鱼藤素抑制MCF-7、H1299增殖及下调微小染色体维系蛋白3、CDC45表达

目的探究鱼藤素对MCF-7及H1299细胞的增殖作用,并从m RNA水平研究了鱼藤素对微小染色体维系蛋白3(MCM3)和CDC45在MCF-7及H1299细胞中的影响。方法利用MTT法研究不同浓度的鱼藤素分别处理MCF-7和H1299细胞48、72、96 h后的抑制增殖作用;利用显微镜观察MCF-7和H1299细胞的生长状态;荧光定量PCR探究鱼藤素对MCF-7和H1299细胞中MCM3-CDC45表达的变化。结果 0.25、0.5、1、5、10、30、50μmol/L的鱼藤素作用MCF-7细胞48、72、96 h后,能明显抑制其增殖,且呈浓度时间依赖性,鱼藤素作用MCF-7 48、72、96 h的IC_(50)分别为9、3、2μmol/L;0.5、1、5、10、30、50、100μmol/L的鱼藤素作用H1299细胞48、72、96 h,抑制率呈浓度时间依赖性,鱼藤素作用H1299细胞96 h的IC50为2μmol/L。光学显微镜下,观察到药物处理组中,细胞数目减少,形态皱缩明显。鱼藤素干预MCF-7及H1299细胞,MCM3-CDC45的表达量减少。结论鱼藤素可抑制MCF-7、H1299细胞增殖,并可下调细胞中MCM3和CDC45的表达。

马氏珠母贝细胞周期分裂基因CDC45基因特征、表达量与性状相关分析

采用RACE技术克隆了马氏珠母贝细胞周期分裂基因45(Pm-CDC45)全长序列,利用荧光定量PCR检测该基因在闭壳肌、鳃、性腺与外套膜组织的表达量,并估计基因表达量与金黄壳色第3代选育群体壳高性状的相关性。结果表明:Pm-CDC45基因序列全长为2 091 bp,5′非编码区(5′UTR)为157 bp,3′非编码区(3′UTR)为34 bp,其中开放阅读框为1 967 bp,编码655个氨基酸;Pm-CDC45在各组织的相对表达量存在显著差异(P<0.05),其中闭壳肌表达量最高,鳃和性腺为其次,外套膜最低;Pm-CDC45基因相对表达量与选育群体壳高性状与存在显著的正相关(r=0.531,P<0.05);马氏珠母贝Pm-CDC45为影响壳高性状基因。

WGCNA共表达网络显示CDC45和MCM2与宫颈癌预后相关

目的使用加权基因共表达网络分析的方法研究宫颈癌细胞中相关基因表达状况及其与预后的相关性。方法从美国国家生物技术信息中心(NCBI)的Gene Expression Omnibus数据库中获得104例宫颈癌(CC)和24例正常样本的基因表达数据。通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)构建共表达网络。将表达模式类似的基因汇总组成模块,筛选出与肿瘤相关性最强的模块以及显著表达差异的基因。对差异基因进行GO富集分析和KEGG富集分析,同时构建差异基因的PPI网络。进行生存分析,筛选出与宫颈癌预后及分级显著相关的基因,使用Oncomine在线数据库对该结果进行验证。结果共表达网络显示MEblack模块与组织癌变的关联性最显著。CDC45、MCM2、CDC6、CHEK1、CDT1、CDC7、MCM10、GMNN、BUB1B、MAD2L1等10个基因为核心基因。GEPIA2生存分析提示CDC4和MCM2与生存期显著相关,并得到Oncomine数据库验证。结论CDC45和MCM2的表达量对宫颈癌病情发展状态判断以及预后状况的预测具有一定参考意义。

CDC45在甲状腺癌中的表达模式及临床应用价值

目的利用生物信息学探索细胞分化周期蛋白45(cell differentiation cycle protein 45,CDC45)在甲状腺癌中的表达模式,并分析其潜在功能及涉及的信号通路,探索CDC45在甲状腺癌中的临床应用价值。方法利用癌症基因组图谱计划(the cancer genome atlas,TCGA)数据库下载甲状腺癌的基因表达和临床生存数据;通过Timer,人类蛋白质图谱(the human protein atlas,HPA)和SPSS分析CDC45在甲状腺癌中的基因及蛋白表达模式;利用Kaplan-Meier曲线分析CDC45表达与预后之间的相关性;使用Cox回归对甲状腺癌预后影响因素进行分析,并利用R软件对结果进行可视化;使用String预测CDC45的蛋白互作网络,并利用基因本体数据库(gene ontology,GO),东京基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)和GSEA软件进行功能和通路富集分析;分别通过R软件和Timer分析CDC45与免疫浸润以及各个免疫细胞之间的相关性。结果与癌旁组织相比,甲状腺癌组织中CDC45基因水平显著上调,差异具有统计学意义[(-4.10±1.95)比(-2.04±1.24),t=11.28,P<0.001]。免疫组化染色结果显示,与癌旁组织相比,甲状腺癌中CDC45蛋白表达明显上升。TCGA数据库分析结果显示,CDC45的表达量与甲状腺癌患者年龄、性别以及M分期无关(P>0.05);但N1分期甲状腺癌患者CDC45表达量显著高于N0分期患者,差异具有统计学意义[(-2.19±1.31)比(-1.82±1.09),t=-3.40,P<0.05];甲状腺癌Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ期患者CDC45表达水平显著高于Ⅱ期患者,差异具有统计学意义[(-1.99±1.20)或(-1.94±1.20)或(-1.82±1.22)比(-2.56±1.28),t=3.09、3.02、3.05,P值均<0.001]。CDC45对甲状腺癌患者总体生存期(overall survival,OS)和疾病特异性生存期(disease free survival,DSS)无显著影响(P>0.05),但高表达的CDC45显著减少了甲状腺癌患者无疾病间隔期(disease free interval,DFI)和无进展间隔期(progression free interval,PFI),差异具有统计学意义(P=6.2e^(-9),2.5e^(-5))。多因素Cox回归分析发现,CDC45、M分期和T分期都可以作为甲状腺癌患者DFI时间的独立影响因子;而CDC45、年龄和M分期可以作为PFI时间的独立影响因子。通过蛋白互作网络挑选相关性最高的40个基因进行富集分析,GO富集分析结果表明CDC45相关蛋白主要在核浆和染色体中参与DNA的复制、代谢与结合;KEGG富集分析结果表明CDC45相关蛋白主要参与DNA复制、细胞周期、核苷酸切除修复等;GSEA富集分析发现CDC45还富集在免疫相关的通路上。免疫浸润结果表明,CDC45与B细胞,CDC8^(+)T细胞,CD4^(+)T细胞,巨噬细胞,中性粒细胞以及髓样树突细胞之间呈显著正相关,差异有统计学意义(r=0.35、0.25、0.14、0.16、0.27、0.39,P值均<0.05)。结论CDC45在甲状腺癌中显著高表达,可以独立预测甲状腺癌患者的DFI和PFI时间。

CDC45突变引起Meier-Gorlin综合征1例报告

迈尔-格林综合征(Meier-Gorlin Syndrome,MGS)是一种罕见的常染色体隐性遗传病,临床主要表现为身材矮小、小耳畸形及髌骨发育不良或缺如的三联征,又称耳-髌骨-身材矮小综合征[1],是引起原发性侏儒的疾病之一[2]。该病于1959年由Meier等[3]首次报告,1975年Gorlin等[4]报告了具有相似表型的另1例患者。除常见的三联征外,该综合征还可表现为喂养困难、肺气肿、多种骨骼畸形、泌尿生殖器畸形等,面容可随年龄发生变化,婴儿期典型面容表现为小嘴、厚嘴唇、小下颌,成年期额头突出、宽鼻梁、鼻腔狭窄更为明显[5]。

LINC00467调控CDK1和CDC45促进肝细胞癌对索拉非尼耐药的研究

目的探讨LINC00467调控肝细胞癌(肝癌)对索拉非尼耐药的作用机制。方法通过加权基因共表达网络分析GEO数据集GSE73571,筛选与索拉非尼耐药相关基因;并通过GO和KEGG富集分析确认与LINC00467相关的功能基因及其调控的下游基因。构建索拉非尼耐药细胞株HepG2-R,正常HepG2细胞设为HepG2-。CCK-8检测索拉非尼细胞毒性和计算IC50值;荧光定量RTPCR检测LINC00467、周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)和细胞分裂周期蛋白45(CDC45)的mRNA表达水平。两组LINC00467、CDK1、CDC45 mRNA相对表达量比较采用t检验。结果加权基因共表达网络分析筛选与索拉非尼耐药相关基因LINC00467,GO和KEGG分析确认与LINC00467相关功能及其调控下游基因CDK1和CDC45。荧光定量RT-PCR检测发现HepG2-R细胞LINC00467 mRNA相对表达量为2.49±0.30,明显高于HepG2-P细胞的1(t=4.91,P<0.05);siRNA干扰后LINC00467 mRNA相对表达量为0.36±0.04,干扰前为1,LINC00467 mRNA表达明显降低(t=-14.60,P<0.05)。转染siRNA-LINC00467可将耐药细胞对索拉非尼的IC50值从14.03μmol/L降低至7.33μmol/L。CDK1和CDC45在HepG2-R耐药细胞中表达升高,而siRNA干扰LINC00467的表达导致CDK1和CDC45在HepG2耐药细胞中的表达明显降低。结论基于公共数据库挖掘发现LINC00467在肝癌中高表达,LINC00467可能通过上调CDK1和CDC45参与调控细胞周期以及DNA损伤修复过程,从而促进肝癌对索拉非尼耐药。

CDC45在肝细胞癌组织中的表达及其与预后的相关性

目的分析细胞分化周期蛋白45(CDC45)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达情况,探讨CDC45与HCC预后的关系,对CDC45作为HCC的潜在生物标志物和治疗靶点的可能性进行初步探究。方法采用生物信息学方法分析CDC45在HCC组织及癌旁正常组织中的mRNA水平,并分析其表达与HCC患者的生存率间的关系。回顾性分析90例接受手术治疗的HCC患者的临床病理资料。采用免疫组化法检测HCC组织和癌旁正常组织中的CDC45表达水平,并分析其与HCC患者临床病理特征的关系。结果CDC45在结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、肝癌等多种肿瘤中高表达。CDC45在HCC组织中的表达量高于癌旁正常组织中的表达量(P<0.05)。CDC45的表达与HCC患者的临床预后显著相关(P<0.001),且CDC45的表达量越高,HCC患者的无病生存率和总生存率越低。CDC45与HCC患者的肿瘤结节数(P=0.003)及肿瘤大小(P=0.003)显著相关,而与年龄、性别和甲胎蛋白(AFP)水平的相关性无统计学意义(均P>0.05)。结论CDC45在HCC的进展中扮演着重要的角色,有望成为HCC的治疗靶点和潜在生物标志物。

一种新的乳腺癌预后标志物--着丝粒蛋白M

目的着丝粒蛋白M(CENP-M)是组成型着丝粒相关网络(CCAN)蛋白家族的一名重要成员,它可以保证着丝粒、动粒的正确形成和功能行使,在细胞正常分裂中发挥重要作用。但是目前有关CENP-M与癌症的研究很少。因此,本实验旨在探讨CENP-M的表达水平与乳腺癌预后之间的关系。方法利用Oncomine数据库、COSMIC数据库、bc-GenExMiner、Kaplan-Meier plotter、cBio Portal、GEPIA和Timer数据库系统,分析CENP-M的表达和乳腺癌预后情况。结果与正常组织相比,CENP-M在乳腺癌组织(尤其在侵袭性导管乳腺癌、侵袭性筛状乳腺癌和黏液性乳腺癌)中表达上调;基因突变分析表明,CENP-M表达增加不是由基因序列或拷贝数的改变引起的;CENP-M的表达和乳腺癌不同分型以及Scarff-Bloom-Richarolsn(SBR)分级相关;CENP-M高表达的乳腺癌患者预后较差;乳腺癌中CENP-M的表达和CDC45的表达相关。结论 CENP-M可以作为乳腺癌患者的预后标志物。