空间飞行对水稻CDA基因甲基化的诱变效应

为了研究空间飞行对植物CDA基因甲基化的影响,以第21颗返回式卫星搭载的水稻种子和地面对照为试验材料,采用亚硫酸盐处理测序的方法对水稻胞嘧啶脱氨基酶(RCDA)基因CpG簇以及第一外显子区域胞嘧啶甲基化进行检测。与地面对照相比,空间飞行导致RCDA基因第一外显子发生可遗传的高甲基化变化。半定量PCR检测显示空间飞行后RCDA基因表达水平下降。另外采用药物5-氮杂胞苷处理水稻使RCDA基因甲基化水平降低,同时检测到基因表达水平上升。结果说明,空间飞行能够对RCDA基因产生甲基化诱变效应,并且甲基化水平的变化与基因表达相关。本研究从表观遗传学角度探讨了空间飞行环境对植物诱变效应的机制。

应用MALDI-TOFMS检测5种白血病细胞株DCK和CDA基因部分单核苷酸多态性

目的:检测5种白血病细胞株中脱氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase,DCK)和胞苷脱氨酶(cytidine deaminase,CDA)基因的单核苷酸多态性。方法:培养人红白血病细胞株K562,人慢性粒细胞白血病细胞株Ka,人急性髓系白血病细胞株HL-60、U937,人Burkkit淋巴瘤细胞株Raji。采用QIAamp DNA Blood Mini Kit提取基因组DNA,设计引物,PCR扩增相应目的片段,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOFMS)检测DCK基因A674G(rs111454937)、C1644T(rs72552079),CDA基因A79C(rs2072671)、G208A(rs60369023)的单核苷酸多态性。结果:5种细胞株DCK基因A674G(rs111454937)均为A/A纯合子型,C1644T(rs72552079)均为C/C纯合子型。HL-60、U937、Raji细胞株CDA基因A79C(rs2072671)为A/A纯合子,K562、Ka细胞株为C/A杂合子;5种细胞株CDA基因G208A(rs60369023)均为G/G纯合子型。结论:CDA基因的A79C(rs2072671)SNPs位点基因型在5株血液系统肿瘤细胞株中不尽相同,余所测3个SNPs位点基因型在各细胞株中均相同。

胞苷脱氨酶基因多态性与阿糖胞苷敏感性关系的研究

目的探讨人类胞苷脱氨酶（CDA）基因编码区单核苷酸多态性（cSNP）与儿童急性白血病（AL）患者阿糖胞苷（Ara—C）敏感性的关系。方法采集87例AL患儿骨髓及199例对照儿童的外周血，制备cDNA，采用变性梯度凝胶电泳及DNA测序进行CDA基因cSNP分析。将人类CDA基因分别转人大肠杆菌和酵母细胞，利用高效液相色谱分析确定不同等位型CDA的催化活性；应用生长抑制实验检测酵母转化体对Ara—C处理的敏感性。结果在对286例中国儿童进行CDA基因cSNP检测中发现了3个已知的cSNP，即79A／C（K27Q）、208G／A（A70T）和435T／C，其等位基因频率分别为12．1％、0．5％和76．2％。这些多态性与白血病的易感性无相关性。携带人类CDATOT的大肠杆菌转化体的胞苷及Ara—C脱氨活性分别较CDA70A降低53％和63％（P值均〈0．01），Ara-C对携带人类CDATOT的酵母转化体作用15h的细胞半数抑制浓度（IC50）值[（735±31）μmol／L]也显著低于Wt转化体[（973±61）μmol／L]（P〈0．05），降低25％。结论确定了中国人CDA基因中3种cSNP以及各自的基因型分布和等位基因频率。证实了一个人类CDA208A基因型，其对Ara—C的敏感性高于CDA208G基因型，提供了一个对脱氧胞苷同系物潜在敏感的亚群。