达的阳性率为58.3%,其表达与患者的性别、年龄、浸润深度、胃癌分期无关,而与肿瘤的分化程度、淋巴结转移密切相关。其中高-中分化组表达高于低分化组,差异有显著性(P<0.05);无淋巴结转移组表达高于淋巴结转移组,亦具有显著性(P<0.01)。二元Logistic回归前进法显示:淋巴结转移最先进入方程,是影响MRP1/CD9表达最显著的因素,其次是分化。结论:胃癌组织中MRP1/CD9表达改变与肿瘤的分化、淋巴结转移密切相关。

CD9与免疫细胞、免疫因子相互作用及其功能的研究

CD9是Tetraspanins家族成员之一,属于白细胞分化抗原中的一种,它参与细胞黏附、运动、激活和分化等.近年有研究表明:CD9在激活T细胞、作为B细胞分子标记物以及诱导DC和MHC分子对抗原的提呈等方面都发挥着重要的作用.值得一提的是CD9在适应性免疫系统的作用可能追溯到原始的无颌类脊椎动物.对CD9与免疫细胞以及免疫因子的相互作用进行简要综述,为进一步理解和深入研究CD9在适应性免疫系统中所扮演的角色提供参考.

MRP1/CD9与肺癌的关系

肺癌发病率和死亡率增长较快,对人类健康和生命有很大威胁,早期发现早期治疗是诊治关键.MRP1/CD9是跨膜蛋白,属于TM4SF家族,与肿瘤恶性程度高低和转移有密切关系.检测肺癌组织中MRP1/CD9的表达水平有助于监测病情的进展、评估治疗效果、判定预后,为早期发现早期治疗提供指导意义.综述了MRP1/CD9的结构、功能、作用机制及与肺癌的关系的研究进展.

结直肠癌组织中运动相关蛋白1/CD9和ME491/CD63的表达

目的:研究结直肠癌组织中运动相关蛋白1(MRP1)/CD9和ME491/CD63的表达及其临床意义。方法:应用组织芯片的免疫组织化学技术检测239例结直肠癌组织中MRP1/CD9和ME491/CD63的表达。结果:MRP1/CD9在结直肠癌组织中的表达与肿瘤的分化程度、Dukes分期、淋巴结转移有关(χ2=8.930、7.430和5.857,P均<0.05),而与患者的性别、年龄、浸润深度无关(χ2=1.800,0.014和0.096,P均>0.05)。ME491/CD63的表达与结直肠癌临床病理指标无关。结直肠癌组织中MRP1/CD9和ME491/CD63的表达呈正关联(rP=0.311,P<0.001)。结论:MRP1/CD9可作为结直肠癌的预后因子。结直肠癌组织中MRP1/CD9和ME491/CD63的表达呈正关联。

喉鳞癌中KAI1／CD82、MRP1/CD9的表达及意义

目的探讨喉鳞癌中KAI1／CD82和MRP1／CD9的表达及意义。方法采用实时荧光定量PCR法（RT—qPCR）及免疫组织化学技术检测100例喉鳞癌（ Laryngeal squamous cell carcinoma, ISCC）组织及随机抽取30例相应癌旁非癌组组织中KAI1／CD82和MRP1／CD9的表达情况，并分析二者与肿瘤临床病理参数的关系及对生存函数的影响。结果在mRNA及蛋白水平上KAI1／CD82和MRP1／CD9表达结果基本是一致的，KAI1／CD82和MRP1／CD9在30例配对的LSCC中，癌组织表达显著低于相应癌旁非癌组织，其表达差异有统计学意义（P〈0．05）；两者在TNM分期Ⅲ～Ⅳ、分化程度差、临床分期Ⅲ-Ⅳ、有淋巴结转移LSCC中的表达水平均低于在TNM分期Ⅰ-Ⅱ、分化程度良、临床分期Ⅰ-Ⅱ、无淋巴结转移LSCC患者（P〈0．05）。而在不同性别、不同年龄组、不同生长部位等LSCC患者的组织中其表达差异无统计学意义（P〉O．05）；LSCC中KAI1／CD82蛋白阳性表达者中位生存期为78个月，高于阴性表达者的48个月（X^2=6．98，P=0．008），LSCC中MRP1／CD9蛋白阳性表达者中位生存期为78个月，高于阴性表达者的49个月（X2=5．45，P=0．02）；在LSCC中KAI1／CD82和MRPI／CD9蛋白的表达呈正相关（X^2=31．41，P〈0．01）。结论KAI1／CD82和MRP1／CD9可能共同参与了LSCC的发生发展过程，对LSCC的浸润和转移及预后评估具有一定的临床参考价值。KAI1／CD82、MRP1／CD9可以作为判断喉鳞癌浸润转移及预后的标记物。

肿瘤转移抑制因子基因MRP-1/CD9对小鼠胚胎着床影响的研究

目的研究外源性MRP-1/CD9抗体对小鼠胚胎着床的影响。方法1.将8-细胞小鼠胚胎培养于含不同浓度MRP-1/CD9抗体的培养液中,观察囊胚形成及囊胚脱透明带的情况。2.妊娠D4小鼠子宫角注射MRP-1/CD9抗体,于妊娠D8观察小鼠胚胎植入数量。结果1.体外培养时,MRP-1/CD9抗体显著抑制胚胎的囊胚形成率(1:400,P<0.05)和脱带率(1∶800,P<0.05)。2.宫角注射MRP-1/CD9抗体可以显著提高小鼠胚胎的着床数(8.33±0.15vs4.57±0.21)。结论MRP-1/CD9参入小鼠胚胎的发育及植入。

老年卵巢癌组织中转移抑制基因MRP-1/CD9与integrinsα5的表达特性

目的探讨MRP-1/CD9和integrinsα5在老年卵巢癌浸润、转移发生中的作用及二者的相关性。方法应用RT-PCR方法检测正常卵巢组织(Ⅰ组)、卵巢良性肿瘤组织(Ⅱ组)、卵巢交界性瘤组织(Ⅲ组)和卵巢癌组织(Ⅳ组)中MRP-1/CD9及整合素的mRNA水平表达,统计学多因素分析MRP-1/CD9和integrinsα5基因的表达及与患者年龄、组织分化、淋巴转移、TNM分期及病理分型等的相关性。结果MRP-1/CD9和integrinsα5在卵巢癌组织中存在和生物学的作用确切。卵巢癌组各基因表达在肿瘤晚期年龄比较有显著差异;在组织分化程度上,高、中分化程度肿瘤的表达与低分化比较有显著性差异,而高、中分化间无明显差异;在卵巢癌组(Ⅲ、Ⅳ期)中存在明显的表达减弱,与良性肿瘤组、交界性肿瘤组及卵巢癌组早期比较有显著的差异;其表达在无淋巴转移和有淋巴转移方面有显著性差异,无淋巴转移者出现高表达。结论MRP-1/CD9与integrinsα5基因在晚期卵巢癌中,年龄比较存在差异,老年性卵巢癌基因缺失表达下降,提示老年肿瘤发生浸润、转移能力降低,对判断肿瘤的预后、制定肿瘤的治疗方案具有重要意义。

食管癌组织MRP1/CD9的表达及临床意义

[目的]探讨食管癌组织中MRP1/CD9表达的临床意义。[方法]应用免疫组化SABC法,检测54例食管癌组织中MRP1/CD9的表达。[结果]无淋巴结转移的食管癌组织和有淋巴结转移的食管癌组织MRP1/CD9阳性表达率分别为68.4%(26/38)、31.3%(5/16)。食管癌组织MRP1/CD9的表达与淋巴结转移、肿瘤的分级、术后存活时间显著相关(P<0.05)。[结论]MRP1/CD9可作为食管癌的预后指标。

抗GPⅡb/Ⅲa和抗CD9单克隆抗体对人血小板Ca对流的影响

采用Ca^(2+)敏感光蛋白Aequorin法测定结合位点在GPⅡb/Ⅲa的单克隆抗体(Mc-Ab)Apt_4及在CD9抗原的McAb XW-1和SJ-9A_4对人血小板胞浆Ca^(2+)的影响,发现Ap-t_4和XW-1可引起载有Aequorin的血小板Ca^(2+)内流,SJ-9A_4可引起载有Aequorin的血小板Ca^(2+)内流和释放。钙通道阻滞剂异搏定可完全抑制Apt_4引起的血小板Ca^(2+)内流和聚集,部分抑制XW-1和SJ-9A_4引起的血小板胞浆Ca^(2+)浓度([Ca^(2+)]i)升高和聚集。ADP抑制剂CP/CPK和钙调蛋宜抑制剂EBB部分抑制3种McAb的作用,环氧酶抑制剂ASA只有轻度抑制作用。实验结果提示3种McAb引起的血小板[Ca^(2+)]i升高和活化的途径不同。

应用组织芯片技术检测结直肠癌中MRP1/CD9的表达

目的:探讨结直肠癌组织中运动相关蛋白-1(MRP1/CD9)的表达及其与肿瘤转移的关系。方法:应用组织芯片和免疫组织化学技术检测244例结直肠癌组织中MRP1/CD9的蛋白表达。结果:MRP1/CD9在结直肠癌组织中阳性率为77.9%,其表达与患者的性别、年龄、浸润深度无关,而与肿瘤的分化程度、Dukes分期、淋巴结转移有关;其中高-中分化组表达高于低分化组;Dukes A+B期表达高于C+D组;无淋巴结转移组表达高于有淋巴转移组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。二元Logistic回归前进法显示:分化程度最先进入方程,是影响MRP1/CD9表达最显著因素。MRP1/CD9表达在单因素时和Dukes分期负相关,但在多因素时被掩盖。结论:MRP1/CD9在结直肠癌组织中的表达缺失与肿瘤的转移密切相关,有望成为判断结直肠癌预后的新标志。

人CD9基因的克隆及原核蛋白表达

通过RT-PCR技术,对人CD9基因的全长开放阅读框cDNA进行了扩增、克隆、序列测定和分析,再将cDNA插入原核表达载体PET30a(+)后转化大肠杆菌BL21,进而融合表达重组蛋白PET30a(+)/CD9。实验结果表明:RT-PCR方法扩增人CD9 cDNA],获得其全长开放阅读框为690bp,测序结果与NCBI上登录的人CD9基因序列完全一致;成功融合表达出了重组蛋白PET30a(+)/CD9,重组蛋白的分子量为30 KDa。