CDKN2/p16基因在四种原发恶性肿瘤中存在状态的研究

目的 :研究CDKN2 /p16基因缺失和蛋白丢失在非小细胞肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌 4种原发恶性肿瘤中的作用。方法 :采用免疫组织化学法和多重PCR技术对 68例 (非小细胞肺癌 3 1例 ,食管癌 15例 ,胃癌 13例 ,乳腺癌 9例 )原发肿瘤组织标本进行CDKN2 /p16基因第一、第二外显子纯合缺失和p16蛋白表达丢失分析研究。结果 :第一或 (和 )第二外显子总缺失率为 13 .2 % ( 9/68) ,蛋白丢失率为 44% ( 3 0 /68) ,不同肿瘤组织标本的p16基因缺失率和蛋白丢失率差别很大。结论 :CDKN2 /p16基因是重要的多肿瘤抑制基因 ,在不同肿瘤组织中其失活方式不完全相同。

CDKN2/p16基因HapⅡ位点甲基化与肺癌关系的研究

目的:通过检测CDKN2/p16抑癌基因上游调控序列及外显子E1 HapⅡ位点甲基化状态,探讨基因甲基化在肺癌发生中的作用,为肺癌的早期诊断及基因治疗提供可能的理论依据。方法:取58例肺癌患者手术切除的肺癌病理组织标本,16例肺组织良性病变并手术患者的病理标本作为对照。免疫组织化学技术检测p16蛋白表达,甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)技术分析该基因HapⅡ位点甲基化状态。结果:58例肺癌患者中,14例HapⅡ位点发现甲基化,甲基化率为24.14%,而对照组没有发现甲基化。其中,p16蛋白阳性者中2例发现甲基化,甲基化率为7.4%,而p16蛋白阴性者中12例发现甲基化,甲基化率为38.7%,差异有显著性(X^2=7.72,P=0.006)。结论:CDKN2/p16基因外显子E1及调控序列HapⅡ位点异常甲基化,可抑制p16蛋白表达,这可能是p16基因功能丧失的一个重要机制,并可能对肺癌发生起促进作用。

IDH突变型低级别星形细胞瘤p16蛋白表达与CDKN2A基因缺失状况的相关性

目的:以异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)突变型星形细胞瘤为研究对象,探讨利用p16蛋白免疫标记替代CDKN2A基因纯合性缺失检测的可行性。方法:收集我院既往组织学诊断为低级别星形细胞瘤(WHO 2级)且伴有IDH突变的胶质瘤42例,通过免疫组化方法检测肿瘤组织中p16蛋白表达,分别依据其胞核或胞浆阳性表达率将肿瘤分为阴性(阳性率0%)、低表达(0%<阳性率≤10%)、中表达(10%<阳性率≤25%)、高表达(25%<阳性率≤50%)及过表达(阳性率>50%)5个组别;利用FISH方法检测肿瘤CDKN2A基因纯合性缺失与杂合性缺失状况;采用Fisher精确检验评价p16蛋白表达水平与CDKN2A基因缺失间的相关性。结果:胞核p16蛋白表达水平与CDKN2A基因纯合性缺失间存在显著相关(P<0.001)。阴性组(4/4,100%)均检测到CDKN2A纯合性缺失,中、高及过表达组(22/22,100%)均未检测到CDKN2A纯合性缺失。低表达组与CDKN2A纯合性缺失间缺乏明确对应关系,其中3例(3/16,18.75%)检出纯合性缺失,13例(13/16,81.25%)未检出纯合性缺失。胞核p16蛋白表达水平与CDKN2A杂合性缺失无相关(P=0.228)。胞质p16蛋白表达水平与CDKN2A纯合性(P=0.086)或杂合性(P=0.884)缺失均无相关。结论:IDH突变且组织学呈低级别的星形细胞瘤中,胞核p16蛋白阴性(阳性率0%)或中等及以上表达(阳性率>10%)分别提示存在或不存在CDKN2A纯合性缺失。在上述区间p16蛋白与CDKN2A纯合性缺失间存在良好匹配关系,可用于协助病理诊断与分级。胞核p16蛋白低表达(0%<表达率≤10%)则不能预测CDKN2A纯合性缺失状态,此时仍需进行CDKN2A基因层面检测。

CDKN2/p16基因5′-CpG岛SmaI位点甲基化与肺癌的关系

目的 研究CDKN2 /p16基因 5′端调控序列CpG岛甲基化的状态与肺癌发生发展的关系。方法 采用对甲基化敏感的核酸内切酶SmaⅠ ,酶切基因组DNA的方法 ,对 89例肺癌标本和 10例正常肺组织的CDKN2 /p16基因进行Southern杂交分析。结果 89例肺癌中 ,CDKN2 /p16基因甲基化者 15例 ,甲基化频率为 16 .9%。 42例p16蛋白阴性的肺癌患者中 ,有 12例发生甲基化 ,甲基化频率为 2 8.6 % ;另有 47例p16蛋白阳性患者中仅有 3例发生甲基化。 10例正常肺组织中均未发现CDKN2 /p16基因有甲基化现象。结论 CDKN2 /p16基因 5′端CpG岛甲基化是该基因失活的重要机制 ,是肺癌细胞区别于正常细胞的分子事件之一 。

肺癌CDKN2/p16基因纯合缺失的研究

目的 研究 Ｃ Ｄ Ｋ Ｎ２／ｐ１６ 基因的缺失与肺癌发生、发展的关系。方法 采用多重聚合酶链反应技术，对８９ 例肺癌进行了 Ｃ Ｄ Ｋ Ｎ２／ｐ１６ 基因第１ 、２ 外显子纯合缺失的分析研究。结果 标本取材方法的改良提高了聚合酶链反应技术对基因缺失的检出率，８９ 例肺癌中检出第１ 外显子缺失率１９ ．１ ％ （１７／８９） ，第２ 外显子缺失率２２ ．５ ％ （２０／８９） ，有１４ 例第１ 、２ 外显子共同缺失，第１ 或（ 和） 第２ 外显子总缺失率为２５８ ％ （２３／８９） 。 Ｃ Ｄ Ｋ Ｎ２／ｐ１６ 基因的缺失集中发生于非小细胞肺癌， 并与转移和分期有关。结论 Ｃ Ｄ Ｋ Ｎ２／ｐ１６ 基因的缺失是非小细胞肺癌的遗传易感因素，并在其恶性进展中起一定作用。

肺癌组织CDKN2/p16基因点突变的分析

目的 研究我国肺癌组织中 CDKN2 / p16基因点突变的发生情况。方法 采用聚合酶链反应 -单链构象多态性和序列分析的方法 ,对 89例肺癌组织中 CDKN2 / p16基因第 2外显子的点突变进行了研究。结果 在未发生第 2外显子缺失的 6 9例肺癌组织中 ,发现 CDKN2 / p16基因第 2外显子变异或可疑变异者 16例 ;对该 16例进行序列分析 ,共发现有 9例存在不同类型的基因点突变。结论 点突变是 CD-KN2 / p16基因失活的一种形式 ,但不是主要形式。由点突变引起的 CDKN2 / p16基因失活在肺癌的发生发展中起一定的作用。

CDKN2/p16基因存在状态与肺癌

目的 研究CDKN2 /p16基因缺失和蛋白丢失在肺癌发展中的作用。方法 采用免疫组化和改良标本处理的PCR技术 ,对 89例肺癌病人手术标本CDKN2 /p16基因第 1、2外显子纯合缺失和P16蛋白表达丢失情况进行分析对比研究。结果 CDKN2 /p16基因第 1或 (和 )第 2外显子总缺失率为2 5 8% (2 3/ 89) ,P16蛋白丢失率为 47 2 % (4 2 / 89) ,基因的缺失和蛋白的丢失集中发生于非小细胞肺癌(NSCLC) ,并与转移和分期有关。结论 CDKN2 /p16基因的异常可能是NSCLC区别于小细胞肺癌(SCLC)的特有的分子事件 。

结直肠癌患者血清中CDKN2/p16基因异常的检测

目的寻找一种切实可行的检测肿瘤的生物标志物及其方法。方法对100例结直肠癌患者取血清,取献血员19例,非肿瘤患者13例为对照;并另取癌组织26份,癌旁组织22份及非恶性组织29份作对比观察,进行p16基因甲基化分析;并进行基因缺失分析及点突变的分析。结果患者血清p16基因异常甲基化为69.00%;缺失率为9.00%;点突变率为45.00%。癌组织检测结果与血清相似。SSCP阳性者经序列分析证实有3例为错义突变,1例为移位,1例为同义突变。其中4例造成p16蛋白的缺失。作为肿瘤的生物标志物,3项联合应用其灵敏度为88.00%,特异性为96.87%,准确率为90.15%。比文献用CEA,CA19-9,CA72-4,CA242四项指标联合之灵敏度、特异性、准确率皆高。结论血清DNA含量不高但能反映人体对肿瘤的负荷,CDKN2/p16基因异常的检则,能检出10-3的DNA片段,可用于临床诊断及大面积普查,并可用于对出院患者的长期随访。提示p16基因异常甲基化在结直肠癌癌变机制中起决定性作用。

人类口腔粘膜癌前损害发生发展过程中CDKN_2基因作用的研究 Ⅱ．P16蛋白表达与抑癌基因Rb蛋白表达的相互关系

视网膜母细胞用易感基因（Ｒｂ）是第一个被确认的抑癌基因，但Ｒｂ基因及其产物ＰＲｂ在口腔粘膜癌前损害癌变过程中的改变和表达未见阐述。本研究应用ＬＳＡＢ免疫组织化学染色技术观察到口腔粘膜癌前损害发生、发展过程中的各阶段组织中均存在ＰＲｂ在胞核和胞浆中的阳性反应，且胞核表达强于胞浆，并具有异质性；至口腔粘膜鳞状细胞癌阶段，ＰＲｂ的表达与鳞癌的分化程度有关；这些结果在一定程度上支持作者在Ｐ１６蛋白研究中的有关推论，Ｒｂ、ＰＲｂ在口腔粘膜癌前损害癌变过程中的改变及其作用值得进一步探讨。

地西他滨联合GSK126通过调控p16基因对人结肠癌SW620细胞的抑制作用研究

目的:研究DNA去甲基化药物地西他滨与Zeste基因增强子同源物2(Enhancer of Zeste Homolog 2,EZH2)抑制剂GSK126联合应用对调节结肠癌EZH2-p16信号的抗肿瘤作用。方法:将结肠癌细胞株SW620分为4组,对照组、地西他滨单药组、GSK126单药组、地西他滨与GSK126联合用药组。用细胞增殖率测定SW620细胞的增殖能力,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测p16基因的表达。结果:地西他滨药物联合应用对SW620细胞有显著的抑制作用(P<0.05),p16基因表达上调。结论:地西他滨联合GSK126对结肠癌SW620细胞有强大抑制作用,其机制可能与调控p16基因有关。

腺病毒介导的P16/CDKN_2基因对TJ899细胞系活性的影响

目的 研究 5型腺病毒载体 (Ad5)携带P1 6基因对恶性脑胶质瘤细胞系TJ899生长状态的影响。②方法 免疫组化(SP法 )测定P1 6蛋白表达 ,MTT(methlythiazolyltetrazolium ,MTT)法测定恶性脑胶质瘤细胞系生长状态 ,克隆形成实验。③结果 重组体腺病毒能介导P1 6外源基因在恶性脑胶质瘤细胞系TJ899细胞中阳性表达 ,6d时肿瘤细胞生长抑制率为 93 % ,并且能显著地抑制肿瘤细胞的克隆形成能力。④结论 腺病毒介导P1 6基因能在肿瘤细胞中表达 。

CDKN2(P16)基因的研究现状

早在1992年Skolnick等在人类第九号染色体寻找黑素瘤易感基因时,发现9P21位点频发缺失与突变,后来Kamb及Beach分别领导的两个科研小组通过对多种癌细胞的普查,发现了一个新的能抑制多种肿瘤的基因——P16基因,P16基因,又称MTS1(Multiple Tumor Suppressor 1),或称INK4a(Inhibitor of Cyclin—dependent Kinase 4a)。

非小细胞肺癌pl6/CDKN2基因失活的研究

目的：分析中国人非小细胞肺癌中ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因失活的情况，探讨该基因在肺癌发生中的作用。方法：选取与ｐ１６基因紧密连锁的Ｄ９Ｓ１７４８位点，对１７例临床切除的原发性肺癌标本进行微卫星不稳定性分析，用甲基化特异性ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＣＲ， ＭＳＰ）检测 ｐｌ６基因启动子区 ＣｐＧ岛甲基化状况，用免疫组织化学法检测Ｐ１６蛋白表达情况。结果：微卫星不稳定性分析结果表明，在１３例Ｄ９Ｓ１７４８位点存在多态性的肿瘤ＤＮＡ中有 ９例（６９ ．２％）发生了杂合性缺失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ， ＬＯＨ）。 ＭＳＰ的结果显示，有 ７０． ６％（１２／１７）的肿瘤组织存在ｐ１６启动子区的异常高甲基化。在本研究中，８２．４％（１４／１７）的肿瘤组织可以检测出一种或两种ｐ１６基因的异常改变。对此１７例肿瘤标本进行的免疫组织化学分析显示，有 １３例 Ｐ１６蛋白表达阴性，其中 ９２ ３％（１２／１３）存在一种或两种ｐ１６基因的异常改变。免疫组化结果与ｐ１６基因分子遗传学改变情况基本吻合。结论：作为一种抑癌基因，ｐ１６在多种肿瘤组织中都有异常改变。我们的研究表明，ｐ１６基因失表达是非小细胞肺癌?

接触低浓度苯系物工人血细胞计数和血浆中P16/CDKN2A蛋白含量的变化及其意义

目的:探讨在低于职业接触限值情况下,长期接触苯系物对工人血细胞计数和血浆中P16/CDKN2A蛋白含量的影响情况,为更好地进行苯系物污染的监测和监督工作提供理论基础。方法:选择深圳市某印刷企业从事印刷作业工龄超过2年的50名工人作为接触组,选择该企业不接触苯系物的50名行政和后勤工作人员作为对照组。对2组人员进行血常规检测;ELISA法检测接触组和对照组人员血浆中P16/CDKN2A蛋白含量;同时测定接触组工作环境中苯系物的浓度。结果:接触组和对照组工作环境中苯系物浓度均低于职业接触限值;接触组和对照组工人白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白含量和血小板计数均在正常范围内,2组比较差异无统计学意义(P>0.05);接触组工人血浆P16/CDKN2A蛋白含量均值低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在低于职业接触限制情况下,长期接触低浓度苯系物对工人血细胞计数和血浆中P16/CDKN2A蛋白含量无明显影响。

AS_2O_3逆转人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因甲基化状态及激活转录的实验研究

本研究旨在探讨三氧化二砷(As2O3)逆转恶性淋巴瘤CA46细胞株p16基因甲基化状态和调节转录作用及其可能的机制。以高甲基化的恶性淋巴瘤细胞株CA46作为研究基因甲基化与表达关系的实验对象。采用SRB法检测As2O3对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力的影响;nMSP法检测药物作用后p16甲基化状态变化;RT-PCR法检测p16、甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达;利用流式细胞术DNA倍体分析法探讨As2O3对恶性淋巴瘤细胞周期的影响。结果表明:①As2O3作用CA46细胞株72小时后p16基因甲基化程度明显减弱,p16基因异常甲基化的现象被逆转;②未处理组细胞p16基因呈微弱表达,As2O3作用72小时后p16基因表达增强,0.5μmol/L组、1.0μmol/L组和2.0μmol/L组p16基因表达阳性条带与β-actin灰度的比值分别为(0.33±0.10)、(0.57±0.11)、(0.67±0.09),阳性对照灰度比值为(0.73±0.13),差异有统计学意义(p<0.01);③与未处理组相比,As2O3作用72小时后甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B的表达下降并呈浓度依赖性,而DNMT1表达不受影响;④与对照组相比,3组不同浓度As2O3均能明显抑制肿瘤细胞生长,G0/G1期细胞增加。结论:As2O3可能通过抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B或(和)直接逆转p16基因甲基化状态,使p16基因表达上调,并恢复其活性,从而实现其细胞周期调控功能,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制肿瘤细胞的增长。

人恶性淋巴瘤细胞系p53,p16与bcl-2/JH基因的研究

抑癌基因p53,p16的缺失和突变以及癌基因bcl-2/JH融合基因的出现是恶性淋巴瘤发生的分子生物学原因,p53和p16基因亦是诱导淋巴瘤细胞凋亡的重要基因,而bcl-2基因是抑制淋巴瘤细胞凋亡的重要基因。为研究这3种基因结构的变化,用PCR和PCR-SSCP,以及PCR扩增产物序列测定的方法测定了人9种恶性淋巴瘤细胞系,发现SU-DHL-1,SU-DHL-4,SU-DHL-6,SU-DHL-8,SU-DHL-10,Daudi,8392 7种恶性淋巴瘤细胞系有p53基因的点突变,分别在第五、六、七外显子;SU-DHL-9有p16基因的纯合缺失,而SU-DHL-1和Daudi细胞系有p16基因的第二外显子的突变,SU-DHL-1的测序结果为密码子30的GAC突变为AAC,密码子35的GCT突变为ACT,密码子40与41之间插入了一个C;SU-DHL-4和SU-DHL-6有bcl-2/JH基因的重排,讨论了基因结构的变化在恶性淋巴瘤细胞系发生发展中的意义。

胃间质瘤bcl-2、p16、p53及c-myc基因蛋白表达及其临床意义

目的 :探讨胃间质瘤 (gastricstromaltumor,GST)bcl 2、p1 6、p53、c myc基因蛋白及其生物学行为之间的关系。方法 :结合临床病理特征采用免疫组化S P法对 71例GST组织bcl 2、p1 6、p53及c myc基因蛋白进行观测。结果 :bcl 2、p1 6、p53、c myc基因蛋白表达与GST良恶性和患者预后有关 (P <0 0 5) ;而与性别、年龄、肿瘤的出血、坏死无关 (P >0 0 5)。随着肿瘤恶性程度的增加 ,bcl 2基因蛋白阳性表达率及其强度增大增强 ,bcl 2基因蛋白表达与p53、c myc基因呈正相关 ,而与p1 6基因呈负相关 (P <0 0 1 )。结论 :bcl 2、p1 6、p53、c myc基因蛋白参与GST的发生发展 。

5-Aza-CdR对人结肠癌Caco-2细胞系P16基因甲基化状态及其生物学表型的影响

目的观察人结肠癌Caco-2细胞系P16基因启动子区甲基化状态,并探讨去甲基化制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导高甲基化失活的P16基因重新表达的可能性及其对细胞生长的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理Caco-2细胞系,MSP法检测用药前后P16基因的甲基化状态,RT-PCR方法检测P16基因mRNA表达。MTT法观察细胞生长速度,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率。结果 P16基因在人结肠癌细胞系Caco-2中启动子区呈甲基化状态,经过5-Aza-CdR处理后,P16基因启动子区呈去甲基化状态,其mRNA重新表达。CpG岛去甲基化后能明显地抑制细胞的生长,诱导细胞凋亡,影响细胞周期分布,并具有良好的量效依赖关系。结论 5-Aza-CdR能够逆转P16基因甲基化状态,调控P16基因表达并有效地抑制肠癌细胞增殖。

二亚硝基哌嗪对转基因小鼠TNF受体相关因子2和p16的表达

目的研究二亚硝基哌嗪(N,N′-dinitrosopi- perazine,DNP)对TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖与TNF受体相关因子2(TNF receptor-associated Factor 2,TRAF2)、p16基因表达的影响及两者关系。方法HE染色法观察转基因小鼠组(TC)、转基因小鼠DNP诱导组(T1)和野生小鼠组(CC)、野生小鼠DNP诱导组(CI)鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖特征;免疫组织化学染色法检测小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮组织中TRAF2、p16基因的表达水平。结果TI、TC、CI和CC组小鼠鼻腔或鼻咽黏膜上皮癌前病变率分别为90%、10%、0和0。与TC、CI和CC组相比,TI组TRAF2基因表达水平显著增高(P<0.01),而p16基因表达水平显著降低(P<0.01);TRAF2和p16基因表达水平在TC和CC组之间的差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖活性增加,DNP可提高其增殖活性,而细胞增殖活性增加与TRAF2基因表达水平上调和p16基因表达水平下调密切相关。