猫CDH1基因在过表达c-MYC成纤维细胞中的表达变化及生物信息学分析

[目的]试验旨在研究骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(myelocytomatosis viral oncogene homolog, c-MYC)对猫成纤维细胞的影响及其与E-钙黏蛋白(cadherin 1,CDH1)基因表达和分子特性的关系,为将其应用于猫肿瘤疾病防治和组织损伤修复提供依据。[方法]通过组织贴壁法对猫胎儿成纤维细胞进行分离培养,利用电转仪将PB-TRE-c-MYC质粒转染至细胞并观察细胞形态,利用实时荧光定量PCR检测CDH1基因的表达情况,并通过生物信息学软件分析CDH1蛋白的理化性质和结构特征。[结果]过表达c-MYC导致细胞形态发生变化,从间质细胞的长梭型向上皮细胞的鹅卵石状发生转变,且使上皮细胞标志基因CDH1的表达极显著上调(P<0.01)。生物信息学分析显示,猫CDH1蛋白有881个氨基酸,其中含量最多的是亮氨酸,定位于细胞膜,存在4个CA结构域,介导细胞与细胞的接触,属于亲水性的酸性蛋白,主要由无规则卷曲组成,可能存在由Sec易位子转运并被信号肽酶Ⅰ(Sec/SPⅠ)切割的信号肽位点。[结论]猫CDH1基因的表达可被外源性重编程因子c-MYC激活,其编码的钙黏蛋白可促进猫胎儿成纤维细胞的间质-上皮转化,以抑制细胞癌化。

食管鳞状细胞癌中CDH1基因启动子区甲基化状态与β-catenin异质表达的相关性

目的:研究食管鳞状细胞癌(Esophageal Squamous Cell Cancer,ESCC)中CDH1(cadherin 1)基因的甲基化状态,探讨其与Wnt中心因子β-catenin表达及与食管鳞癌发生的关系。方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)及RT-PCR的方法检测91例食管鳞癌中CDH1基因的甲基化状态及其mRNA表达情况,应用免疫组织化学的方法检测β-catenin蛋白的表达情况,并分析与临床病理参数间的关系。结果:在91例食管鳞癌中,有72例CDH1基因发生了甲基化,甲基化率为79.1%,明显高于癌旁非肿瘤组织(P<0.01);癌组织中CDH1基因的高甲基化与肿瘤患者的临床分期相关,与病理分级无关;癌组织中该基因mRNA的阳性表达率42.9%,明显低于癌旁非肿瘤组织(97.8%,P<0.01);癌及癌旁组织中β-catenin蛋白的异质表达率分别为89.0%和24.2%,差异均有统计学意义(P<0.01);癌组织中CDH1基因mRNA表达及β-catenin蛋白的异质表达均与该基因的甲基化状态明显相关(P<0.05)。结论:CDH1基因启动子区甲基化在食管鳞癌中频繁发生,该基因的高甲基化状态可能是引起食管鳞癌发生的分子机制之一,并有可能通过Wnt/β-catenin信号传导通路发挥作用。

CDH1基因启动子甲基化与宫颈癌临床病理特征的关系

目的:检测Cadherin 1(CDH1)基因启动子区CpG岛甲基化状态,并分析CDH1基因甲基化率与临床病理特征的关系。方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)检测95例宫颈癌标本及对照组40例正常宫颈组织的CDH1基因启动子甲基化状态,荧光定量PCR检测高危型HPV DNA。分析CDH1基因甲基化状态与不同临床病理特征之间的联系。结果:宫颈癌组CDH1基因甲基化率明显高于正常对照组(分别为49.5%,12.5%,P<0.01)。宫颈癌CDH1基因甲基化检测和高危型HPV DNA检测结果有较好的一致性(Kappa=0.332,P<0.001)。鳞癌组甲基化率较腺癌组高(分别为66.2%,7.4%,P<0.01)。CDH1甲基化阳性率随肿块增大及FIGO分期升高而增高(P<0.05)。不同年龄、肿瘤浸润深度及有无淋巴结转移和CDH1基因甲基化未见明显关系(P>0.05)。结论:宫颈癌CDH1基因启动子甲基化与高危型HPV具有良好的一致性。CDH1基因启动子高甲基化为频发事件,并与不同宫颈癌病理类型相关,可作为宫颈癌诊断及分型的生物学标志物。

CDH1基因多态性与胃腺癌患者舌苔辨证的相关性

目的:研究CDH1基因多态性与胃腺癌患者舌苔辨证的关系.方法:应用连接酶检测反应,对387例胃腺癌患者和392例健康对照的CDH1基因的4个位点进行基因分型,并且按中医舌诊辨证要求,由中医诊断学专家进行舌色、舌质的诊断.结果:胃腺癌组不按时吃饭的比例高于对照组(2=9.124,P=0.010),胃腺癌组与对照组相比饮食口味偏咸(2=74.409,P<0.001),胃腺癌组的吸烟率高于对照组(2=18.019,P<0.001),胃腺癌组经常吃豆制品的频率明显低于对照组(2=10.669,P=0.014),并且其经常吃新鲜水果的频率明显低于对照组(2=59.905,P<0.001).rs13689、rs17690554位点携带突变基因型并且苔色为黄色的个体在病例组的分布频率明显高于对照组(2=4.064,P=0.044;2=5.868,P=0.015).两组人群在各位点同一基因型的不同苔质的差异均具有统计学意义(P<0.050).结论:CDH1基因多态性与胃腺癌患者舌苔辨证有一定关联,本研究结果有助于揭示胃腺癌患者基因位点突变与舌苔形成和变化的科学内涵.

组织CDH1基因异常甲基化和血清HE4检测对卵巢癌和卵巢内异症囊肿的鉴别价值

目的探讨组织上皮-钙粘连素(CDH1)基因异常甲基化和血清人附睾分泌蛋白4(HE4)检测对卵巢癌和卵巢内异症囊肿的鉴别价值。方法选取卵巢癌患者(卵巢癌组)38例、卵巢内异症囊肿患者(内异症组)41例,另选取子宫或卵巢良性病变患者42例(对照组),采用甲基化聚合酶联反应技术检测CDH1基因启动子区甲基化状态,采用酶联免疫吸附试验检测血清HE4水平。比较以上指标的变化。结果 CDH1 DNA在内异症组、卵巢癌组及对照组中的甲基化表达率分别为4.8%(2/41)、39.4%(15/38)、2.3%(1/42)。内异症组的CDH1 DNA甲基化表达率与对照组比较差异无统计学意义(χ2=0.37,P=0.542),卵巢癌组的CDH1基因甲基化表达率与对照组比较差异有统计学意义(χ2=11.24,P=0.001),卵巢癌组的CDH1基因甲基化表达率与内异症组比较差异有统计学意义(χ2=13.79,P=0.000)。血清HE4在内异症组、卵巢癌组及对照组水平分别为52.7 pmol/L、537.2 pmol/L、50.3 pmol/L,内异症组血清HE4水平与对照组比较差异无统计学意义(t=0.63,P=0.532),卵巢癌组的血清HE4水平与对照组比较显著增高,差异有统计学意义(t=54.27,P=0.000),卵巢癌组与内异症组比较显著增高,差异有统计学意义(t=55.33,P=0.000)。卵巢癌组CDH1基因甲基化DNA表达量与血清HE4水平具有相关性(r=0.527,P<0.01),卵巢癌组CDH1甲基化DNA表达量、血清HE4水平分别与CA125水平具有相关性(r=0.539、0.520,P<0.01)。内异症组血清HE4水平与CA125水平无明显相关性(r=0.127,P>0.05)。结论联合检测组织CDH1 DNA甲基化的发生和血清HE4水平可应用于卵巢内异症囊肿和卵巢癌的鉴别诊断,提高两种疾病的诊断率。

原发性肝癌患者CDH1基因启动子甲基化检测的临床意义

目的探讨原发性肝癌(PHC)患者CDH1基因启动子甲基化的情况,观察它们与临床病理特征之间的关系。方法100例PHC患者根据肿瘤有无包膜、肿瘤直径、HBsAg是否表达阳性、分化情况、有无肝内转移及分期情况分组。并选择20例健康成年人作正常对照组。分别检测组和健康组血液中的CDH1基因启动子甲基化的情况,并对手术病人检测肝样本中的CDH1基因启动子甲基化的情况。同时检测PHC组肝样本中的CDH1蛋白表达情况。结果PHC组CDH1基因启动子甲基化比率高于健康组;血样和肝样中的CDH1基因启动子甲基化与有无包膜、肿瘤直径、HBsAg是否表达阳性、分化情况、有无肝内转移及分期等密切相关;CDH1基因启动子高甲基化的CDH1蛋白表达减少。结论PHC的转移、增殖可能与CDH1基因启动子甲基化有关,对术后患者定期检测CDH1基因启动子甲基化情况可以判断预后。

绵羊cdh1基因cDNA全编码区的克隆及序列分析

在哺乳动物成体睾丸中,精子发生的过程开始于未分化的A型精原细胞的干细胞群。目前已有报道在小鼠未分化的A型精原细胞中特异性表达钙依赖性跨膜黏着蛋白基因(cdh1),但绵羊的cdh1基因全序列未见报道。为了更好地研究绵羊精原干细胞的特性,根据已报道的其他物种的cdh1基因的cDNA保守区设计引物,从成年蒙古绵羊睾丸中提取总RNA,采用RT-PCR和分子克隆方法克隆了蒙古绵羊cdh1基因cDNA全编码区。DNA序列测定结果与牛的核苷酸序列比对,同源性为96.5%,说明该基因在进化上是高度保守的。这为制备绵羊CDH1的抗体奠定了基础,并且为绵羊精原干细胞的分子水平鉴定提供了研究条件。

CDH1基因甲基化状态与结直肠癌临床病理特征及预后的相关性研究

目的探讨CDH1基因启动子所在5’-Cp G岛的异常甲基化与临床病情发展、病理变化及术后预后的相关性。方法选取2013年1~12月在我院肿瘤科进行结直肠癌切除术的原发性结直肠癌患者184例,其中甲基化组86例,非甲基化组98例,所有入选患者由专人进行跟踪随访。检测CDH1基因启动子所在5’-Cp G岛的异常甲基化,通过全基因组扩增技术对修饰后的DNA进行扩增,根据Gen Bank基因库设计CDH1基因甲基化特异性引物及CDH1基因非甲基化特异性引物。结果甲基化组肿瘤直径为(6.5±2.1)cm,大于非甲基化组的(3.2±2.2)cm,甲基化组肿瘤浸润性所占比例54.7%,高于非甲基化组的42.9%,差异均有显著统计学意义(P<0.01);甲基化组肿瘤分化程度(高分化14.0%,中分化36.0%)低于非甲基化组(高分化40.8%,中分化45.9%%),差异有显著统计学意义(P<0.01);甲基化组淋巴转移率为67.4%、远处转移率为31.4%,高于非甲基化组的21.4%和17.3%,差异均有统计学意义(P<0.05);甲基化组临床TNM分期更晚(甲基化组:Ⅰ期11.6%,Ⅱ期11.6%,Ⅲ期37.2%,Ⅳ期39.5%;非甲基化组:Ⅰ期27.6%,Ⅱ期32.7%,Ⅲ期20.4%,Ⅳ期19.4%),差异均有显著统计学意义(P<0.01);非甲基化组患者生存率(89.5%)高于甲基化组患者(68.7%),差异有统计学意义(P<0.05)。Cox比例风险模型结果显示,腹腔灌洗液悬浮细胞CDH1基因甲基化是原发性结直肠癌患者术后预后生存率的独立危险因素(RR=28.5,P<0.01)。结论原发性结直肠癌患者腹腔灌洗液悬浮细胞CDH1基因甲基化程度提高,恶性程度高,预后差。

p16和CDH1基因异常甲基化在宫颈组织中的表达及其意义

目的:分析宫颈癌和宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)组织中p16和CDH1基因异常甲基化的变化,评价该指标在宫颈癌中的意义。方法:用甲基化特异性聚合酶链反应法(methylation-specific PCR,MSP)检测CINⅠ40例、CINⅡ～Ⅲ40例、宫颈癌40例组织中p16和CDH1基因的异常甲基化。取正常宫颈组织20例作为对照。结果:(1)p16和CDH1甲基化在正常组未见表达;(2)p16、CDH1甲基化阳性率:CINⅡ、Ⅲ组明显高于CINⅠ组,差异有统计学意义(22．4%vs 2．5%,P＜0．05; 35．0%vs 5．0%,P＜0．05),宫颈癌组高于CINⅡ、Ⅲ组,但差异无统计学意义(40．0% vs 22．4%,P＞0．05;57．5% vs 35．0%,P＞0．05);宫颈癌组高于相应CINⅠ组,差异有统计学意义(40．0% vs 2．5%,P＜0．05;57．5% vs 5．0%,P＜0．05);(3)p16和CDH1甲基化总阳性率(任何一个基因出现甲基化即为阳性):CINⅡ、Ⅲ组明显高于CINⅠ组,差异有统计学意义(40．0% vs 5．0%,P＜0．05),宫颈癌组高于CINⅡ、Ⅲ组,差异有统计学意义(70．0% vs 40．0%,P＜0．05)。结论:p16和CDH1基因启动子区异常甲基化与宫颈癌的生物学行为相关,它可能有助于宫颈癌的早期辅助诊断和治疗。

慢病毒介导沉默CDH1基因的MDCK细胞株建立中最佳的MOI值及嘌呤霉素浓度的筛选

目的:筛选出慢病毒介导沉默CDH1基因的MDCK细胞株建立中最佳的感染复数(Multiplicity of infection,MOI)及嘌吟霉素浓度(Puromycin)。方法:CDH1干扰阴性对照慢病毒以MOI值0、1、10、100(TU number/cell)分别侵染MDCK细胞,72h后病毒感染效率达80%以上且细胞形态良好的对应MOI值为最佳MOI值。MDCK细胞中分别加入0~11μg/ml Puromycin,每1μg/ml设置一个浓度梯度,选择第4天细胞全部死亡的最低浓度为Puromycin的最佳浓度。结果:MOI值为100时,细胞荧光率为80%~90%,细胞形态良好,100确定为最佳MOI值。Puromycin浓度为7μg/ml,四天后MDCK细胞全部死亡,确定为最佳浓度。结论:确定了慢病毒介导沉默CDH1基因的MDCK细胞株建立中最佳的MOI值及嘌呤霉素浓度,为后续慢病毒介导沉默CDH1基因的MDCK细胞株的建立打下了重要基础。

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建CDH1基因敲除的人乳腺癌MCF-7稳定细胞系

目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建CDH1基因缺失的人乳腺癌MCF-7稳定细胞系。方法:根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计能特异性针对CDH1基因的sgRNA,以lentiCRISPR v2质粒为骨架构建能表达此sgRNA和Cas9蛋白的重组质粒。测序鉴定后,将重组质粒与逆转录病毒包装质粒VSVG、PAX2在氯化钙介导下共同转入HEK293T细胞进行病毒包装,转染48 h后收集病毒上清,直接感染人乳腺癌MCF-7细胞。采用嘌呤霉素筛选CDH1缺失的乳腺癌MCF-7细胞,通过DNA测序、Western印迹及免疫荧光染色实验验证获得的MCF-7细胞。结果:构建了靶向CDH1的CRISPR/Cas9质粒;DNA测序和Western印迹实验结果表明获得了稳定敲除CDH1的人乳腺癌MCF-7细胞。免疫荧光染色结果显示,相比对照组,稳定敲除CDH1的MCF-7细胞中已无法明显观察到E-钙黏蛋白的表达分布。结论:通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了CDH1基因缺失的MCF7细胞系,为进一步研究CDH1在肿瘤免疫治疗中的作用提供了基础。

干扰CDH1基因对雨蛙素诱导的急性胰腺炎细胞模型凋亡和自噬的影响

目的探讨干扰上皮钙粘素(CDH1)基因对雨蛙素(Caerulein)诱导的大鼠急性胰腺腺泡细胞AR42J凋亡和自噬的影响及可能的机制.方法体外培养大鼠急性胰腺腺泡细胞AR42J,将CDH1特异性siRNA转染至AR42J细胞,成功干扰CDH1表达后以雨蛙素干预构建急性胰腺炎细胞模型,实验分为空白对照(Mock)组、雨蛙素(Cae)组、雨蛙素+转染对照(Cae+si-NC)组和雨蛙素+转染(Cae+si-CDH1)组,实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测CDH1的表达变化,噻唑蓝(MTT)分析细胞增殖能力,酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎性介质肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot分析凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),自噬标记物Beclin-1、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ以及β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和其下游靶分子c-Myc和cyc-lin D1的表达.结果与Mock组相比,Cae组细胞增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞中CDH1、Bax、Beclin-1、LC3-Ⅱ、TNF-α和IL-1β、β-catenin、c-Myc和cyclin D1的表达上调,LC3-Ⅰ和Bcl-2的表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);与Cae组相比,Cae+si-CDH1组干扰CDH1能够逆转以上各指标,差异有统计学意义(P<0.05).结论干扰CDH1基因可减轻雨蛙素诱导的AR42J细胞凋亡和自噬,其作用机制可能与阻断β-catenin信号通路的激活有关.

CDH1基因-160(C→A)多态与福建地区中国人群胃癌遗传易感性的关联研究

目的上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)的编码基因CDH1是重要的肿瘤抑制基因,本研究探讨CDH1基因-160(C→A)多态性在福建地区胃癌人群中的分布及其与福建地区胃癌发病风险的相关性. 方法采用聚合酶链反应-变性高效液相色谱分析方法对102例胃癌患者和101名正常对照者进行CDH1基因-160(C→A)多态的基因型分析,比较基因型分布和发病风险的关系;危险度OR及95%CI应用非条件Logistic回归分析计算.结果CDH1基因-160(C→A)多态的CC、CA、AA基因型在病例组中的分布频率分别为58(56.9%),38(37.3%),6(5.9%);在对照组的分布频率分别为55(54.5%),41(40.6%),5(5%);两组间分布的差异无统计学意义(P＞0.05).AA基因型没有显著性地提高或降低胃癌的发病危险(OR=1.12;95%CI:0.32～3.95);携带A等位基因与胃癌的临床病理特征也无关联性.结论CDH1基因-160(C→A)多态性可能与福建地区中国人群胃癌发生的遗传易感性无关.

CDH1基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的检测及临床意义

目的探讨CDH1基因异常甲基化在上皮性卵巢癌发生发展中的作用及临床意义。方法对中国医科大学附属第一医院妇科、辽宁省肿瘤医院妇科1999年至2006年63例上皮性卵巢癌组织原发灶、41例相应的盆腹腔转移灶、10例癌旁卵巢组织及20例正常卵巢组织,采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)法检测CDH1基因启动子区甲基化状态。结果上皮性卵巢癌组织原发灶及相应的盆腹腔转移灶中存在CDH1基因启动子区异常甲基化,发生率分别为28.6%、39.0%,显著高于正常卵巢组织(P<0.01)。10例癌旁卵巢组织中1例检测到CDH1基因启动子区甲基化,20例正常卵巢组织未检测到CDH1基因启动子区甲基化。CDH1基因启动子区甲基化的发生率在临床Ⅰ期和Ⅱ期显著低于Ⅲ期和Ⅳ期(P<0.05),在高分化癌中低于低分化癌(P<0.05)。结论CDH1基因启动子区异常甲基化与上皮性卵巢癌发生密切相关,并可能与上皮性卵巢癌转移、临床分期及分化程度有关。

E-Cadherin(CDH1)基因胚系突变与胃癌风险的研究

背景与目的:检测E_Cadherin(CDH1)基因在家族性胃癌中的突变情况以探讨CDH1基因胚系突变在家族性胃癌中的作用。方法:采用聚合酶链反应(Polymerasechainreaction,PCR)、变性高效液相色谱分析(Denaturinghigh_performanceliquidschromatography,DHPLC)和直接测序法对CDH1基因进行全基因筛查,检查80名胃癌患者的CDH1基因突变情况,其中62例有家族史。同时检测80例正常人CDH1基因,进行分析比较。结果:2.5%(2/80)的胃癌患者检出CDH1基因错义突变Thr340Ala(杂合型),在80例正常人中未检出这一突变;第13外显子上游(内含子)第13位碱基检出多态位点IVS(13)_13T→C,这一多态性存在于12.5%(10/80)的胃癌患者和15.0%(12/80)的正常对照,两组差异无统计学意义;23.8%(19/80)的胃癌患者中检出同义突变Asn751Asn,相同的突变存在于8.8%(7/80)的正常对照。统计结果表明,胃癌患者中CDH1基因Asn751Asn检出率高于正常人群(P<0.05),这种差异主要表现在高年龄组胃癌患者(P<0.01)。结论:CDH1基因胚系突变在家族性胃癌中不是频发事件,但多态位点Asn751Asn的存在可使携带者胃癌发病风险增高,可能是部分癌高发家族癌症发生的原因之一。

乳腺浸润性导管癌中CDH1基因甲基化状态及其临床意义

目的探讨CDH1启动子基因甲基化在乳腺浸润性导管癌中的意义。方法采用甲基特异性PCR和免疫组织化学染色方法分别检测乳腺癌组织、癌旁组织和乳腺正常组织中CDH1基因启动子甲基化状况及上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达情况。收集相关临床病理资料(遗传背景、年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移情况、肿瘤细胞分级、临床分期和分子亚型),分析CDH1基因甲基化在乳腺癌中的意义。结果 250例乳腺癌患者共发现113例CDH1基因启动子甲基化,甲基化率为45.20%,CDH1基因启动子甲基化组和非甲基化组相比E-cadherin蛋白表达水平明显减低,差异有统计学意义(χ~2=21.360,P<0.01)。单因素分析结果显示,CDH1基因甲基化组和非甲基化组在腋窝淋巴结转移(χ~2=19.086,P<0.01)、肿瘤组织学分级(χ~2=8.487,P=0.014)、人表皮生长因子受体2(CerbB-2)表达(χ~2=9.475,P=0.002)和分子分型(χ~2=25.482,P<0.01)比较,差异有统计学意义。COX回归分析显示,CDH1基因启动子甲基化和非甲基化组5年生存率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CDH1基因启动子甲基化引起基因mRNA表达下降,CDH1基因甲基化与乳腺癌的腋窝淋巴结转移相关,提示CDH1基因启动子甲基化在乳腺癌疾病进程中发挥了一定作用。

人宫颈癌组织CDH1和PAX1基因甲基化研究

目的:检测上皮型钙黏附素(E-cadherin,CDH1)基因和配对盒基因家族PAX1基因在宫颈癌组织及人乳头瘤病毒(human papillom avirus,HPV)感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织、宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅰ组织、CINⅡ～Ⅲ组织和宫颈癌组织中的甲基化情况,评估是否可将其作为临床诊断的分子标志物。方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应法(methylation specific PCR,MSP)对HPV感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织、CINⅠ组织、CINⅡ～Ⅲ组织以及宫颈癌组织中的CDH1和PAX1基因进行甲基化检测。结果:HPV感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织和CINⅠ组织中未检出CDH1基因甲基化;CINⅡ～Ⅲ组织中检出CDH1基因甲基化2例(13.3%),宫颈癌组织中检出CDH1基因甲基化9例(22.5%),与HPV感染的正常宫颈组织比较差异均有统计学意义(P<0.05)。HPV感染的正常宫颈组织和宫颈炎组织中未检出PAX1基因甲基化,CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ和宫颈癌组织的PAX1基因甲基化阳性率分别为13.3%、46.7%和87.5%,CINⅡ～Ⅲ组织与CINⅠ和宫颈癌组织比较差异均有统计学意义(P<0.05)。CINⅠ组织、CINⅡ～Ⅲ组织和宫颈癌组织的CDH1和PAX1基因甲基化总阳性率分别为13.3%、60.0%和97.5%。结论:CDH1和PAX1基因甲基化,尤其是PAX1基因甲基化对于宫颈癌临床诊断具有潜在价值。

胃癌患者CDH1基因甲基化与幽门螺旋杆菌感染的相关性研究

目的探讨胃癌患者中CDH1基因甲基化与幽门螺杆菌感染之间的相关性,为临床诊断该病提供参考。方法选取医院2014年1月-2015年12月62例胃癌患者为研究对象,选择胃癌组织作为观察组,胃癌周围的正常胃组织为对照组,采取PCR法测定两组CDH1基因甲基化情况,观察其表达与幽门螺杆菌感染相关性,数据采用SPSS19.0软件进行统计分析。结果 CDH1基因甲基化阳性率观察组为72.6%,高于对照组的11.3%,差异有统计学意义(P<0.05);CDH1基因甲基化阳性表达与胃癌患者的年龄、肿瘤组织分化程度和淋巴结转移以及TNM分期有关,差异有统计学意义(P<0.05);幽门螺杆菌阳性患者CDH1基因甲基化阳性率为90.5%,高于幽门螺杆菌阴性患者35.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CDH1基因甲基化在胃癌的发生发展中起到关键性的作用,且表达与幽门螺杆菌感染有着紧密的联系。

遗传性弥漫型胃癌家系上皮型钙黏素基因的分析

目的研究在遗传性弥漫型胃癌家系中是否存在上皮型钙黏素基因(CDH1)以及基因表达的异常。方法收集符合遗传性弥漫型胃癌(HDGC)诊断标准的1个家系中15例成员的外周血和组织标本。用免疫组化和Westernblot法检测组织CDH1蛋白表达;提取基因组DNA,通过PCR扩增DNA直接测序检测CDH1基因16个外显子突变。用克隆测序法,鉴定CDH1基因启动子区CpG位点甲基化状况。结果先证者和另一胃癌患者(家系2号成员)的癌旁胃黏膜上皮细胞CDH1蛋白表达较正常胃黏膜减弱,两者肿瘤组织的蛋白表达几乎为阴性。包括先证者在内的11例家系成员第14外显子mRNA水平2 377位点存在一个C→T的单核苷酸多态性(SNP),但未检测到16个外显子的胚系突变。相对于正常胃黏膜,先证者和家系2号成员的胃癌组织均有CDH1基因启动子的高甲基化,其瘤旁黏膜也有高甲基化。结论此HDGC家系中,CDH1基因外显子胚系突变不是其致病原因,基因启动子区的甲基化可能是导致基因失活的原因之一。

抑癌基因甲基化与胃癌关系研究进展

肿瘤是遗传学和表遗传学共同作用的结果。胃癌表遗传学主要表现为DNA甲基化和组蛋白修饰。几种抑癌基因的甲基化导致其功能缺失,在胃癌的发生发展和转移中起着非常重要的作用,本文对此作了综述。