CDC50A在宫颈癌原代细胞中的表达及对干细胞特性的影响

目的:探讨人宫颈癌原代细胞的分离、培养、鉴定方法以及细胞周期蛋白50A(CDC50A)对其生物学特性的维持作用。方法:收集2017年1月~2018年2月期间在妇科进行宫颈手术的24例宫颈癌患者和10例行子宫全切术患者的宫颈组织标本;采用蛋白酶消化法分离宫颈癌组织,通过原代培养、流式细胞术分选法将宫颈癌原代细胞分为CDC50A^(+)Lin^(-)细胞组,CDC50A-Lin^(-)细胞组,采用MTT法测定各表型细胞体外增殖活性以及体内成瘤能力;采用端粒重复扩增法(TRAP)结合电泳及银染法测定端粒酶活性。结果:①宫颈癌原代细胞表型CDC50A^(+)Lin^(-)的细胞仅占0.95%~5.64%;且宫颈癌组织中CDC50A阳性表达率为87.5%,明显高于正常宫颈黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);②CDC50A^(+)Lin^(-)细胞体外增殖活性以及集落形成能力明显高于CDC50A-Lin^(-)细胞和未分选细胞,差异有统计学意义(P<0.05);③裸鼠皮下接种CDC50A^(+)Lin^(-)细胞,2周就可观察到明显的新生肿瘤块,成瘤率明显高于接种CDC50A-Lin^(-)细胞和未分选细胞,差异有统计学意义(P<0.05);④CDC50A^(+)Lin^(-)细胞端粒酶相对表达强度为显著高于对照组细胞和CDC50A-Lin^(-)细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CDC50A有可能是分选人宫颈癌干细胞的表面标志物,CDC50A^(+)Lin^(-)细胞具有肿瘤干细胞的生物学特性。

通过足细胞Cdc50a基因敲除构建一种全新的肾小球硬化症小鼠模型

细胞膜内外层磷脂分布的不对称性是由磷脂翻转酶维持的,当磷脂翻转酶功能缺失时,细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸会暴露至细胞表面,引发细胞凋亡。CDC50A是磷脂翻转酶的重要组成亚基。本研究敲除小鼠足细胞Cdc50a基因后,发现足细胞变形受损,产生慢性肾病的早期症状,即产生蛋白尿;随着月龄的增加,基因敲除鼠足细胞损伤及丢失加剧、肾小球的滤过屏障功能严重受损,出现肾小球滤过率降低、肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质堆积、局灶性节段性肾小球硬化等一系列病理表型改变。结果证实了细胞膜磷脂分布的不对称性对足细胞的存活和肾小球滤过屏障的完整性至关重要,并由此构建了一种全新的自发性肾小球硬化症小鼠模型。