CDHR2 过表达通过抑制 PI3K/Akt 通路抑制乳腺癌细胞增殖

目的研究CDHR2通过PI3K/Akt信号通路抑制乳腺癌细胞生长和细胞周期的作用机制。方法利用生物信息学分析CDHR2在乳腺癌中的表达及生存预后情况,并利用免疫组化验证,采用qRT-PCR、Western blot检测5株乳腺癌细胞株与正常乳腺上皮细胞中CDHR2的表达,并分析CDHR2的表达情况。筛选出CDHR2表达量低的乳腺癌细胞系MDA-MB-231及MCF7进行质粒转染过表达CDHR2,分为NC组(空白质粒对照)和CDHR2组(CDHR2质粒过表达组)。利用CCK-8增殖实验、EdU增殖实验及细胞周期实验探究CDHR2对乳腺癌细胞生长和细胞周期的影响,通过Western blotting检测CDHR2过表达对PI3K/Akt信号通路和周期通路蛋白表达的影响。结果生物信息学分析显示在乳腺癌及癌旁中CDHR2表达量均较低且两者间差异无统计学意义(P>0.05),但高表达CDHR2乳腺癌患者预后更好(P<0.05)。免疫组化、qRT-PCR及Western blot实验提示,CDHR2在乳腺癌组织及乳腺癌细胞中表达均显著下调(P<0.01),CDHR2可以抑制乳腺癌细胞增殖及阻滞乳腺癌细胞的细胞周期(P<0.01),CDHR2能够抑制PI3K和Akt磷酸化蛋白表达、抑制周期蛋白Cyclin D1的表达。结论过表达CDHR2可能通过PI3K/Akt信号通路抑制乳腺细胞生长及阻滞乳腺癌细胞的细胞周期。

CDHR2在肺腺癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨CDHR2在肺腺癌(LUAD)组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系,并分析CDHR2与LUAD肿瘤免疫浸润的关系。方法挖掘TCGA、GEPIA数据库中CDHR2在LUAD中的表达及与预后的关系;免疫组织化学染色检测83例LUAD患者的癌组织及癌旁正常组织中CDHR2的表达情况,并分析其与患者临床病理特征及无病生存期(DFS)的关系。通过TIMER和CIBERSORT数据库分析CDHR2与LUAD肿瘤免疫浸润水平之间的关系。结果TCGA数据集中515例LUAD组织的CDHR2表达水平显著高于59例癌旁正常组织(P<0.05)。GEPIA数据库发现CDHR2高表达与较差的总生存期(OS)有关(P<0.05)。免疫组化显示CDHR2蛋白在LUAD组织中的高表达率为66.3%(55/83),高于癌旁组织的37.3%(31/83),差异有统计学意义(P<0.05)。CDHR2蛋白表达与TNM分期有关(P<0.05)。CDHR2蛋白高表达患者的中位DFS为44.6(95%CI:39.5~49.7)个月,短于低表达患者的57.3(95%CI:49.9~64.8)个月,差异有统计学意义(P<0.001)。多因素Cox回归分析显示,淋巴结转移和CDHR2蛋白表达水平可作为影响LUAD患者预后的独立因素(P<0.05)。CDHR2表达与LUAD肿瘤免疫细胞浸润显著相关(P<0.05)。结论CDHR2在LUAD组织中表达升高,其表达与TNM分期、肿瘤免疫细胞浸润及预后有关,有望成为LUAD诊治与预后的标志物。

CDHR2基因条件性敲除小鼠模型的构建及鉴定

目的:构建CDHR2基因条件性敲除小鼠模型,为研究CDHR2基因的生物学功能提供条件。方法:构建CDHR2基因条件打靶载体,电转入小鼠胚胎干细胞(ES细胞),用G418和GANC筛选阳性细胞克隆。胚胎注射阳性ES细胞入小鼠囊胚,获得嵌合体小鼠。嵌合体小鼠与Cre小鼠交配获得条件性敲除小鼠。分别通过PCR方法和免疫组织化学方法对CDHR2的敲除结果进行验证。结果:成功构建打靶载体,并获得6个正确同源重组的ES细胞阳性克隆。阳性ES细胞克隆注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得5只嵌合鼠。嵌合鼠再与Flp小鼠交配,获得6只阳性F1代去Neo小鼠。去Neo小鼠与Cre小鼠杂交,获得CDHR2基因肠道特异性敲除小鼠。免疫组织化学检测表明,阳性小鼠肠道组织中的CDHR2基因被特异性敲除,而肾脏组织CDHR2基因的表达没有受到影响。结论:成功构建CDHR2基因肠道特异性敲除小鼠,为进一步研究CDHR2基因的作用奠定了基础。