MicroRNA-194下调CDH2表达抑制神经胶质瘤细胞增殖

目的明确microRNA-194(miR-194)对神经胶质瘤细胞增殖的抑制作用。方法设计合成miR-194 mimicis并转染U87细胞1~6d后用噻唑蓝实验检测其对细胞存活率的影响,并通过蛋白免疫印迹实验检测miR-194 mimicis转染U87细胞36h后对靶基因CDH2蛋白表达水平的下调作用。结果 100ng的miR-194 mimicis可显著抑制CDH2基因的蛋白表达水平并抑制神经胶质瘤细胞的增殖。结论 miR-194具有抑制神经胶质瘤细胞增殖的作用;下调CDH2基因的蛋白表达水平是miR-194抗肿瘤作用的重要分子机制。

生命早期铁缺乏对CDH2基因突变大鼠神经行为学的影响

目的研究生命早期铁缺乏对CDH2基因突变大鼠神经行为的影响,并探讨环境因素铁营养缺乏与CDH2基因突变在孤独症样行为发生中的交互作用。方法将已建立CDH2基因点突变模型的SD雌性大鼠16只随机分为缺铁组8只和正常对照组8只。与雄性大鼠配对后,从确定怀孕起,缺铁组给予低铁饲料喂养以诱导大鼠孕期及哺乳期缺铁;正常对照组给予标准饲料喂养。子代出生后随机选取27只缺铁组仔鼠,27只对照组仔鼠,应用超声波发声实验检测仔鼠语音交流能力;应用动物行为学视频分析系统Smart3.0软件记录旷场实验、三箱社交实验的视频和数据,并统计分析相关行为学特征变化。结果子代出生后10日龄时缺铁组大鼠发声次数[(755.67±161.86)次]明显低于对照组[(1 461.89±166.57)次](P<0.05);发声持续时间[(41.77±16.17)s]明显低于对照组[(86.22±10.07)s](P<0.05)。仔鼠出生后6和8日龄时,CDH2基因突变和缺铁对大鼠发声次数的减少有协同作用(P<0.05)。缺铁组大鼠的总运行距离、在外周区域的运行距离、总平均速度、外周平均速度均大于对照组(P<0.05);此外,铁缺乏大鼠站立次数及不靠壁站立次数减少(P<0.05)。三箱社交实验第二阶段与对照组相比,缺铁组大鼠与新陌生鼠2交流时间较短,与旧陌生鼠1交流互动时间较长,表现出社交能力减弱的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论生命早期铁缺乏与CDH2基因突变的大鼠发生了孤独症样神经行为改变,并存在一定的协同作用,可能增加了孤独症谱系障碍的发生风险。

miR-150-3p靶向CDH2基因对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺组织损伤的影响

目的:探究miR-150-3p靶向CDH2基因对缺氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠肺组织损伤的影响。方法:将新生Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、阴性对照组和miR-150-3p过表达组,每组10只。除对照组外,其余各组构建新生大鼠HPH模型。分别检测各组大鼠缺氧3、6、12 d时的平均肺动脉压(mPAP),酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和内皮素-1(ET-1)水平;在缺氧12 d时,Western blotting检测大鼠肺组织HIF-1α、ET-1、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和钙黏蛋白2(CDH2)表达情况,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测大鼠肺组织miR-150-3p、CDH2 mRNA表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-3p与CDH2之间的靶向关系。结果:与对照组相比,模型组和阴性对照组大鼠出现反应迟钝、萎靡不振、食量减少、肺组织炎症细胞浸润、肺泡大小改变等现象;大鼠mPAP,血清HIF-1α、ET-1水平,肺组织HIF-1α、ET-1、iNOS和CDH2蛋白表达均明显升高(P<0.05);肺组织miR-150-3p表达明显降低,CDH2 mRNA表达明显升高(P<0.05)。与模型组、相比,阴性对照组上述指标均无显著差异(P>0.05)。与模型组、阴性对照组相比,miR-150-3p过表达组大鼠反应迟钝、炎症细胞浸润等不良现象均获得良好改善,且大鼠mPAP,血清HIF-1α、ET-1水平,肺组织HIF-1α、ET-1、iNOS和CDH2蛋白表达均降低(P<0.05);肺组织miR-150-3p表达明显升高,CDH2 mRNA表达明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果证明CDH2为miR-150-3p的靶基因。结论:miR-150-3p能够通过靶向CDH2基因减轻HPH新生大鼠肺组织损伤。

MiR-144-3p在肺腺癌中的机制研究

目的miR-144-3p在肺腺癌中的作用机制,为肺腺癌的靶向治疗提供新思路。方法通过qRT-PCR和Western blot检测miR-144-3p和CDH2在肺腺癌细胞中的表达。通过荧光素酶测定miR-144-3p对CDH2的靶向结合关系;采用MTT法检测其生长及增殖能力;通过Transwell实验测定细胞侵袭能力。结果MiR-144-3p在肺腺癌细胞系和组织中显著下调,miR-144-3p的过表达显著抑制肺腺癌细胞的生长、增殖和侵袭。此外,CDH2是肺腺癌细胞中miR-144-3p的特定靶标,抑制CDH2的表达可以抑制肺腺癌细胞的生长、增殖和侵袭能力。结论MiR-144-3p通过靶向下调CDH2抑制肺腺癌细胞的生长、增殖和侵袭,这些发现表明miR-144-3p可能在肺腺癌中起到抑癌作用,miR-144-3p/CDH2可能是肺腺癌治疗中的新型治疗靶标。

PTEN基因在子宫内膜癌细胞上皮间质转化中的作用

目的探讨张力蛋白同源基因(PTEN)基因在子宫内膜癌细胞上皮间质转化(EMT)中的作用。方法 PLVX-PURO-PTEN慢病毒载体转染后获得ishikawa-PTEN细胞,以QPCR检测CDH1、CDH2的mRNA表达水平、流式细胞术检测CD133表面标志物阳性表达水平。结果 ishikawa-PTEN细胞的CDH1mRNA表达量低于对照组,CDH2 mRNA表达量则高于对照组,CD133阳性表达比对照组低。结论 PTEN在抑制子宫内膜癌细胞EMT中起重要作用,可为判断子宫内膜癌预后提供依据。

miRNA-194在骨肉瘤中靶基因的预测和验证

目的:对miRNA-194在骨肉瘤中的作用机制进行探索和研究,为研究miRNA-194在骨肉瘤中的作用及可能的生物治疗提供理论依据和研究基础。方法:使用生物信息学软件对miRNA-194在骨肉瘤中可能的靶基因进行预测,并在基因水平和蛋白水平进行相应的验证。此外,利用荧光素酶基因报告实验对其靶基因(CDH2)进行DNA水平的直接验证。结果:使用生物信息学软件预测出了多个可能的潜在靶基因(367个,6014个和212个);荧光素酶基因报告实验显示野生PTEN-3'-UTR在miRNA-194上调组明显的低表达,同时下调组明显的高表达(P<0.05);同时,western实验显示在蛋白水平miRNA-194直接靶向作用于CDH2(P<0.05),而在m RNA水平则无明显作用(P>0.05)。结论:经预测和验证,CDH2是miRNA-194在骨肉瘤中的直接靶基因,为接下来关于miRNA-194在骨肉瘤中的各项研究奠定了良好的实验基础。