巢式甲基化特异性PCR检测肝细胞癌患者血清中RASSF1A和CDH13基因启动子区甲基化

为了检测肝细胞癌患者血清中RASSF1A和CDH13基因启动子的甲基化状态,收集肝细胞癌患者及健康对照者的血清标本,采用巢式甲基化特异性PCR(nMSP)法检测RASSF1A和CDH13基因启动子区甲基化状态.结果肝细胞癌患者血清样品中RASSF1A和CDH13基因启动子区甲基化率为53.12%和31.25%,68.75%的患者血清可以检测到异常甲基化,正常对照血清中未检测到RASSF1A和CDH13基因启动子区甲基化,RASSF1A和CDH13基因甲基化与患者的临床病理资料无明显相关性(P>0.05);表明nMSP法检测血清中RASSF1A和CDH13基因启动子区甲基化具有较高的敏感性,可为肝细胞癌的筛查、早期诊断和预后判断提供有价值的信息.

非小细胞肺癌患者血清CDH13基因甲基化检测及意义

肺癌是全世界范围内首位肿瘤死因。由启动子异常甲基化造成的特定基因的沉默在肺癌发病机制中起重要作用。钙黏附素（cadherin）是调整上皮表型和肿瘤侵袭力的细胞黏附分子[1]。CDH13是cadherin家族的成员之一，是一个候选抑癌基因，在人类多种肿瘤中因启动子甲基化而沉默。

5-氮-2’脱氧胞苷诱导肺癌细胞系CDH13基因去甲基化及其表达

目的观察去甲基化制剂5-氮-2’脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dC)对人肺癌细胞系A549和LTEP-a2中CDH13基因启动子区甲基化状态及表达的影响,探讨肺癌细胞CDH13基因失活的机制及去甲基化制剂对CDH13基因表达的调控作用。方法 5-Aza-dC处理体外培养的肺癌细胞A549、LTEP-a2及正常肺细胞系HFL1后,用甲基化特异性PCR(MSP)法检测处理前后细胞中CDH13基因的甲基化状态,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测用药前后细胞中CDH13 mRNA表达的变化。结果正常肺细胞中未见CDH13启动子甲基化,肺癌细胞A549、LTEP-a2均发现CDH13启动子甲基化现象;应用5-Aza-dC能使CDH13基因启动子区CpG岛发生去甲基化。肺癌细胞A549、LTEP-a2均可见CDH13 mRNA表达,但与正常肺细胞比较表达较弱,经药物处理癌细胞后其CDH13 mRNA的表达较前明显增强。结论启动子区异常甲基化是肺癌细胞CDH13基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂5-Aza-dC能完全逆转CDH13基因甲基化状态,从而调控CDH13基因表达。

中国荷斯坦牛金黄色葡萄球菌诱导型乳房炎CDH13基因甲基化分析

为探索钙黏蛋白13基因(cadherin 13,CDH13)甲基化在奶牛金黄色葡萄球菌乳房炎中的调控机制,本试验在已建立的金黄色葡萄球菌诱导型荷斯坦牛乳房炎模型的基础上利用重亚硫酸盐测序技术(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测正常乳腺组织和乳房炎乳腺组织候选基因CDH13的甲基化程度,并分析其甲基化程度与基因表达水平的关系。结果显示,除金黄色葡萄球菌致病组(试验组)第12个CpG岛外,其余所有CpG岛均呈现不同程度的甲基化:-259处甲基化水平最高(50%~60%),-144、-135和-126处甲基化均较低,为5%左右。试验组和对照组总体甲基化率分别为10.13%±1.81%和14.43%±0.55%,不同位点和总体甲基化率无显著差异(P>0.05)。与正常乳腺组织相比,乳房炎感染组乳腺组织CDH13基因表达上调,CDH13基因-162和-93两个CpG岛甲基化水平与其基因表达呈显著负相关(P<0.05)。本试验结果表明,CDH13基因甲基化影响其基因表达,从而影响乳房炎的发生,为进一步探索其在金黄色葡萄球菌致病型乳房炎中的发病机制提供了参考依据。

CDH13基因启动子区域突变和甲基化与肺癌的关系研究进展

随着社会经济的增长,医学水平和生活水平的提高,人们对于健康的意识逐渐增强,恶性肿瘤通常发现较晚,后果严重,患者及家属对其发生发展存在着众多质疑。因此,针对性的研究尤为重要。近年来研究表明,CDH13(基因T钙黏蛋白)基因启动子区域突变和甲基化对肺癌的发生有一定影响。现就CDH13基因启动子区域突变和甲基化与肺癌的关系做一综述。

CDH13基因在食管癌细胞株EC1和EC109中的甲基化研究

目的:探讨食管癌细胞中CDH13基因启动子区甲基化状态,以及5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)作用对CDH13基因甲基化状态及其表达的影响。方法:5-Aza-CdR处理前后分别采用甲基化特异性PCR(MSP)检测食管癌细胞EC1和EC109中CDH13基因启动子区甲基化状态,Western blot检测CDH13蛋白表达水平的变化。结果:CDH13基因在EC1中呈半甲基化,在EC109中呈完全甲基化。5-Aza-CdR可逆转食管癌细胞中CDH13基因甲基化,恢复其蛋白的表达。结论:CDH13基因异常甲基化可能是其在食管癌中失活的重要方式,应用5-Aza-CdR可逆转甲基化状态,并恢复CDH13表达。

急性髓系白血病病人CDH13基因甲基化状态检测及其临床意义

目的:检测急性髓系白血病(AML)病人CDH13基因甲基化状态,探讨其与病人临床特征及预后的相关性。方法:用甲基化特异性PCR法分别检测34例AML病人(AML组)和22例非恶性肿瘤的缺铁性贫血病人(对照组)骨髓标本中CDH13基因启动子甲基化状态,用半定量反转录PCR法检测2组标本中CDH13 mRNA相对含量。AML组病人随访2年,统计总体生存时间。结果:AML组标本CDH13基因甲基化阳性率为61.76%,高于对照组的27.27%(P<0.05);AML组CDH13mRNA相对含量为0.355±0.109,明显低于对照组的0.745±0.271(P<0.01)。不同性别、年龄以及临床分型AML病人的CDH13基因甲基化差异均无统计学意义(P>0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,CDH13基因甲基化阳性的AML病人总体生存时间为(12.4±3.3)个月,明显短于甲基化阴性病人的(18.6±4.1)个月(P<0.01)。结论:AML病人中存在CDH13基因甲基化现象,检测CDH13基因表达水平有助于判断AML病人预后。

5-氮-2'脱氧胞苷对食管癌细胞系KYSE220中CDH13基因甲基化的影响

目的观察去甲基化制剂5-氮-2’脱氧胞苷(5-Aza-dC)对人食管癌细胞系KYSE220中CDH13基因启动子区甲基化影响,探讨KYSE220中CDH13基因失活机制及5-Aza-dC对CDH13基因表达调控作用。方法 5-Aza-dC处理体外培养的KYSE220细胞,用甲基化特异性PCR(MSP)法检测处理前后细胞中CDH13基因甲基化状态,半定量RT-PCR法检测用药前后细胞中CDH13 mRNA表达变化。结果 KYSE220中CDH13启动子区发现甲基化现象,应用5-Aza-dC使CDH13基因启动子区CpG岛去甲基化,经药物处理癌细胞后其CDH13 mRNA表达较前明显增强。结论去甲基化制剂5-Aza-dC能逆转CDH13基因甲基化状态,从而调控CDH13基因表达。

5-氮-2’-脱氧胞苷对食管癌细胞系OE33中CDH13基因甲基化的影响

目的:观察去甲基化制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对人食管癌细胞系OE33中CDH13基因启动子区甲基化状态的影响,探讨OE33中CDH13基因失活的机制及5-Aza-dC对CDH13基因表达的调控作用。方法:5-Aza-dC处理体外培养的OE33细胞,用甲基化特异性PCR(MSP)法检测处理前后细胞中CDH13基因的甲基化状态,半定量RT-PCR法检测用药前后细胞中CDH13mRNA表达的变化。结果:OE33中CDH13启动子区发现甲基化现象,应用5-Aza-dC能使CDH13基因启动子区CpG岛去甲基化,而且经药物处理癌细胞后其CDH13mRNA的表达较前明显增强。结论:去甲基化制剂5-Aza-dC能逆转CDH13基因甲基化状态,从而调控CDH13基因表达。

急性髓系白血病CDH13基因启动子甲基化的定量研究

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者抑癌基因CDH13基因启动子区域的甲基化情况。方法:选取76例原发初治AML患者的骨髓细胞及其中13例AML患者首次化疗前后的骨髓细胞作为实验组,11例缺铁性贫血(IDA)患者的骨髓标本作为对照组,10例健康者外周血标本作为观察组。应用焦磷酸测序方法检测所有入选对象CDH13基因启动子甲基化水平,并初步探讨其与AML患者临床特征的关系。结果:76例原发初治AML患者中41例CDH13基因高甲基化,甲基化阳性率为53.9%。13例首次化疗后完全缓解的AML患者均未有CDH13基因高甲基化,而这13例标本初诊时有8例CDH13基因高甲基化,甲基化阳性率为61.5%,甲基化平均值为27.65%,治疗前CDH13基因甲基化水平显著高于治疗后(t=4.724,P<0.01)。原发初治AML与IDA标本CDH13基因启动子高甲基化阳性率差异有统计学意义(53.9%∶9.1%,χ2=7.743,P=0.008)。CDH13基因在原发初治AML患者M2分型中高甲基化阳性率,明显高于其他各型(P<0.05)。CDH13基因的高甲基化与AML患者的年龄、性别及M2患者是否存在染色体t(8,21)无明显相关性。结论:CDH13基因启动子区域高甲基化在AML中普遍存在,其可能是引起AML的分子机制之一。

甲基化在肺癌中的意义

目的探讨基因T-钙黏蛋白(CDH13)在40例癌组织,40例的癌旁组织标本和非肺癌良性肺切除组织标本15例作为对照的表达的临床意义,进一步研究其基因异常甲基化与肺癌的相关性。方法采用特异性甲基化PCR(MSP)检测该基因在肺癌组织中异常甲基化的水平。结果 1.在肺癌组织中CDH13基因甲基化率明显高于癌旁组织和非肺癌良性肺切除组织,甲基化率分别为32.5%、7.5%、6.7%,有统计学意义(P<0.05)。2.CDH13基因异常甲基化和CDH13的表达水平呈负相关性(r=-0.520).3.CDH13基因启动子区5’CpG岛甲基化阳性率在肺癌组织中显著高于癌旁组织和非肺癌良性肺切除组织,CDH13基因启动子区5’CpG岛甲基化导致了CDH13的表达下调。结论在肺癌组织中CDH13基因异常甲基化率明显升高且有临床诊断意义,CDH13基因在癌组织中的异常甲基化水平将有望成为肺癌新的治疗靶点。