马鹿CDK8基因生物信息学分析与组织表达

为探究细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶8基因(CDK8)在马鹿(Cervus elaphus)鹿茸的皮、间充质、前软骨和软骨组织中的m RNA表达水平和该基因编码蛋白的生物学特性,采用PCR方法克隆马鹿CDK8基因编码区(CDS)全长序列,并连入p MD-18T载体,测得核苷酸序列,进行相似性比对和系统进化树构建;利用生物信息学方法分析CDK8蛋白的组成、结构和理化性质;利用实时荧光定量PCR技术检测CDK8基因m RNA在鹿茸组织中的表达水平。结果表明:马鹿CDK8的CDS全长1254 bp,共编码417个氨基酸;所编码的蛋白相对分子质量为47744.11,理论等电点(p I)为7.28,是一种无信号肽、定位于细胞核的亲水性不稳定蛋白,共38个磷酸化位点,蛋白的二级结构以无规则蜷曲和α螺旋为主。CDK8的mRNA在茸皮组织中表达量最高,其后依次是间充质、软骨和前软骨。CDK8是转录机器中介体复合物的重要组成部分,研究克隆获得马鹿CDK8的CDS全长序列,可为了解鹿茸再生过程中CDK8的作用机制与功能提供重要的基础数据。

β-榄香烯调控CDK8-P21通路逆转肺癌化疗耐药的机制研究

目的:在前期研究的基础上,进一步研究榄香烯调控CDK8-P21通路逆转肺癌化疗耐药的机制。方法:复制小鼠Lewis肺癌模型,造模成功后随机分为四组:模型组、香烯组、多柔比星组及榄+多组,分别予生理盐水、榄香烯、多柔比星及二者联合用药7 d,取瘤组织,荧光定量PCR及Western Blot检测瘤组织中CDK8及P21基因、蛋白表达情况。结果:与模型组比较,多柔比星组肿瘤组织中CDK8及P21基因、蛋白表达均增加(P<0.05)。与榄香烯组比较,榄+多组中P21基因、蛋白表达增加(P<0.05),多柔比星组明显增加(P<0.01)。而CDK8基因、蛋白表达无明显差别(P>0.05)。结论:化疗药物会诱导CDK8-P21通路的激活;榄香烯通过抑制P21基因、蛋白表达逆转移肺癌化疗耐药,而与CDK8-P21通路无关。

β-catenin、RIPK4、CDK8在套细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的探讨β-catenin、RIPK4及CDK8在套细胞淋巴瘤(MCL)组织中的表达及其与临床病理特征、预后之间的关系。方法采用免疫组化SABC法检测30例MCL组织和16例淋巴结炎性病变组织中β-catenin、RIPK4及CDK8的表达情况,并对MCL患者进行生存随访。分析β-catenin、RIPK4及CDK8表达的相关性及其与MCL临床病理特征、预后之间的关系。结果 MCL组织中β-catenin、RIPK4及CDK8的阳性表达率分别为55.3%、63.3%和60.0%,均高于淋巴结炎性病变组织(P<0.05);MCL组织中β-catenin、RIPK4及CDK8的表达任两者均呈正相关(r=0.600,r=0.675,r=0.367,P<0.05);β-catenin、RIPK4及CDK8的表达与性别、年龄、MIPI评分、β2微球蛋白、B症状、Ann Arbor分期均无关(P>0.05)。30例MCL患者的中位总生存期(OS)为21个月,多因素分析结果显示MIPI评分高危组、CDK8阳性表达是影响OS的独立不良预后因素。结论β-catenin、RIPK4及CDK8在MCL中高表达;β-catenin、RIPK4及CDK8的表达呈正相关;CDK8阳性表达提示预后不佳。

Ki-67抗原与CDK8在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达及临床意义

目的探究Ki-67抗原与细胞周期依赖性蛋白激酶8(CDK8)在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变中的表达和临床意义。方法选取宫颈癌患者64例,宫颈上皮内瘤变(CIN)患者138例,并对其进行分级分期,同时选取正常妇女宫颈组织50例,运用免疫组化方法检测所纳入研究病例宫颈组织Ki-67抗原与CDK8的表达水平。结果Ki-67与CDK8在正常宫颈、宫颈癌、CIN中的阳性率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);Ki-67与CDK8在宫颈癌各分化程度间,各临床分期间的阳性率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);Ki-67与CDK8在鳞癌中的阳性率与腺癌比较,及在有无淋巴结转移宫颈癌中的阳性率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论 Ki-67抗原及CDK8与宫颈癌、CIN的病变程度存在一定的关系,检测其表达水平和强弱可能有助于预测宫颈高度病变的转归。

miR-760靶向CDK8基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与迁移的影响

目的探讨miR-760对人乳腺癌细胞中CDK8蛋白表达影响及其在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的功能。方法使用实时定量PCR方法检测miR-760在人乳腺癌细胞中的表达;使用脂质体介导的miRNA转染、Western印迹法、MTT法、流式细胞仪技术分别检测转染miR-760前后CDK8蛋白表达差异及其对乳腺癌细胞增殖、迁移等细胞功能和细胞周期的影响。结果人乳腺癌细胞中miR-760表达水平较正常乳腺细胞降低;外源性上调miR-760可有效抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231 CDK8蛋白表达(抑制效率为46.3%,P<0.05);人乳腺癌细胞株MDA-MB-231转染miR-760后,其细胞增殖、迁移能力显著降低(P<0.05)。结论 miR-760可能通过靶向CDK8影响人乳腺癌细胞增殖与迁移,在乳腺肿瘤发生发展中起到抑癌基因作用。

榄香烯抑制CDK8基因表达逆转肺癌化疗耐药的实验研究

目的:研究榄香烯逆转肺癌化疗耐药的作用,及其对CDK8基因表达的影响。方法:体内研究:榄香烯、多柔比星及两者联合预处理小鼠5天后,检测各组小鼠血中CDK8基因表达情况;复制Lewis肺癌小鼠模型,观察肿瘤直径长至1cm所需时间;然后分别予榄香烯、多柔比星及两者联合用药7天,称瘤重,并检测肿瘤组织中CDK8基因表达情况。体外研究:采用榄香烯、多柔比星及二者联合预处理的小鼠血清培养A549肺癌细胞,48小时后检测各组细胞的增殖情况。结果:多柔比星预处理小鼠血清中CDK8基因表达水平较模型组升高,而其它三组之间无统计学差异;多柔比星联合榄香烯预处理组小鼠血清培养A549肺腺癌细胞的增殖速度小于二者单用组;榄香烯联合多柔比星的抑瘤率明显高于二者单用,且二者联用组小鼠肿瘤组织中CDK8基因表达水平低于多柔比星组,但高于榄香烯组。结论:榄香烯具有逆转肺癌化疗耐药的作用,这一作用的可能机理与其抑制CDK8基因表达相关。

CDK8与CD133在乳腺癌新辅助化疗疗效评价中的作用

目的探讨CDK8与CD133在乳腺癌新辅助化疗疗效评价中的作用。方法选择2016年1月至2017年12月,徐州市中心医院临床Ⅱ、Ⅲ期原发性乳腺癌患者40例,行空芯针穿刺活检,病理证实为乳腺癌后予新辅助化疗至少3个周期,用免疫组化和蛋白质印迹法检测化疗前后标本CDK8与CD133的变化。结果新辅助化疗前后,TNM分期、肿瘤直径大小、淋巴结转移个数相比,差异有统计学意义(P<0. 05)。CDK8与CD133在乳腺癌中高表达,新辅助化疗后乳腺癌组织CDK8与CD133表达减少;癌旁正常乳腺组织及纤维腺瘤组织CDK8和CD133表达量均低于新辅助化疗前乳腺癌组织(均P<0. 05)。新辅助化疗前后,CDK8和CD133变化一致,且与疗效变化一致。结论 CDK8与CD133可作为新辅助化疗疗效预测因子。

恶性肿瘤中CDK8基因的研究进展

细胞周期蛋白依赖性激酶8(cyclin-dependent kinase 8,CDK8)基因产物属于细胞周期蛋白依赖性激酶家族成员,具有促进细胞周期时相转变、启动DNA合成及调控细胞转录等功能,在细胞的增殖及分化中起重要作用,其异常表达可加速细胞周期的运行,并与子宫颈癌、结直肠癌、胃癌、恶性黑色素瘤等恶性肿瘤的发生、发展及预后相关。现就CDK8基因的结构、功能及在恶性肿瘤的研究进展作一综述。

CDK8、STAT1和TMEFF2在大肠组织中的表达及意义

目的探讨CDK8、STAT1、TMEFF2在大肠癌、大肠腺瘤及正常大肠黏膜组织中的表达情况及与临床病理特征之间的关系,探讨其在大肠癌发生、发展中的可能作用。方法组织标本均取自结肠镜活检组织标本,采用免疫组化Evision两步法,分别检测CDK8、STAT1和TMEFF2在不同大肠组织中的表达情况,并分析其与临床病理特征之间的关系。结果 CDK8表达定位于细胞核,其在100例大肠癌、15例大肠腺瘤、15例正常大肠黏膜组织中的表达率分别为37%(37/100)、0(0/15)和0(0/15),CDK8在大肠癌中的表达率明显高于大肠腺瘤和正常大肠黏膜组织(P<0.05),且其表达与患者其他各临床病理因素无明显关系(P>0.05)。STAT1表达定位于细胞浆和细胞核,其在100例大肠癌、15例大肠腺瘤、15例正常大肠黏膜组织中的表达率分别为26%(26/100)、73%(11/15)和67%(10/15),STAT1在大肠癌中的表达率较大肠腺瘤和正常大肠黏膜明显降低(P<0.05);STAT1在结肠癌中的表达率明显高于直肠癌(P<0.05),且其表达与患者其他各临床病理因素无明显关系(P>0.05)。TMEFF2在15例正常大肠黏膜、15例大肠腺瘤和15例大肠癌中均无表达。结论 CDK8在大肠癌中表达异常升高,提示CDK8在大肠癌的发生、发展中起重要作用;STAT1在大肠癌中表达下调,与大肠癌的形成及发展密切相关,STAT1的表达与肿瘤位置相关。TMEFF2在大肠癌中表达缺失,可能不参与大肠肿瘤的发生、发展过程。

CDK8缺失和/或SHP-2过表达后对SiHa细胞增殖能力的影响

目的研究CDK8缺失和/或SHP-2过表达后对SiHa细胞增殖能力的影响。方法选取SiHa细胞,利用RNA干扰技术,敲除CDK8,干扰CDK8蛋白表达;利用质粒转染技术高表达SHP-2蛋白。采用免疫印迹技术检测CDK8和SHP-2蛋白表达,同时观察并检测SiHa细胞的增殖能力的情况。结果实验结果表明,CDK8被干扰后,抑制了SiHa细胞的增殖能力;SHP-2过表达后,SiHa细胞的增殖能力无变化。结论在宫颈癌细胞中,CDK8的缺失和/或SHP-2过表达影响SiHa细胞的增殖能力,进一步验证在宫颈癌细胞中CDK8和/或SHP-2与SiHa细胞存在相关性。

Ezrin蛋白与CDK8在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达

目的:探讨Ezrin蛋白与CDK8在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达。方法:选取宫颈癌和宫颈上皮内瘤变患者各64例,采用免疫组化方法,检测宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变组织及相应病变旁组织Ezrin蛋白和CDK8的表达。结果:宫颈癌患者的癌变组织与癌旁正常组织的Ezrin蛋白与CDK8表达皆有显著性差异(P<0.01),宫颈上皮内瘤变患者的病变组织与病变组织旁正常组织的Ezrin蛋白与CDK8表达皆有统计学差异(P<0.05)。结论:宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的发生可能与Ezrin蛋白与CDK8的表达有关。

CDK8和MMP-7在结直肠癌组织中的表达及相关性分析

目的检测结直肠癌患者中CDK8与MMP-7蛋白及mRNA的表达,分析其相关性及其表达与患者临床病理特征的关系。方法使用免疫组织化学法及RT-PCR法检测肿瘤组织和癌旁组织及正常组织中CDK8、MMP-7蛋白及mRNA的表达情况,分析其差异性表达,同时分析肿瘤组织中CDK8与MMP-7表达的相关性及其与临床病理特征的关系。结果结直肠癌患者肿瘤组织中CDK8、MMP-7蛋白及mRNA表达水平均高于癌旁组织及正常组织(P<0.05),肿瘤组织中CDK8蛋白及mRNA表达水平与MMP-7表达呈正相关(P<0.05)。CDK8蛋白表达与肿瘤浸润程度、Duke分期、有无淋巴结及远处转移显著相关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤位置、分化程度无显著相关(P>0.05)。MMP-7表达量与肿瘤浸润程度、Duke分期、有无淋巴结转移相关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤位置、分化程度及远处转移无显著相关(P>0.05)。结论 CDK8是癌基因,可上调MMP-7蛋白表达,促进肿瘤浸润、侵袭转移,高表达提示患者预后不良。

miRNA-101通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化

目的探讨miRNA-101(miR-101)通过靶向CDK8对结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路激活的影响。方法采用q RT-PCR和Western blot测定结肠癌组织、癌旁正常组织及五种结肠癌细胞株中miR-101和CDK8的表达。双荧光素酶报告实验测定其相互作用关系。通过miR-101 mimic、pBabeCDK8转染调控CDK8表达并测定其对肿瘤细胞侵袭和Wnt/β-catenin激活的影响。结果与癌旁正常组织相比,miR-101在结肠癌组织中表达水平显著降低,而CDK8的表达显著增加。双荧光素酶报告实验证实miR-101可直接与CDK8 3'UTR的结合位点作用调节荧光素酶的活性。转染miR-101 mimic组细胞的侵袭能力比阴性对照组和CDK8组明显下降。转染miR-101 mimic后TOP/FOP荧光素酶活性显著降低,β-catenin的蛋白表达也出现下降。CDK8过表达载体转染能显著减弱miR-101 mimic对荧光素酶活性和β-catenin蛋白表达的作用。结论 miRNA-101可通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化。

宫颈锥切术对宫颈上皮内瘤变Ⅲ级患者CDK8和KAI1蛋白的影响

目的探讨研究宫颈锥切术对宫颈上皮内瘤变Ⅲ级患者周期素依赖性激酶8(CDK8)、KAI1蛋白的影响。方法回顾性分析2012年4月到2013年10月收治的宫颈上皮内瘤变Ⅲ级患者,其中行宫腔镜下宫颈锥切术45例(A组),行全子宫切除术32例(B组)。对两组患者手术时间、出血量以及手术前后CDK8(OD值)、KAI1蛋白(阳性率)变化,术后12个月患者恢复情况进行分析。结果 A组患者手术时间和术中出血量明显低于B组患者(P<0.05);术前两组患者CDK8蛋白表达和KAI1蛋白比较无显著差异,而手术后两组CDK8蛋白表达(OD值)显著下降,KAI1蛋白阳性率比手术前显著升高(P<0.05),而两组比较无显著差异(P>0.05);术后随访12个月后,A组治疗无效率(57.78%)明显高于B组(34.38%),差异具有显著性(P<0.05)。结论宫腔镜下宫颈锥切和筋膜外子宫全切效果相当,均可以抑制CDK8蛋白的表达,提高KAI1蛋白表达活性。但是二者各有优缺,具体治疗方式选择需要各方面综合考虑。

子宫颈鳞癌中MTA1、CDK8、HPV 16-E7的表达及其意义

目的探讨MTA1、CDK8和HPV 16-E7在子宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化SP两步法对10例慢性子宫颈炎、20例子宫颈上皮内病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和70例子宫颈鳞癌进行MTA1、CDK8及HPV 16-E7蛋白检测,分析其临床病理特征。结果在慢性子宫颈炎、CIN及子宫颈鳞癌中,MTA1的阳性率分别为10.0%、35.0%、64.3%;CDK8的阳性率分别为0、10.0%、74.3%,HPV 16-E7的阳性率分别为20.0%、45.0%、70.0%(P均<0.05)。MTA1和CDK8的表达与子宫颈鳞癌临床分期、组织分化、淋巴结转移及浸润深度密切相关(P<0.05)。HPV 16-E7表达与患者年龄、肿瘤直径、分化程度、临床分期及有无淋巴结转移均无相关性(P>0.05)。子宫颈鳞癌组织中,MTA1与CDK8及HPV 16-E7蛋白表达呈正相关(r=0.463、r=0.628,P均<0.05)。结论MTA1和CDK8的过表达促进子宫颈鳞癌的浸润转移,联合检测MTA1、CDK8蛋白表达可作为预测子宫颈鳞癌的浸润转移及评价患者预后的生物学指标。MTA1可能是HPV16-E7作用的潜在靶基因,在子宫颈鳞癌的发生、发展中起重要作用。

CDK8、KAI1蛋白在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中表达对患者预后的影响

目的探讨CDK8(cyclin-dependent kinase 8)、KAI1蛋白在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中表达对患者预后的影响分析,为临床诊断治疗提供参考。方法采用免疫组织化学染色法,检测CDK8、KAI1蛋白在20例正常宫颈组织、110例CIN(cervical intraepithelial neoplasia)组织、36例宫颈癌组织中的表达,比较不同组织中CDK8、KAI1表达的差异;检测36例宫颈癌组织中CDK8、KAI1蛋白的表达情况,分析CDK8、KAI1与宫颈癌临床特征的相关性,统计相关资料随访患者复发及预后情况。结果随着病情发展,CDK8在正常组织、CIN低度病变组织、CIN高度病变组织、宫颈癌组织中的表达呈显著递增的趋势(P<0.05),CDK8在宫颈癌组织的表达与淋巴结转移呈正相关,36例宫颈癌患者随访后,临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期死亡率分别为13.33%、20.08%、37.50%,淋巴结转移死亡率(46.67%)显著大于淋巴结无转移(19.05%),且差异有显著性(P<0.05),随着病情的加重,CDK8表达增强,死亡率增大,CDK8的表达与患者的生存率和预后有直接关系;KAI1蛋白在正常宫颈组织、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ组织、宫颈癌组织的阳性表达率分别为100%、68.00%、53.00%、40.00%、16.67%;KAI1在宫颈癌组织中的表达均与年龄、组织分型、临床分期、分化程度、淋巴结转移无关(P>0.05),表明KAI1尚未发现与宫颈癌预后相关。结论 CDK8表达与患者的生存率和预后有直接关系,可作为宫颈癌预后的一项指标,而KAI1蛋白的表达尚未发现与宫颈癌预后相关,需后续研究确认。

DAPK3和CDK8在宫颈癌组织中的表达及与预后的关系研究

目的探讨DAPK3和CDK8在宫颈癌组织的表达情况,为宫颈癌的诊断和预后指示提供辅助依据。方法选取行手术治疗的68例宫颈癌患者为研究对象,收集宫颈癌组织和癌旁正常组织,进行免疫组织化学法检测。分析DAPK3和CDK8在宫颈组织中的表达情况、与不同临床特征的关系、与宫颈癌患者预后的关系。结果宫颈癌组织中DAPK3低表达率为98.53%,显著高于癌旁正常组织的8.82%,CDK8在宫颈癌组织中的阳性表达率为92.65%,显著高于癌旁正常组织的10.29%(P>0.05);不同年龄段、不同FIGO分期、不同组织学类型和分化程度的DAPK3和CDK8的表达情况无统计学差异(P>0.05);单因素回归分析显示,DAPK3(P=0.031)低表达较之高表达,CDK8(P=0.040)高表达较之低表达,显著增加宫颈癌患者的死亡风险,ⅠB2~ⅡA期(P=0.000)和低分化程度(P=0.028)也是患者死亡的风险因素。多因素回归分析显示,DAPK3低表达(P=0.004)、CDK8高表达(P=0.017),与患者的不良预后密切相关,可作为独立预测指标。结论宫颈癌患者宫颈癌组织中DAPK3呈低表达状态,CDK8呈高表达状态,低水平的DAPK3和高水平的CDK8提示患者预后不良。

CDK8在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达及意义

目的初步探讨CDK8在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)中的表达及意义。方法免疫组化法检测宫颈癌、CIN组织及正常宫颈组织中CDK8的表达水平,分析CDK8表达与宫颈癌病理特征,以及宫颈上皮内瘤变临床转归的关系。结果 CDK8表达水平:宫颈癌组>高度宫颈病变组>低度宫颈病变组>正常组,组间差异均有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组淋巴结转移者CDK8的表达高于无转移者,CIN中高度宫颈病变者持续组CDK8表达高于痊愈组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CDK8高表达可能与宫颈癌进展相关,CDK8检测有助于预测宫颈病变转归。

CDK8、CXCL13及REGγ在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的研究周期蛋白依赖性蛋白激酶8(CDK8)、趋化因子13(CXCL13)及蛋白酶体激活因子11S调节蛋白复合物γ亚单位(REGγ)表达与子宫内膜癌(EC)病理特征关系及其对预后生存的预测价值。方法收集90例EC患者的临床资料作为研究组,另选取同期本院健康体检者78例作为对照组,分析CDK8、CXCL13及REGγ表达与EC临床病理特征、预后生存的关系。结果研究组CDK8、CXCL13及REGγ阳性表达率均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。DK8、CXCL13、REGγ的阳性表达者分别和DK8、CXCL13、REGγ的阴性表达者分化程度、淋巴结转移、病理类型、肌层浸润深度及临床分期比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。术后对患者进行1年随访,死亡17例(18.89%)。多元Logistic回归分析结果显示,CDK8、CXCL13及REGγ阳性表达是影响EC患者预后死亡的独立危险因素(P<0.05)。ROC结果显示,CDK8、CXCL13及REGγ单项检测曲线下面积(AUC)分别为0.614、0.754、0.654,联合检测AUC为0.769,较单独检测高。结论 CDK8、CXCL13及REGγ在EC中阳性表达率高,推测CDK8、CXCL13及REGγ参与了EC组织增生、分化及发展过程,临床上可通过检测三者表达情况对患者病情进展及预后进行评估。

CDK8在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达及意义

目的探索细胞周期依赖性蛋白激酶8（CDK8）的表达水平与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变（CIN）发生的关系。方法选取重庆市中医院就诊并进行宫颈组织活检的患者221例，其中宫颈癌48例，CINl37例，正常或炎症36例，免疫组化法检测CDK8的表达；同时检测P53、Ki67蛋白表达，探索CDK8表达与癌及CIN发生的相关性。结果各组患者宫颈组织中的CDK8表达存在显著差异（P〈0．05），其中癌症组表达水平最高；CIN患者CDK8表达水平CIN3〉CIN2〉CINl，差异有显著性（P〈0．05）；随访中，治愈组和病变持续组CINl患者CDK8表达无显著差异（P〉0．05）；而在CIN2和CIN3病变持续的患者中，CDK8表达显著高于治愈组（P〈0．05）；在癌症组织中，CDK8的表达与P53及Ki67的表达均呈现正相关（r=0．64，r=0．57，P〈0．05）。结论CDK8表达与宫颈癌的发生及CIN病变、转归相关，其中在宫颈癌组织中Ki-67及P53蛋白的表达，或许与CDK8的表达存在着协同作用。