CDK1基因在肝癌预后和免疫细胞浸润的生物信息学分析

目的通过生物信息学方法研究细胞周期素依赖性激酶1(Cyclin-dependent kinase 1,CDK1)在肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达差异,探索其在肝癌预后和免疫细胞浸润间的作用。方法从GEO数据库下载肝癌数据集,使用R软件分析差异基因,并取交集基因;通过GO和KEGG分析富集通路;使用STRING和cytoscape构建差异基因互作网络,结果可视化获取核心基因CDK1;UALCAN和GEPIA数据库分析肝癌中CDK1的表达水平,及其与临床特征的关系;HPA数据库分析CDK1蛋白在肝癌组织和正常组织的表达差异;通过Kaplan-Meier Plotter分析CDK1表达水平与HCC预后的关系;TIMER数据库分析CDK1与HCC肿瘤免疫细胞浸润、免疫细胞表面标记物的相关性。结果3个肝癌数据集筛选出共有的347个差异基因;KEGG通路显示差异基因主要参与细胞周期通路;与正常组织相比,CDK1基因在HCC组织中表达水平升高;CDK1高表达与肿瘤分期、年龄均有相关性;生存分析结果表明CDK1基因高表达患者生存时间明显低于低表达患者。CDK1基因与HCC中多种免疫细胞浸润水平及其表面标记物显著相关。结论CDK1基因在HCC中表达上调,高表达的CDK1肝癌患者预后不良,并且影响HCC免疫浸润水平。CDK1基因可能为HCC新的免疫治疗靶点。

CDK1在多形性胶质母细胞瘤中的表达及其相关性研究

目的现代学者通过多种方法进行研究发现,细胞周期蛋白依赖性激酶1(cyclin-dependent protein kinase 1,CDK1)在当今已知的多种肿瘤组织中呈现出高表达现象,而且还可能与肿瘤发展密切相关。但如今对于CDK1基因在多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)中的作用尚不明晰。所以,研究主要是对CDK1基因在多形性胶质母细胞瘤的增殖调节中起到的影响进行初步探讨。方法从GEPIA在线数据库与proteinatlas在线数据库中提取了CDK1在各种肿瘤中的表达。选取2019年8月至2021年9月期间赤峰学院附属医院收治的54例多形性胶质母细胞瘤患者,记录年龄、性别、部位、复发和IDH1变异等情况后进行相关性分析,并通过免疫组化染色比较CDK1在多形性胶质母细胞瘤和癌旁正常组织中的表达水平,并观察其差异,进而得出结论。结果通过上述2个数据库中的资料发现,与正常组织相比,多形性胶质母细胞瘤中CDK1基因的表达水平上调。多形性胶质母细胞瘤临床病理特征中和复发有关(P=0.016),和年龄、性别、部位和IDH1变异情况无关。通过进一步的试验而发现,病理切片组织的免疫组织化学染色法(immunohistochemistry,IHC)表明在癌组织中的CDK1表达呈高水平。结论试验的结果表明,GBM的异常增殖与细胞周期蛋白依赖性激酶1的高表达相一致。它们的表达与多形性胶质母细胞瘤的病理性增殖有关,而且多形性胶质母细胞瘤临床病理特征中和复发有关,和年龄、性别、部位和IDH1变异情况无关。所以,CDK1可能是未来的一种治疗靶点,可为其治疗提供一种新的策略。

莱菔硫烷诱导HepG-2细胞G_2/M期阻滞及其对Cdk1和CyclinB1蛋白表达的影响

目的:研究莱菔硫烷(SFN)在体外对人肝癌HepG-2细胞G2/M期的阻滞作用,并探讨其分子作用机制。方法:10、20、40μmol·L-1的SFN处理体外培养的HepG-2细胞株48h后,采用流式细胞仪检测SFN对HepG2细胞周期的影响;WesternBlot法检测SFN对HepG2细胞内Cdk1、p-Cdk1(Thr14)和CyclinB1蛋白表达的影响。结果:SFN作用于HepG-2细胞48h后,随着SFN浓度的增大,G2/M期细胞比例逐渐升高,当SFN浓度达到40μmol·L-1时,G2/M期细胞比例达到31.95%,且出现凋亡峰;随SFN浓度的增大,细胞内Cdk1和CyclinB1蛋白的表达量显著降低(P<0.01或P<0.05),同时p-Cdk1(Thr14)的表达显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论:SFN可诱导人肝癌HepG-2细胞发生G2/M期阻滞;SFN可通过下调HepG-2细胞内Cdk1和CyclinB1蛋白的表达、上调p-Cdk1(Thr14)的蛋白表达水平,进而抑制Cdk1-CyclinB1复合物的形成和活化使人肝癌HepG-2细胞阻滞在G2/M期。

白屈菜碱对SGC-7901细胞Cdk1、cyclinB1表达影响

研究白屈菜碱对人胃癌SGC-7901细胞Cdk1、p-Cdk1(Thr14)、cyclinB1蛋白表达,探讨白屈菜碱诱导人胃癌SGC-7901细胞G2/M期阻滞的机制.采用Western blotting法测定白屈菜碱对SGC-7901细胞Cdk1、p-Cdk1(Thr14)、cyclinB1蛋白表达的影响.不同质量浓度的白屈菜碱可显著下调人胃癌SGC-7901细胞内Cdk1与cyclinB1蛋白表达水平,同时显著上调p-Cdk1(Thr14)蛋白的表达水平,并呈一定的剂量依赖性.白屈菜碱可下调SGC-7901细胞内Cdk1和cyclinB1蛋白的表达,上调p-Cdk1(Thr14)蛋白的表达,这可能是白屈菜碱诱导SGC-7901细胞G2/M期阻滞的主要机制之一.

Cyclin B1、CDK1在肺癌中过表达及其意义

采用免疫组化ABC法检测 12例肺癌组织、11例癌旁组织及 3例正常肺组织中cyclinB1、CDK1蛋白的表达情况 ,以探讨细胞周期蛋白cyclinB1及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1在不同肺癌组织中的异常表达及其临床意义 .结果显示cyclinB1在正常肺组织、癌旁组织、癌组织中阳性率分别为 0 %、9.1%和 5 0 .0 % ,CDK1的阳性率则为0 %、18.2 %和 75 .0 % ,cyclinB1、CDK1在小细胞肺癌和鳞癌中存在广泛的过表达 ,而在大细胞肺癌中没有表达 。

山奈酚对CNE-2细胞周期及CyclinB1、Cdk1mRNA表达的影响

目的:观察山奈酚对鼻咽癌CNE-2细胞周期分布及细胞周期素B1(CyclinB1)、细胞周期依赖性蛋白激酶1(Cdk1)表达的影响。方法:分别用0、20、40、60、80和100μmol/L的山奈酚处理CNE-2细胞。处理24、48和72h后,应用MTT法测定CNE-2细胞活力;处理24和48h后用流式细胞术检测细胞周期;处理24h后用RT-PCR技术检测细胞CyclinB1及Cdk1mRNA的表达水平。结果:随山奈酚作用剂量的增加和作用时间的延长,CNE-2细胞活力逐渐降低(F浓度=385.194,F时间=237.324,F浓度×时间=13.757,P<0.001),细胞被阻滞于G2/M期(P<0.05);CNE-2细胞中CyclinB1和Cdk1mRNA的表达量随山奈酚作用浓度的增加而逐渐降低(F=95.682、154.871,P<0.001)。结论:山奈酚可能通过下调CNE-2细胞CyclinB1和Cdk1mRNA的表达水平,诱导G2/M期阻滞,抑制其增殖。

CDK1靶向shRNA质粒载体的构建及鉴定

目的:设计并构建CDK1-shRNA质粒表达载体,转染肝癌HepG2细胞,验证shRNA对肝癌HepG2细胞CDK1基因的沉默效应,便于进一步研究CDK1的功能。方法:设计针对CDK1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的 pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体片段进行连接、转化。经测序等方法鉴定重组克隆。将重组载体质粒经脂质体包裹转染肝癌HepG2细胞,realtime PCR及Western blot检测RNA干扰效果。结果:重组克隆经测序证实插入的序列正确,realtime PCR及Western blot检测证实设计的3条RNA干扰序列有效沉默了肝癌HepG2细胞中的内源性CDK1。结论:所制备的CDK1-shRNA在肝癌HepG2细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应,以CDK1为靶向的shRNA能够有效下调CDK1基因的表达,对周期依赖激酶CDK1功能的研究奠定基础。

细胞周期依赖性蛋白激酶1(Cdk1/p34cdc2)对喉癌术后局部复发的预测价值

目的检测喉鳞状细胞癌及癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白表达及其与患者预后的关系。方法应用免疫组化SP法检测85例喉鳞状细胞癌及癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白的表达,并收集临床病理资料进行随访。结果在随访2年以上的喉鳞状细胞癌中14例出现局部复发(复发组),71例未复发(未复发组)。在喉鳞状细胞癌和癌切缘组织中p53蛋白阳性率分别为60.0%和36.5%;p21蛋白阳性率分别为38.8%和21.2%;Cdk1/p34cdc2蛋白阳性率分别为70.6%和29.4%。喉鳞状细胞癌复发组和未复发组的切缘组织中p53蛋白阳性率分别为71.4%和29.6%(P=0.003),切缘组织中p21蛋白阳性率分别为50.0%和15.5%(P=0.004),切缘组织中Cdk1/p34cdc2蛋白阳性率分别为57.1%和23.9%(P=0.013)。癌旁切缘组织中p53与p21及Cdk1/p34cdc2蛋白表达之间无相关性(P均>0.05)。结论 p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白在喉鳞状细胞癌的发生、发展中可能起重要作用;癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2过表达与喉鳞状细胞癌局部复发密切相关。

P53、P21^(WAF1)和CDK1在卵巢上皮性癌组织中的表达及意义

背景与目的:P53、P21WAF1和CDK1是细胞周期中G2/M期DNA损伤检验点"P53通路"的关键因子,本研究拟探讨P53、P21WAF1和CDK1在卵巢上皮性癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学技术检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织、76例卵巢上皮性癌组织中P53、P21WAF1、CDK1蛋白的表达,并分析卵巢上皮性癌组织中P53、P21WAF1、CDK1蛋白表达与其临床病理特征的关系以及各蛋白表达之间的相关性。结果:P53、P21WAF1和CDK1蛋白在卵巢上皮性癌中的阳性率与正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤相比其差异均有统计学意义(P<0.05),而在正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤之间其阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。在卵巢上皮性癌中,临床分期越晚、组织分化越差,P53蛋白表达越高;随着临床分期的增加,P21WAF1蛋白表达逐渐降低;CDK1蛋白的表达与各临床病理特征无相关性。卵巢上皮性癌中P53蛋白和P21WAF1蛋白的表达与CDK1蛋白的表达呈负相关(r=-0.388,P=0.001;r=-0.282,P=0.014),P53蛋白与CDK1蛋白表达呈正相关(r=0.263,P=0.022)。结论:P53蛋白与卵巢上皮性癌的恶性程度相关,P53和P21WAF1蛋白可能与卵巢上皮性癌的恶性进展有关。检测CDK1可能有助于卵巢癌的早期诊断。

CDC25A与CDK1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:探索CDC25A和CDK1在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组化的方法检测119例胃癌组织中CDC25A和CDK1的表达情况,通过统计分析CDC25A和CDK1与胃癌患者的临床病理特征之间的关系。结果:CDC25A和CDK1在高分化胃癌组织低表达,在低分化胃癌组织中高表达,与胃癌的病理分级具有相关性(P<0.001);CDC25A和CDK1在早期胃癌中低表达,在晚期胃癌组织中高表达,与胃癌TNM分期具有相关性(P<0.01);CDC25A和CDK1的表达与胃癌患者有淋巴结转移(P<0.001)相关,CDC25A和CDK1在发生淋巴结转移的胃癌组织中高表达,在未发生淋巴结转移的胃癌组织中低表达。结论:CDC25A与CDK1有望成为胃癌诊断与治疗的潜在的分子标志。

MicroRNA-490-5p靶向CDK1通过ERK信号通路参与胃癌细胞周期调控

目的:探讨miR-490-5p对胃癌细胞增殖与周期的调控作用和分子机制,以期为临床治疗胃癌提供新的有效靶点。方法:收集30例胃癌患者的胃癌组织及相应的癌旁组织标本;采用Real-time PCR法检测miR-490-5p和CDK1的表达水平;分析细胞周期相关蛋白CDK1与miR-490-5p的靶向关系。MTT法和流式细胞仪检测转染后胃癌细胞生长以及细胞周期情况。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-490-5p的表达显著下调(P<0.001);转染miR-490-5p mimics的细胞中miR-490-5p的表达显著上调,而miR-490-5p inhibitors中miR-490-5p显著下降(均P<0.001);CDK1是miR-490-5p的靶基因;下调miR-490-5p、上调CDK1能促进胃癌细胞的增殖能力及G1/S期的转化(均P<0.001)。结论:通过上调miR-490-5p可以抑制胃癌细胞的恶性增殖,减少CDK1表达,抑制ERK信号途径,降低了G1/S期的转化速率,从而为胃癌诊断及治疗提供新靶标。

P53、P21WAF-1和CDK1在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨p53、p21^WAF-1蛋白、CDK1在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法收集正常乳腺组织120例和乳腺癌组织480例,通过免疫组化EnVision方法检测p53、p21^WAF-1和CDK1蛋白的表达情况,并进行统计学分析。结果p53、p21^WAF-1和CDK1蛋白在正常乳腺组织与乳腺癌组织中的阳性率比较差异显著(P<0.05);且乳腺癌中P53表达率与p21^WAF-1表达率呈负相关(r=-0.364,P<0.05),P53表达率与CDK1表达率呈正相关(r=0.626,P<0.05);p21^WAF-1表达与CDK1表达呈负相关(r=-0.218,P<0.05)。p53、p21^WAF-1表达乳腺癌临床分期、组织学分级、病理类型及淋巴结转移有相关性(P<0.05),与患者年龄无相关性(P>0.05);CDK1表达乳腺癌组织学分级、病理类型及淋巴结转移有相关性(P<0.05),与患者临床分期和年龄无关(P>0.05)。结论p53、p21WAF-1蛋白和CDK1的表达与乳腺癌的发生发展相关,且p53蛋白与CDK1的表达呈正相关,与p21^WAF-1蛋白表达呈负相关,可推断乳腺癌的p53-p21^WAF1-CDK1信号通路调节G2/M检验点机制,参与乳腺癌的发病过程。

宫颈癌组织中CDC6、CDK1的表达及其与HPV_(16/18)感染的相关性研究

目的:研究CDC6、CDK1在宫颈癌组织中的表达及其与HPV16/18感染的相关性,以探讨宫颈癌的发生机制,进一步寻找宫颈癌诊断的新的分子标志物。方法:采用免疫组织化学方法对50例宫颈癌石蜡标本、宫颈上皮内瘤样病变CINⅠ20例、CINⅡ-Ⅲ20例、正常宫颈组织20例进行CDC6、CDK1的检测,同时采用PCR技术检测HPV16/18感染情况。结果:在宫颈癌组织中CDC6、CDK1的阳性率高于CIN和正常宫颈组织,差异有显著性(均P<0.05),且CDC6、CDK1阳性表达率与病理分级有关,差异有显著性(均P<0.05),CDC6阳性表达率均与淋巴结转移有关(P<0.05);CDK1阳性表达率均与淋巴结转移无关(P>0.05);在宫颈癌组织中CDC6和CDK1的阳性表达率与年龄、临床分期无关(均P>0.05)。HPV16/18在正常宫颈组织、CIN和宫颈癌中的阳性率逐渐升高,差异有显著性(P<0.05),但与临床分期、病理分级、淋巴转移、年龄无关(均P>0.05)。CDK1和CDC6的表达有正相关性(rs=0.529,P<0.05);CDC6与HPV16/18感染有关(rs=0.386,P<0.05);CDK1与HPV16/18感染无关(rs=0.145,P>0.05)。结论:宫颈上皮内瘤样病变及宫颈癌组织中CDC6表达的改变可能与HPV16/18感染有关,且互相作用,共同影响CIN的发展及宫颈癌的发生。这些指标综合分析可能为阐明HPV16/18的恶性转化机制以及为提高宫颈癌及其癌前病变诊断率提供参考依据。CDC6、CDK1的异常表达与宫颈癌的恶变程度有关,可作为宫颈癌筛查、预后判断的有用指标。

CDK1干扰调节PLK1、Aurora B和TRF1对白血病细胞增殖的影响

目的:研究CDK1干扰调节PLK1、Aurora B和TRF1对白血病细胞增殖的影响。方法:以人髓原细胞白血病细胞株HL-60为研究对象,通过调节胞内CDK1表达来研究TRF1表达及其变化对细胞增殖和周期的影响。实验分为对照、shRNA-NC、CDK1-shRNA、pcDNA和pcDNA-CDK1共5组。采用RT-PCR检测各组细胞中CDK1表达;集落形成检测细胞增殖;Western blot检测CDK1、PLK1、Aurora B、TRF1及周期蛋白p53、p27和cyclinA的表达。结果:与对照组相比,CDK1-shRNA组中PLK1、Aurora B磷酸化水平及TRF1表达显著下调(P<0.05),细胞集落形成率显著下降,周期相关蛋白p53和p27表达显著升高而cyclinA表达则显著下降(P<0.05)。这表明,干扰CDK1表达可抑制HL-60细胞增殖并延长其进入有丝分裂的时间,从而延长细胞周期。而与对照组相比,pcDNA-CDK1组中CDK1过表达则使PLK1、Aurora B磷酸化水平及TRF1表达显著上升(P<0.05),克隆形成率显著升高,周期相关蛋白p53和p27显著下降且cyclinA表达显著上调(P<0.05)。这表明,CDK1过表达可刺激不良反应发生,从而促进HL-60细胞的增殖并缩短细胞周期。结论:敲除CDK1可抑制PLK1和Aurora B磷酸化并负向调节TRF1,从而抑制白血病细胞的增殖。

Cdc2/cdk1和survivin特异性siRNA真核表达载体的设计、构建和鉴定

目的：构建表达靶向cdc2/cdk mRNA和survivin mRNA的siRNA真核表达质粒。方法：从GenBank中搜索Cdc2/cdk1和survivin基因组标准序列,根椐siRNA设计原理构建siRNA真核表达质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivinshRNA。phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2、pU6-HK-shRNA质粒均含有增强绿色荧光基因作为报告基因和酶切位点,而phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2均含有红色荧光基因作为报告基因和酶切位点。质粒酶切、电泳、测序鉴定;用脂质体转染鼻咽癌CNE2细胞,荧光显微镜下观察、摄片、计数阳性细胞,计算转染效率,激光共聚焦显微镜检测质粒载体绿色和红色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测真核表达质粒对相应蛋白的抑制率。结果：荧光显微镜下计算转染效率显示在转染鼻咽癌细胞CNE2 48h转染率高达45.00%-57.45%;质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2和pU6-HK-shRNA酶切后均可见400bp条带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;在共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达相应荧光;免疫印迹检测phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivin-shRNA2对鼻咽癌CNE2细胞相应蛋白抑制率分别是33.00±1.41、38.31±1.01（survivin）、36.33±1.21和43.26±1.02（cdk1）。结论：本实验构建了靶向Cdc2/cdk1mRNA和survivin mRNA的真核表达质粒。重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞,phU6-cdc2/cdk1-shRNA2和phU6-survivin-shRNA2与phU6-cdc2/cdk1-shRNA1和phU6-survivin-shRNA1相比,转染CNE2 48h后其对相应蛋白的干扰率相对较高。

甘草黄酮类化合物对CDK1的抑制活性及体内外抗肝癌活性

探讨甘草黄酮类化合物对细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK1)的抑制活性及抑制肝肿瘤细胞Bel-7402活性。采用CDK1和CCK-8试剂盒分别测试甘草黄酮类化合物对CDK1的抑制活性和对肝癌Bel-7402细胞的体外增殖抑制活性。构建肝癌Bel-7402裸鼠皮下肿瘤模型,并将小鼠随机分为3组:灌胃给药组、阳性药物组和空白对照组,连续灌胃给药18 d,每隔1天记录实验小鼠的体重、肿瘤大小变化。结果表明,甘草黄酮类化合物对CDK1/cyclin B均展现出了抑制活性,尤其是异甘草素对CDK1/cyclin B的抑制活性(IC_(50)=0.05±0.005μmol/L)是阳性药物夫拉平度(IC_(50)=0.29±0.230μmol/L)的近6倍;通过分子对接研究发现,异甘草素在CDK1中能够与氨基酸残基K33、E81、L83、S84、D86、D149形成6个氢键,而阳性药物夫拉平度仅与氨基酸残基E81、L83、S84、Q132、D149形成5个氢键;体外抗肿瘤活性研究表明,甘草黄酮类化合物对Bel-7402有较强的抑制作用,其中异甘草素对Bel-7402(IC_(50)=0.7±0.11 mol/L)展现出了最强的抑制活性,是阳性药物夫拉平度(2.4±0.34)mol/L的3倍。动物体内研究表明,异甘草素的LD_(50)为4.38 mg/kg,并能够有效抑制肝癌Bel-7402细胞的增长。

CDK1、CENPT和P53在乳腺癌中的表达及意义

目的:研究CDK1、CENPT和P53在乳腺癌中的表达情况,探讨基因表达与乳腺癌患者生存率及病理阶段分型的关联性和调控关系。方法:GEPIA数据库分析乳腺癌和正常样本中的表达与总体生存率,乳腺癌患者基因表达与病理分期影响,CENPT与CDK1、BAX、BCL2、CASP3、P53的相关性分析,UALCAN数据库验证结果。敲减CENPT后,半定量PCR检测CDK1、BAX、BCL2、CASP3、P53在MCF7细胞系中的表达。结果:CDK1、CENPT在乳腺癌及正常组织表达比较,差异均有统计学意义(P<0.05);CDK1、BCL2表达与不同病理分期比较,差异有统计学意义(P<0.05);P53不同表达乳腺癌患者总体生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌MCF7细胞系敲减CENPT后P53、BAX、CASP3表达量均减少(P<0.05)。结论:与正常组织比较,在乳腺癌中CENPT表达水平降低,CDK1表达水平升高;P53表达水平与生存率成反比。乳腺癌中CENPT、P53、Bax、CASP3信号通路调节细胞凋亡参与乳腺癌的进展。

探究增生性瘢痕成纤维细胞中CDK4、CDK2、CDK1基因与细胞周期的相关性

目的:探究与分析增生性瘢痕成纤维细胞中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白的表达与细胞周期之间的相关性。方法:选取本院自2012年7月-2014年7月采集的40份增生性瘢痕标本,按照增生性瘢痕的时间段将所采集的标本进行分组,共分为3个月组、6个月组、1年组及2年组,每组各10份标本,另选择同时期采集到的10份正常标本作为常规对照组。观察与对比各个标本中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白情况,同时对成纤维细胞周期进行检测。结果:3个月组、6个月组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);6个月、1年组、2年组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量与3个月组相比差异均有统计学意义(P<0.05);3个月、1年组、2年组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量与6个月组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。增生期瘢痕早期高比例在细胞分裂周期中的S期间及G2/M期,结果可见,针对此细胞周期进行相关的基因调控干预,可对增生性瘢痕进一步发生发展起到有效抑制作用。结论:处于不同增生性瘢痕的时期中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白的表达趋势大致相符,增生性瘢痕细胞周期的分布情况与上述三个蛋白执行功能的情况呈相互对应的关系,为临床研究提供可靠依据。

Survivin基因及CDK1基因联合靶向shRNA真核表达载体的构建

目的构建靶向Survivin基因及CDK1基因的短发夹样RNA(Short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体。方法根据Genbank报道的Survivin序列及CDK1序列,遵循shRNA设计原则设计并合成各自靶向的Survivin、CDK1基因的shRNA寡核苷酸序列,构建pU6-shRNA-Survivin重组质粒、pU6-shRNA-CDK1重组质粒及pU6-shRNA-Survivin-U6-shRNA-CDK1双基因序列串联重组质粒,并进行限制性内切酶酶切及基因测序鉴定。结果经酶切及测序结果分析,pU6-shRNA-Survivin重组质粒、pU6-shRNA-CDK1重组质粒及pU6-shRNA-Survivin-U6-shRNA-CDK1双基因系列串联重组质粒均成功构建。结论成功构建Survivin基因及CDK1基因联合靶向shRNA重组质粒,为进一步研究Survivin基因和CDK1基因联合干扰提供了新的方法。