江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性及击倒抗性突变分析

目的了解江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性,探究其与击倒抗性(kdr)基因突变的关联,为白纹伊蚊科学防治提供理论依据。方法用美国疾病预防与控制中心生物瓶法制备溴氰菊酯含量为1、2、4、6和8μg/瓶的测试瓶和不含溴氰菊酯的对照瓶,每瓶放10~25只实验室培养的敏感品系白纹伊蚊,确定诊断剂量。2020年8—9月,分别从徐州市睢宁县、淮安市淮阴区和无锡市宜兴市采集白纹伊蚊的幼虫或蛹,培养至子一代(F1代),取10~25只F1代雌蚊置含诊断剂量溴氰菊酯的测试瓶或对照瓶中充分接触30 min,计算白纹伊蚊的死亡率,评价其抗性水平。提取抗性测试后蚊虫的DNA,PCR扩增电压门控钠离子通道(VGSC)跨膜结构域Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的基因编码区并测序,用Bioedit、Seqman等软件分析kdr基因突变情况,统计kdr基因型和突变频率,抗性表型与敏感表型蚊虫kdr突变率的差异使用χ^(2)检验。结果用实验室敏感品系白纹伊蚊确定的溴氰菊酯诊断剂量为4μg/瓶。从睢宁县、淮阴区和宜兴市共采集到白纹伊蚊149只。睢宁县的白纹伊蚊在诊断剂量下的校正平均死亡率为(28.2±1.4)%,淮阴区和宜兴市的平均死亡率分别为(64.4±5.5)%、(56.3±17.7)%,3个县(市、区)的白纹伊蚊对溴氰菊酯均已产生抗药性。共获得DNA序列447条,测序结果显示,3个县(市、区)白纹伊蚊VGSC结构域Ⅳ的基因编码区1532和1534位点均存在kdr基因突变,其中1532位点共有2种等位基因,分别为野生型ATC/I(279/298,93.6%)和突变型ACC/T(19/298,6.4%);组成3种基因型,分别为野生型纯合子I/I(133/149,89.3%)、野生型/突变型杂合子I/T(13/149,8.7%)和突变型纯合子T/T(3/149,2.0%)。1534位点共有4种等位基因,分别为野生型TTC/F(275/298,92.3%)和突变型TCC/S(5/298,1.7%)、TTA/L(14/298,4.7%)和TTG/L(4/298,1.3%);组成4种基因型,分别为野生型纯合子F/F(128/149,85.9%)、突变型/野生型杂合子F/S(5/149,3.4%)和F/L(14/149,9.4%),突变型纯合子L/L(2/149,1.3%)。72只有抗性表型的白纹伊蚊成蚊中,1532、1534位点野生型分别占87.5%(63/72)和86.1%(62/72),kdr基因突变型分别占12.5%(9/72)和13.9%(10/72);77只敏感表型白纹伊蚊成蚊中,1532和1534位点野生型分别占90.9%(70/77)和85.7%(66/77),kdr基因突变型分别占9.2%(7/77)和14.3%(11/77)。抗性表型和敏感表型个体中,1532和1534位点kdr基因突变型间的差异无统计学意义(χ^(2)=0.168、4.111,P>0.05)。结论江苏省睢宁县、淮阴区和宜兴市的白纹伊蚊对溴氰菊酯均产生抗药性,但1532和1534位点kdr基因突变频率均较低,未发现抗性表型与1532位点、1534位点kdr基因突变的相关性。