兔抗细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)抗体的制备及鉴定

目的 制备兔抗重组细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)抗体并进行鉴定。方法 合成并构建pET21a(+)-CDK6重组质粒,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,经SDS-PAGE及Western blot法检测蛋白表达;用镍氮川三乙酸(Ni-NTA)亲和层析柱纯化,SDS-PAGE分析;纯化后的CDK6蛋白多部位、多次(隔周)免疫日本大耳白兔,分别于免疫的0、 2、 4、 6周取血,分离血清。采用间接ELISA检测效价,Western blot法、免疫荧光细胞化学染色和免疫组织化学染色法检测其特异性。结果 表达并获得高纯度的CDK6蛋白,制备了兔抗CDK6重组蛋白抗体,其效价达1∶30 000,能特异性识别宫颈癌细胞及宫颈癌组织中表达的CDK6蛋白。结论 成功制备了高效价、特异性强的兔抗CDK6抗体。

靶向CDK6抗肿瘤小分子抑制剂的虚拟筛选

目的:细胞周期蛋白依赖性激酶6 (Cyclin-dependent kinases 6, CDK6)过表达导致的细胞周期异常是导致癌细胞过度增殖的原因,阻断CDK6表达可抑制肿瘤存活和生长。因此,CDK6抑制剂被认为是一种很有前途的抗癌药物。运用不同的虚拟筛选方法,从Specs数据库中筛选具有CDK6抑制活性的成分。方法:在本研究中,设计了针对特定靶标CDK6的虚拟筛选流程。为了发现结构新颖的CDK6抑制剂,通过类药性评估、基于蛋白质–配体复合物的药效团搜索、分子对接技术等多轮虚拟筛选策略,从Specs数据库中寻找命中分子。结果:通过类药性初筛,共获得75,671个小分子。类药性化合物进行最佳药效团匹配得到630个小分子用于下一步的分子对接研究。最终保留了对接打分高于已知抑制剂且结合模式与已知抑制剂相似的2个小分子为最佳命中分子。结论:本研究为新一代CDK6抑制剂的开发提供研究方向。

Cdk6在维持ES细胞自我更新中的作用

细胞周期蛋白依赖性激酶6(cyclin-dependent kinase 6,Cdk6)对胚胎早期发育有着重要的作用.然而,它在胚胎干(embryonic stem,ES)细胞中的生物学功能仍不清楚.在该研究中,我们运用RNA干扰技术和基因表达分析方法探索了Cdk6在小鼠胚胎干细胞中的功能及分子机制.结果表明:Cdk6的表达水平与小鼠ES细胞的自我更新密切相关.首先,维甲酸(RA)处理和白血病抑制因子(LIF)去除实验显示,随着ES细胞的分化,Cdk6的表达水平明显降低.更为重要的是,RNA干扰介导的Cdk6表达抑制导致ES细胞自我更新相关基因的显著下调,同时伴随细胞分化基因的表达激活,提示Cdk6对维持ES细胞自我更新至关重要.

CDK6及E2F-1参与细胞周期调控pRb通路的研究进展

目前肿瘤的本质被认为是一种细胞周期病,细胞周期的调控是一种受多条件限制、由多因素参与的复杂并且精细的过程,其经典途径包括pRb途径及p53途径,其中任何一个环节出现异常,均可能导致肿瘤的发生。细胞周蛋白依赖性激酶6(CDK6)、核转录调节因子E2F-1均参与细胞周期调控的RB通路,在G1期向S期转换过程中起到非常关键的作用。现有研究已证实,在人体的很多肿瘤中CDK6、E2F-1表达均呈现异常,其与肿瘤的发生发展有密切联系。因此,进一步了解二者在细胞周期调控中的作用及其在不同类别肿瘤中的表达异常对了解肿瘤的发生发展有重大意义。

Ribociclib用于激素受体阳性乳腺癌的研究进展

根据GLOBOCAN 2018的数据,2018年全球有约210万例新诊断的女性乳腺癌病例,占女性癌症病例的近1/4,是全球女性发病率最高的恶性肿瘤,因乳腺癌死亡的患者数量约达63万例〔1〕。我国乳腺癌死亡率粗略估计为9.74/10万,占所有癌症相关死亡人数的7.85%,是中国癌症相关死亡的第五大常见原因〔2〕,尽管早期乳腺癌预后良好,但转移性乳腺癌的5年总生存率仅为22%〔3〕。晚期乳腺癌治疗的目标是缓解症状、延长患者的生存时间和提高生存质量。晚期乳腺癌主要治疗手段包括化疗、内分泌治疗、靶向治疗、免疫治疗等,对于占乳腺癌60%左右的激素受体(HR)阳性/人类表皮生长因子受体(HER)2阴性乳腺癌来说,内分泌治疗是非内脏危象患者的首选治疗〔4〕,但是随着肿瘤耐药性的发展,从内分泌治疗中获益会逐渐减少,了解和克服内分泌耐药的机制对于改善晚期乳腺癌内分泌治疗的预后具有重要意义。选择性细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4/6抑制剂就是一种有效克服内分泌耐药的策略之一〔5〕。