miR-1180-5p通过激活CDKN1A基因表达抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究微小RNA-1180-5p(miR-1180-5p)对前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP恶性生物行为的影响及可能的作用机制。方法:合成ds Control(ds Control组)和miR-1180-5p(miR-1180-5p组),分别转染至两个前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP。采用qPCR和Western blotting分析转染后各组细胞CDKN1A、Cyclin D1和CDK6 mRNA及蛋白的表达变化,采用流式细胞术、MTT法、平板克隆实验和Transwell实验分别检测细胞周期分布、增殖活力、克隆形成能力、细胞迁移和侵袭能力。结果:qPCR结果显示,相比ds Control,转染miR-1180-5p后VCAP和LNCaP细胞中CDKN1A mRNA表达明显上调(P<0.01);Cyclin D1和CDK6 mRNA表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。Western blotting与qPCR结果相符。转染miR-1180-5p后VCAP和LNCaP位于G0/G1期的细胞比例增加(P<0.01),而位于S期和G2/M期的细胞比例减少(P<0.05),细胞周期被阻滞在G0/G1期。转染miR-1180-5p后,两种前列腺癌细胞增殖活力较ds Control组明显降低(P<0.05),miR-1180-5p组两种细胞的克隆数量明显较少(P<0.01),同时miR-1180-5p组两组细胞迁移和侵袭能力均下降(P<0.01)。结论:miR-1180-5p能显著激活前列腺癌细胞中CDKN1A基因的表达,从而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物行为。

^(137)Csγ射线慢性照射对CDKN1A基因表达的影响

采用荧光定量实时RT-PCR方法,137Csγ射线全身慢性照射SD大鼠,研究其血液中白细胞CDKN1A基因mRNA表达水平的变化;测定了转入慢性期的事故受照人员外周血白细胞CDKN1A基因表达水平。结果表明:与对照组相比,0.1、0.2和3.0 Gy照射组大鼠CDKN1A基因mRNA表达水平降低,与事故急性受照人员转为慢性期后的结果一致;照射组大鼠白细胞数有降低的趋势,淋巴细胞百分比降低,中性粒和单核细胞百分比增加。结果提示,白细胞计数降低及分类发生变化可能是CDKN1A表达水平降低的原因之一,慢性照射和急性照射的基因表达模式可能不同。

放射性工作人员外周血CDKN1A基因表达水平调查

采用荧光实时定量RT-PCR技术,对某厂放射性工作人员外周血CDKN1A基因mRNA水平进行调查。结果表明,与对照组相比,放射性工作人员CDKN1A基因mRNA水平差异不显著;外周血白细胞数及分类差异不显著;CDKN1A基因表达水平Ct值约是-βactin的1.6倍。

CDKN1A基因过表达载体的构建

本文通过目的基因CDKN1A基因合成,过表达载体构建,目的基因与载体连接、转化感受态细胞与筛选等过程,最终成功构建CDKN1A基因过表达载体,这为进一步研究CDKN1A基因在蛋鸡卵泡发育调控方面奠定基础。

^(60)Co γ射线照射正常人淋巴母细胞诱导CDKN1A基因mRNA表达水平的变化

目的探讨不同剂量60Coγ射线在不同培养时间后对人淋巴母细胞AHH-1细胞CDKN1A基因mRNA表达的影响。方法用不同剂量(0、0.2、1、3、5、10Gy)的60Coγ射线照射正常人淋巴母细胞AHH-1细胞,在不同维持存活培养时间(0、4、24、48、72、96 h)内收集细胞,抽提总RNA,用实时PCR方法检测细胞中CDKN1A基因mRNA表达水平,观察其随辐照剂量和培养时间的变化。结果 AHH-1细胞中CDKN1A基因mRNA的表达水平随辐照剂量的加大而增加,在0～5 Gy之间具有一定剂量依赖性关系(P<0.05);辐照后培养24 h时基因表达达到峰值,24 h之后呈现下降趋势。结论不同剂量γ射线照射人AHH-1细胞会导致CDKN1A基因表达水平在培养24 h内随辐射剂量增加而升高,这种剂量依赖性关系可能适用于电离辐射剂量的估算。

X线照射后对乳腺癌细胞凋亡的影响及CDKN1A表达的变化

目的探讨乳腺癌细胞系(MCF-7)X线照射后CDKN1A基因(p21)表达变化及其对细胞凋亡的影响。方法用流式细胞方法检测MCF-7细胞在接受不同剂量X射线照射后CDKN1A基因表达的改变和用RNAi技术抑制CDKN1A基因表达并检测细胞凋亡的变化。结果 MCF-7细胞在接受不同剂量(1、2和4 Gy)X射线照射后CDKN1A蛋白表达有不同程度升高,其中4 Gy照射后升高水平最明显(P<0.05)。在接受4 Gy剂量照射后,CDKN1A蛋白水平在8、12、24、48、72 h均有不同程度增加,其中24 h时较对照组升高3倍(P<0.05)。抑制CDKN1A基因表达后MCF-7细胞凋亡率增加183.9%(P<0.05)。结论乳腺癌细胞在接受4 Gy照射后24 h的CDKN1A表达水平增加最为明显,抑制CDKN1A基因表达可促进细胞凋亡。