环状RNA CDC14A表达与急性缺血性脑卒中发生风险、严重程度及复发的相关性研究

目的探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清环状RNA CDC14A(circCDC14A)表达与疾病发生风险、严重程度及复发的关系。方法纳入国药葛洲坝中心医院AIS患者114例作为观察组,收集其基线资料,根据患者AIS严重程度分为轻型组39例、中型组50例、重型组25例;随访6个月,根据是否复发分为未复发组94例和复发组20例。同期纳入本院因紧张性头痛或周围性眩晕而住院观察的非AIS患者126例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清circCDC14A水平;绘制受试者工作特性(ROC)曲线分析血清circCDC14A表达水平对AIS发生风险的评估价值及对AIS患者复发的预测价值;采用多因素Logistic回归分析AIS患者复发的影响因素。结果观察组血清circCDC14A表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t=12.558,P<0.01)。观察组血清circCDC14A表达水平评估AIS发生风险的曲线下面积(AUC)为0.888,敏感度为84.2%,特异度为84.1%。重型组AIS患者血清circCDC14A表达水平高于轻型组和中型组,中型组血清circCDC14A表达水平高于轻型组,差异有统计学意义(F=14.772,P<0.01)。复发组血清circCDC14A表达水平及高血压、高血脂、吸烟患者比例高于未复发组(t/χ^(2)=4.503、4.028、21.596、4.658,P<0.05)。血清circCDC14A预测AIS患者复发的AUC为0.764,敏感度为55.0%,特异度为96.8%。circCDC14A、高血脂是AIS患者复发的危险因素(OR=2.627、2.459,P<0.01)。结论AIS患者血清circCDC14A高表达,且其表达水平与疾病发生风险、AIS严重程度及复发均相关,可作为潜在预测标志物。

hCDC14A与BRAP2相互作用的初步研究

目的:筛选hCDC14A(human cell division cycle gene14A)的相互作用蛋白,探索功能联系。方法:酵母双杂交筛选hCDC14A的可能相互作用蛋白,Pulldown实验和免疫共沉淀实验验证蛋白质间相互作用,免疫荧光显微镜观察目的基因在细胞中的表达和定位,体内泛素化实验提示可能的相互作用机制。结果:酵母双杂交筛查到BRAP2(BRCA1 associated protein2)为hCDC14A的可能相互作用蛋白,两者有共同定位,BRAP2可以增强hCDC14A的泛素化修饰。结论:BRAP2可以与hCDC14A相互作用,可能是hCDC14A的泛素连接酶。

小鼠Cdc14A荧光表达载体的构建及鉴定

目的构建含有小鼠Cdc14A基因的荧光表达载体pcDNA3.1-MYC-Cdc14A-mcherry,并观察和验证其在真核细胞中的表达。方法通过聚合酶链式反应将实验室保存的真核表达质粒pcDNA3.1-MYC-Cdc14A中目的基因Cdc14A与mcherry融合并扩增出来,然后定向克隆至pcDNA3.1-MYC-C质粒中,经限制性内切酶消化和测序证实后,通过脂质体法转染HEK293细胞,Western blotting法检测目的基因的蛋白表达情况。结果测序结果和之前预期结果相符,证实pcDNA3.1-MYC-Cdc14A-mcherry荧光表达载体构建成功,Western blotting检测转染pcDNA3.1-MYC-Cdc14A-mcherry的细胞出现清晰的阳性反应条带,说明目的片段成功表达。结论pcDNA3.1-MYC-Cdc14A-mcherry荧光表达载体构建成功。

孕激素诱导的microRNA-152对子宫内膜上皮细胞增殖的抑制作用

目的研究孕激素诱导microRNA-152的表达及其对子宫内膜上皮细胞增殖的抑制作用。方法培养子宫内膜上皮细胞Ishikawa,将其分为4组,分别为空白对照组(control,C组)、10-8 mol/L雌激素处理组(estrogen,E组)、10-6 mol/L孕激素处理组(progesterone,P组)以及相应浓度的雌、孕激素联合处理组(estrogen plus progesterone,E&P组),利用实时定量PCR检测microRNA-152的成熟体microRNA-152-3p的表达。将microRNA-152-3p拟似剂转染雌激素预处理的细胞,microRNA-152-3p抑制剂转染雌、孕激素联合处理的细胞,CCK-8法观察microRNA-152-3p对细胞增殖的影响。利用microRNA靶蛋白数据库预测microRNA-152-3p的靶蛋白,并利用Western blot加以验证。结果实时定量PCR结果显示E组与C组相比,其细胞microRNA-152-3p的表达量无明显变化(P>0.05);P组细胞microRNA-152-3p的表达量相比C组增加(P<0.05);且E&P组的microRNA-152-3p表达量高于C组和P组(P均<0.05)。对microRNA-152-3p靶蛋白的预测表明CDC14A是其一个重要的靶蛋白。转染microRNA-152-3p拟似剂能够抑制雌激素对子宫内膜上皮细胞的增殖效应(P<0.05),同时下调CDC14A蛋白的表达(P<0.05)。而microRNA-152-3p抑制剂能一定程度解除孕激素对子宫内膜上皮细胞的增殖抑制效应(P<0.05),同时上调CDC14A蛋白水平(P<0.05)。结论孕激素可通过诱导microRNA-152-3p的表达抑制子宫内膜上皮细胞的增殖,CDC14A蛋白可能是microRNA-152-3p抑制子宫内膜上皮细胞增殖的靶蛋白。