CDK2蛋白在胆管细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶2(cycle protein dependent activating enzyme 2,CDK2)在胆管细胞癌中的表达及临床意义。方法收集武汉大学人民医院病理科2002/2008年胆管细胞癌存档蜡块40例,其中男性20例,女性20例。另取胆管细胞癌周围正常组织5例作对照。采用免疫组织化学方法检测各组中CDK2蛋白的表达,利用HPIAS-1000图像分析系统测定各组中CDK2蛋白表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果胆管细胞癌中CDK2蛋白呈高表达,对照组中CDK2蛋白呈低表达,两组CDK2表达的平均光密度及阳性面积率有显著性差异(P<0.05)。结论CDK2蛋白在胆管细胞癌的发生和发展过程中起了重要作用。

当归注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤后CDK2蛋白的表达

目的:观察当归对缺血再灌注损伤心肌细胞内CDK2蛋白表达的影响,探讨当归抗心肌缺血再灌注损伤保护作用的机理。方法:将35只SD大鼠随机分成4组:正常对照组(n=5)、假手术组(n=10)、缺血再灌注组(n=10)、当归治疗组(n=10),建立在体心肌缺血再灌注动物模型。实验完毕后,将各组动物心肌组织做免疫组织化学染色,观察各组动物心肌细胞内CDK2蛋白表达的变化。利用HPIAS-2000图像分析系统测定CDK2蛋白在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果:正常对照组心肌细胞内CDK2蛋白表达弱;当归治疗组心肌细胞内CDK2蛋白表达弱。假手术组心肌细胞内CDK2蛋白表达强,缺血再灌注损伤组CDK2蛋白表达强。图像分析结果显示,正常对照组、当归治疗组、假手术组与缺血再灌注损伤组之间CDK2蛋白的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.01);正常对照组与假手术组之间、当归治疗组与假手术组之间平均光密度及阳性面积率的差异无显著性意义(P>0 05)。结论:当归注射液对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞的增殖起着重要的作用。

当归注射液对缺血/再灌注损伤大鼠心肌P57^(kip2)和CDK2蛋白表达的影响

目的:观察当归注射液对缺血/再灌注损伤(IRI)心肌细胞P57kip2和CDK2蛋白表达的影响。方法:30只SD大鼠构建心肌IRI模型后随机分成假手术组、缺血/再灌注损伤(IRI)组和当归组,免疫组化法观察各组心肌细胞内P57kip2和CDK2蛋白表达情况,测定其平均光密度和阳性面积,并与正常对照组比较。结果:IRI组心肌细胞内P57kip2蛋白表达的平均光密度和阳性面积率均低于正常对照组和假手术组(P<0.01),而CDK2蛋白表达较高(P<0.01);当归组P57kip2和CDK2蛋白表达与正常对照组和假手术组无差异(P>0 05)。结论:当归注射液对大鼠缺血/再灌注损伤心肌细胞有保护作用。

CDK2、p27kip1蛋白与宣威地区非小细胞肺癌的关系

目的探讨CDK2、p27kip1蛋白与宣威地区非小细胞肺癌(non-small cell lung Cancer,NSCLC)生物学行为的关系.方法免疫组织化学法检测宣威和非宣威地区非小细胞肺癌患者的癌组织和正常组织(距癌组织边缘距离>5 cm)CDK2、p27kip1蛋白的表达.结果 CDK2蛋白在癌组织中的表达主要位于胞浆.CDK2在宣威腺癌组织中表达最高,明显高于CDK2在宣威鳞癌、非宣威鳞癌、非宣威腺癌以及正常肺组织中的表达(P<0.05);CDK2在宣威鳞癌中的表达也高于其在非宣威鳞癌中的表达(P<0.05);CDK2在非宣威腺癌中的表达高于其在非宣威鳞癌和非宣威正常肺组织中的表达(P<0.05);但CDK2在非宣威鳞癌中的表达与其在正常肺组织中的表达无统计学差异(P>0.05);CDK2蛋白在癌组织中的表达与临床分期及组织分化程度无关(P>0.05);与淋巴结转移有关;与实验组的病理类型有关,实验组腺癌组织的表达高于对照组腺癌组织,差异有统计学意义(P<0.05).p27kip1蛋白的表达主要位于胞浆;p27kip1在不同地区(宣威或非宣威),不同病理类型(腺癌、鳞癌)肿瘤组织中的表达均无统计学差异(P>0.05);P27kip1在正常肺组织中的表达明显高于其在肿瘤组织中的表达(P<0.05);p27kip1蛋白的表达与临床分期、组织分化程度及病理类型无关(P>0.05),与淋巴结转移有关(P<0.05).CDK2蛋白的表达与p27kip1蛋白的表达呈负相关(P<0.05).结论 CDK2蛋白在宣威癌组织的表达高于非宣威癌组织;CDK2在非宣威腺癌中的表达高于非宣威鳞癌和正常肺组织;CDK2蛋白和p27kip1蛋白在癌组织中的表达与淋巴结转移有关.CDK2蛋白在癌组织中的表达与p27kip1蛋白的表达呈负相关.

MCM7、CDK2及Ki-67蛋白在甲状腺癌中表达的临床意义

目的探讨甲状腺癌中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白表达的临床意义。方法收集甲状腺乳头状癌、甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及正常甲状腺标本各30例,然后用免疫组织化学SP法来检测所选甲状腺组织标本中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白的表达。结果 MCM7、CDK2及Ki-67蛋白在甲状腺癌中表达的阳性率分别为100.00%(30/30)、80.00%(24/30)及83.33%(25/30),三者在甲状腺乳头状癌中的阳性率均明显高于甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及正常甲状腺。甲状腺癌中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白的表达呈正相关。结论 MCM7、CDK2及Ki-67蛋白的高表达与甲状腺乳头状癌存在一定的关联,三者表达的检测可为临床上早期诊断及评价甲状腺乳头状癌的预后提供重要的参考依据。

Cyclin E、CDK_2和p21^(WAF1)在食管上皮癌变过程中的表达及意义

目的 探讨食管上皮癌变过程中细胞周期调控因子cyclin E、CDK2和p21WAF1的表达状况及其意义。方法 应用免疫组化SP法和原位杂交方法分别检测48例食管癌组织、31例非典型增生组织和17例正常食管粘膜中cyclin E、CDK2和p21WAF1蛋白及mRNA表达。应用半定量RT PCR和Western blot检测22例新鲜食管癌及相应癌旁组织的mRNA和蛋白表达。结果 从食管正常粘膜、非典型增生组织到癌组织,cyclin E和CDK2蛋白和mRNA阳性表达率逐渐上升,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。食管癌组织中cyclin E、CDK2和p21WAF1蛋白及mRNA高表达,与癌旁组织或切缘正常食管粘膜有显著性差异(P<0.01)。cyclin E、CDK2和p21WAF1 基因表达显著正相关(P<0.01 或P<0.05)。结论 食管上皮癌变过程中,细胞周期相关基因cyclin E和CDK2表达逐渐增强。cyclin E基因表达异常是食管癌变过程中的早期事件。p21WAF1 基因在食管癌中高表达,可能与细胞周期调控的反馈机制有关。

DNA损伤反应中细胞周期检查点蛋白p27^(Kip1)表达及其调控机制

为了研究DNA损伤反应中p2 7Kip1的表达及其调控机制 ,应用免疫印迹的实验结果表明 :10Gy 60 Coγ射线照射后 3h ,HeLa细胞中p2 7Kip1蛋白水平开始下降并持续到 2 4h ,进而失去它对CDKs的抑制功能 .Northern印迹结果显示 ,电离辐射 (IR)对p2 7Kip1mRNA表达水平无明显影响 ,说明电离辐射诱导p2 7Kip1表达水平的降低主要与蛋白质降解相关 ,但其具体的调控机制还不清楚 .已知在G1—S期p2 7Kip1蛋白的降低主要依赖细胞周期蛋白E Cdk2激酶将其磷酸化后的泛素化蛋白酶体途径 (ubiquitin proteasomepathway) .酶动力学研究结果揭示 :电离辐射后细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性增高 ,12h细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性达到最大 .当在照前用细胞周期蛋白E Cdk2抑制剂olomoucine (10 μmol L)抑制细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性时 ,p2 7Kip1蛋白表达水平增加 .此外 ,还观察到电离辐射可诱导p2 7Kip1泛素化水平的增高 ,而在使用蛋白酶体抑制剂MG 132 (5 μmol L)处理HeLa细胞后 ,可抑制辐射诱导p2 7Kip1蛋白水平的下调 .研究结果提示 :泛素化蛋白酶体途径参与了辐射诱导P2 7Kip1蛋白表达下调的降解机制 .

新靶点CDK2干扰RNA对人脑胶质瘤增殖影响

目的构建4个新靶点的人细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)干扰RNA真核表达载体,转染人脑胶质瘤细胞后,检测出干扰效果最好的载体及细胞增殖能力的变化。方法构建4个新靶点CDK2干扰RNA真核表达载体并用双酶切和测序鉴定;分别转染上述4个载体到人脑胶质瘤细胞株SHG44;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)比较转染后CDK2 mRNA的表达量,选出干扰效果最好的一个,检测细胞增殖能力的变化。结果成功构建4个新靶点的CDK2干扰RNA真核表达载体PCDK2-1、PCDK2-2、PCDK2-3、PCDK2-4;CDK2 mRNA表达和细胞增殖明显受到抑制,PCDK2-1的干扰效果为56%;PCDK2-1-SHG44细胞与对照组相比增殖能力减弱。结论成功构建并筛选出效果最好的新靶点CDK2干扰RNA真核表达载体,并使SHG44细胞的增殖水平降低。