人类口腔粘膜癌前损害发生发展过程中CDKN_2基因作用的研究 Ⅱ．P16蛋白表达与抑癌基因Rb蛋白表达的相互关系

视网膜母细胞用易感基因（Ｒｂ）是第一个被确认的抑癌基因，但Ｒｂ基因及其产物ＰＲｂ在口腔粘膜癌前损害癌变过程中的改变和表达未见阐述。本研究应用ＬＳＡＢ免疫组织化学染色技术观察到口腔粘膜癌前损害发生、发展过程中的各阶段组织中均存在ＰＲｂ在胞核和胞浆中的阳性反应，且胞核表达强于胞浆，并具有异质性；至口腔粘膜鳞状细胞癌阶段，ＰＲｂ的表达与鳞癌的分化程度有关；这些结果在一定程度上支持作者在Ｐ１６蛋白研究中的有关推论，Ｒｂ、ＰＲｂ在口腔粘膜癌前损害癌变过程中的改变及其作用值得进一步探讨。

CDKN2/p16基因HapⅡ位点甲基化与肺癌关系的研究

目的:通过检测CDKN2/p16抑癌基因上游调控序列及外显子E1 HapⅡ位点甲基化状态,探讨基因甲基化在肺癌发生中的作用,为肺癌的早期诊断及基因治疗提供可能的理论依据。方法:取58例肺癌患者手术切除的肺癌病理组织标本,16例肺组织良性病变并手术患者的病理标本作为对照。免疫组织化学技术检测p16蛋白表达,甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)技术分析该基因HapⅡ位点甲基化状态。结果:58例肺癌患者中,14例HapⅡ位点发现甲基化,甲基化率为24.14%,而对照组没有发现甲基化。其中,p16蛋白阳性者中2例发现甲基化,甲基化率为7.4%,而p16蛋白阴性者中12例发现甲基化,甲基化率为38.7%,差异有显著性(X^2=7.72,P=0.006)。结论:CDKN2/p16基因外显子E1及调控序列HapⅡ位点异常甲基化,可抑制p16蛋白表达,这可能是p16基因功能丧失的一个重要机制,并可能对肺癌发生起促进作用。

IDH突变型低级别星形细胞瘤p16蛋白表达与CDKN2A基因缺失状况的相关性

目的:以异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)突变型星形细胞瘤为研究对象,探讨利用p16蛋白免疫标记替代CDKN2A基因纯合性缺失检测的可行性。方法:收集我院既往组织学诊断为低级别星形细胞瘤(WHO 2级)且伴有IDH突变的胶质瘤42例,通过免疫组化方法检测肿瘤组织中p16蛋白表达,分别依据其胞核或胞浆阳性表达率将肿瘤分为阴性(阳性率0%)、低表达(0%<阳性率≤10%)、中表达(10%<阳性率≤25%)、高表达(25%<阳性率≤50%)及过表达(阳性率>50%)5个组别;利用FISH方法检测肿瘤CDKN2A基因纯合性缺失与杂合性缺失状况;采用Fisher精确检验评价p16蛋白表达水平与CDKN2A基因缺失间的相关性。结果:胞核p16蛋白表达水平与CDKN2A基因纯合性缺失间存在显著相关(P<0.001)。阴性组(4/4,100%)均检测到CDKN2A纯合性缺失,中、高及过表达组(22/22,100%)均未检测到CDKN2A纯合性缺失。低表达组与CDKN2A纯合性缺失间缺乏明确对应关系,其中3例(3/16,18.75%)检出纯合性缺失,13例(13/16,81.25%)未检出纯合性缺失。胞核p16蛋白表达水平与CDKN2A杂合性缺失无相关(P=0.228)。胞质p16蛋白表达水平与CDKN2A纯合性(P=0.086)或杂合性(P=0.884)缺失均无相关。结论:IDH突变且组织学呈低级别的星形细胞瘤中,胞核p16蛋白阴性(阳性率0%)或中等及以上表达(阳性率>10%)分别提示存在或不存在CDKN2A纯合性缺失。在上述区间p16蛋白与CDKN2A纯合性缺失间存在良好匹配关系,可用于协助病理诊断与分级。胞核p16蛋白低表达(0%<表达率≤10%)则不能预测CDKN2A纯合性缺失状态,此时仍需进行CDKN2A基因层面检测。

虎杖苷调节Akt/MDM2/p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响

目的探讨虎杖苷(PD)调节蛋白激酶B/原癌基因MDM2/抑癌基因p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响。方法以人胆囊癌细胞株(GBC-SD)为研究对象,体外培养人胆囊癌细胞株(GBC-SD),使用浓度为10~160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,确定最佳实验浓度。将GBC-SD细胞分为对照组(Control组)、虎杖苷低、中、高浓度组(PD-L组、PD-M组、PD-H组)、虎杖苷+Akt激活剂组(PD+SC79组),Transwell小室法评价细胞的迁移能力,Hoechst染色观察细胞的凋亡,流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡,Western blot检测Akt、MDM2、p53磷酸化水平,建立荷瘤小鼠模型评价虎杖苷对胆囊癌肿瘤生长的影响。结果浓度为10~160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24 h,可显著抑制GBC-SD细胞的增殖活性,选择10、20、40 mmol/L的虎杖苷进行后续实验;与Control组比较,PD-L组、PD-M组、PD-H组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、P-Akt、P-MDM2蛋白表达显著降低,G0/G1期细胞比例、P-p53蛋白表达显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与PD-H组比较,PD+SC79组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、P-Akt、P-MDM2蛋白表达显著升高,G0/G1期细胞比例、P-p53蛋白表达显著降低(P<0.05);虎杖苷干预治疗后,小鼠移植瘤的生长速度显著降低(P<0.05)。结论虎杖苷可以通过调节Akt/MDM2/p53信号通路使细胞周期阻滞,抑制胆囊癌细胞增殖、迁移。

野生型p16和p53抑癌基因共转染对K562细胞增殖的抑制作用

抑癌基因p1 6和 p53在抑制肿瘤的发生中起重要作用 ,在髓细胞白血病细胞系K562中检测出这两种基因有纯合缺失。为探讨野生型 p1 6和 p53基因的转染与表达对K562细胞的生长影响 ,采用了脂质体介导外源野生型 p1 6和 p53共转染K562细胞 ,用免疫细胞化学染色检测p1 6和 p53基因的表达 ,检测细胞生长曲线 ,采用流式细胞术进行细胞周期分析。结果显示 ,共转染后 p53和p1 6在K562细胞中表达阳性率分别为 2 3 %和 2 8% ;细胞生长受到一定程度的抑制 ,G1 期细胞的比例增加 ,S期细胞减少 ,与单独转染 p53或p1 6基因的抑制作用有明显差别 (P <0 .0 5)。结论 :外源野生型 p1 6和p53基因的共转染比转染单基因对K562细胞生长有更明显的抑制作用 。

抑癌基因p53、nm23、p16在儿童胚芽细胞肿瘤中的表达及意义

目的 初步探讨抑癌基因 p5 3、nm2 3、p1 6在儿童胚芽细胞肿瘤中的表达及意义。 方法 对 30例儿童胚芽细胞肿瘤石蜡标本进行免疫组织化学染色 ,观察肿瘤组织中抑癌基因 p5 3、nm2 3、p1 6的表达情况。 结果 在 30例肿瘤标本中有较高的 p5 3阳性表达率和p1 6阴性表达率 ,均达 6 3.3% (1 9/30 ) ,有约 5 0 %的病例呈nm2 3阳性表达 (1 6 /30 ) ,但三种抑癌基因的表达与发病年龄、临床分期、预后及肿瘤部位无明显相关性 (P >0 .0 5 )。结论 儿童胚芽细胞肿瘤的发生发展可能与抑癌基因p5 3的突变和 p1

癌基因c-erbB2、c-myc和抑癌基因p16、p53在口腔鳞癌中的蛋白表达及其协同作用

目的 :探讨癌基因c erbB2、c myc和抑癌基因 p1 6、p5 3在口腔鳞癌 (OSCC)中的蛋白表达及其协同作用。 方法 :用免疫组化结合图像分析对口腔鳞癌中 4种基因的蛋白表达进行定性、定位、定量研究。结果 :口腔鳞癌中c erbB2、c myc、p1 6和 p5 3的蛋白表达阳性率依次为 46.67%、60 %、86.67%和 63 .3 3 %。肿瘤部位不同 ,erbB2蛋白表达有显著性差异 ;腭癌和口底癌中的erbB2蛋白表达都明显高于唇癌和牙龈癌中的erbB2表达。c myc蛋白表达与 p1 6蛋白表达之间具有显著性相关。 结论 :以上 4种基因的蛋白表达增高在口腔鳞癌发生发展中具有重要作用 ,c erbB2蛋白过表达在腭癌和牙龈癌中具有更重要的意义 ;c myc和 p1 6蛋白表达间具有一定的内在联系。

癌基因bcl-2和抑癌基因p16在子宫内膜癌的表达及意义

目的 :研究癌基因 bcl- 2和抑癌基因 p16在子宫内膜癌的表达及发生、发展中的作用。方法 :采用免疫组化 ABC法检测 5 8例子宫内膜癌中 bcl- 2、p16基因表达。结果 :子宫内膜癌中 bcl- 2的阳性表达率为 5 6 .9% ;p16阳性表达率为 43.1%。子宫内膜癌组织学分级 :高度分化腺癌 (G1 )、中等分化腺癌 (G2 )中 bcl- 2和 p16的阳性表达率显著高于未分化癌 (G3)的阳性表达率 (P<0 .0 1)。 bcl- 2表达阳性与阴性者的生存率统计、肌层浸润及手术分期无显著差异 ;p16表达阳性者生存率显著高于阴性者 ,p16的表达与肌层的浸润、手术分期相关 ,p16在 、 期中的表达显著高于 、 期中的表达 (P<0 .0 5 )。结论 :癌基因 bcl- 2和抑癌基因 p16可能在子宫内膜癌的发生、发展、转归方面起着重要作用。

p16/CDKN2对膀胱癌细胞生长的抑制

目的：细胞遗传学和分子遗传学的分析证明，已发现的肿瘤抑制基因象Ｒｂ基因和ｐ５３基因的缺失或突变与膀胱癌的发生有关。最近，一种新的肿瘤抑制基因ｐ１６／ＣＤＫＮ２已被克隆定位于染色体９ｐ２１。在一些肿瘤标本及其部分肿瘤的培养细胞上，常检测到该基因的缺失。故研究该基因的改变与膀胱癌发生之间的关系，将有助于揭示膀胱癌的发生机制。方法：我们以磷酸钙沉淀技术将野生型ｐ１６／ＣＤＫＮ２ｃＤＮＡ转染到内源性ｐ１６／ＣＤＫＮ２序列有突变或缺失的膀胱癌细胞系ＲＴ４和ＲＴ１１２。对Ｇ４１８抗性选择所获阳性克隆，进行体外细胞生长及裸鼠致癌试验。结果：发现只有携带重组外源性ｐ１６／ＣＤＫＮ２ｃＤＮＡ的克隆才能生长传代，这些克隆的体外细胞生长试验及对裸鼠致癌性试验结果均与其亲代细胞类同，这和将野生型ｐ５３基因转染到该基因有改变的细胞中所获的结果相似。结论：提示ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因的过量表达，可抑制膀胱癌细胞生长，该基因的失活可能与膀胱癌的发生有关，值得进一步研究。

抑癌基因p16和转移抑制基因nm23在卵巢上皮性肿瘤中的表达

目的:探讨抑癌基因p16及转移抑制基因nm23与卵巢上皮性肿瘤病理特点及生物学行为的关系。方法:免疫组化SP法检测30例正常卵巢,50例卵巢上皮性良性肿瘤及50例卵巢癌组织中P16蛋白和nm23蛋白,并分析其阳性表达与肿瘤的关系。结果:nm23蛋白在卵巢癌组织中的阳性率(70.0%)明显高于正常卵巢(43.3%)及良性肿瘤组(44.0%)(P<0.05);在浆液性癌(87.5%)和粘液性癌(47.8%)中的阳性差率也有显著差异(P<0.05);特别是在有淋巴结转移(39.1%)和无淋巴结转移(92.6%)的中检出率相非常显著(P<0.01),而与卵巢癌的临床分期及病理分级无明显相关性。p16蛋白在卵巢癌中的检出率(26.0%)明显低于正常卵巢(80.0%)和良性上皮性肿瘤(52.0%)(P<0.01),在晚期肿瘤中的表达率(20.5%)也远低于早期肿瘤(63.6%),而且在高度恶性组织中表达水平(11.1%)与中低度恶性组织的表达水平(43.5%)也有显著差异(P<0.05)。结论:nm23基因的表达与卵巢癌的淋巴结转移等生物学行为有关,p16基因可作为临床判断预后的重要指标之一。nm23、p16基因与卵巢上皮性肿瘤的发生、发展密切相关。

抑癌基因P16 P21和PRB与胃癌发生

引言胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，其发生发展涉及多种癌基因激活和抑癌基因失活的过程．抑癌基因ｐ１６，ｐ２１和ｐＲＢ在许多原发性肿瘤组织中都有缺失或产生高频率的突变．为探讨抑制基因ｐ１６，ｐ２１和ｐＲＢ在胃癌组织中表达水平及与胃癌发生的关系，本文采用...

抑癌基因P16、P21和P53在骨巨细胞瘤中的表达及相关性研究

目的 检测抑癌基因P16,P21和P53在骨巨细胞瘤(GCT)组织中的表达,探讨它们之间的相关性及与病理分级的关系,以进一步了解GCT的发生,细胞学性质及生物学行为,为临床治疗提供参考。方法 用免疫组织化学方法对49例存档GCT蜡块标本进行了检测。结果(1)P16、P21和P53 3种抑癌基因产物在GCT中均有表达,单核基质细胞和多核巨细胞均可着色,阳性率分别为71.4％、85.7％、38.8％,阳性细胞呈散在,片状或团块状分布。(2)P53在Ⅲ级与Ⅰ级和Ⅱ级之间的表达差异有显著性(P<0.01),P21在Ⅲ级与Ⅰ级之间的表达差异有显著性(P<0.01)。(3)P16和P21在GCT中的表达具有高度相关性(x^2=7.2,P<0.01),P16与P53,P21和P53之间的表达无相关性(x^2分别为2.728和3.593,P>0.05)。结论(1)GCT中存在两种单核基质细胞和多核巨细胞,部分单核基质细胞和少数多核巨细胞为肿瘤细胞,单核基质细胞为P53表达的主要肿瘤细胞成分。(2)病理分级能在一定程度上反映GCT的良恶性,结合P53与P21的检测可作为判断预后的指标。(3)P16蛋白与P21蛋白的表达呈高度相关性,P16蛋白与P53蛋白,P21蛋白与P53蛋白的表达没有相关性。

宫颈癌组织中癌基因c-myc与抑癌基因p16的对比分析

背景与目的:原癌基因的激活和抑癌基因的失活是许多肿瘤发生的机制;c-myc与p16的异常表达是否共同参与宫颈癌的发生、发展,以及两种基因的表达与宫颈癌细胞对化疗药物反应的相关性均未明确。本研究旨在探讨c-myc与p16在宫颈癌发生、发展中的作用及其与化疗的关系。方法:采用原位分子杂交技术,用地高辛标记探针检测37例宫颈鳞癌组织(其中11例为化疗后组织)、21例癌前病变组织及5例正常宫颈组织中c-mycmRNA与p16mRNA的表达情况,并用图像分析仪对阳性信号的灰度值作定量分析。结果:正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样病变(cervicalintraepithelialneoplasia,CIN)组织、宫颈鳞癌组织中p16的表达率分别为100.0%、71.4%及21.6%(P=0.0001),c-myc的表达率分别为0%、42.9%、75.7%(P=0.0011),p16及c-myc的表达在三组间差异均有统计学意义,c-myc表达强度随恶性程度的增高而增强,且CINⅢ级比CINⅡ级和CINⅠ级表达强,化疗前c-myc表达率比化疗后高,c-myc与p16的表达呈负相关(rs=-0.907)。对化疗敏感者与不敏感者的c-myc和p16表达均无显著性差异。结论:癌基因c-myc的过表达与抑癌基因p16的失表达在宫颈癌的发生、发展过程中可能起着重要的作用;c-myc在不同级别CIN增生细胞中的表达变化趋势提示细胞癌变是一个渐进的过程。

非小细胞肺癌pl6/CDKN2基因失活的研究

目的：分析中国人非小细胞肺癌中ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因失活的情况，探讨该基因在肺癌发生中的作用。方法：选取与ｐ１６基因紧密连锁的Ｄ９Ｓ１７４８位点，对１７例临床切除的原发性肺癌标本进行微卫星不稳定性分析，用甲基化特异性ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＣＲ， ＭＳＰ）检测 ｐｌ６基因启动子区 ＣｐＧ岛甲基化状况，用免疫组织化学法检测Ｐ１６蛋白表达情况。结果：微卫星不稳定性分析结果表明，在１３例Ｄ９Ｓ１７４８位点存在多态性的肿瘤ＤＮＡ中有 ９例（６９ ．２％）发生了杂合性缺失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ， ＬＯＨ）。 ＭＳＰ的结果显示，有 ７０． ６％（１２／１７）的肿瘤组织存在ｐ１６启动子区的异常高甲基化。在本研究中，８２．４％（１４／１７）的肿瘤组织可以检测出一种或两种ｐ１６基因的异常改变。对此１７例肿瘤标本进行的免疫组织化学分析显示，有 １３例 Ｐ１６蛋白表达阴性，其中 ９２ ３％（１２／１３）存在一种或两种ｐ１６基因的异常改变。免疫组化结果与ｐ１６基因分子遗传学改变情况基本吻合。结论：作为一种抑癌基因，ｐ１６在多种肿瘤组织中都有异常改变。我们的研究表明，ｐ１６基因失表达是非小细胞肺癌?

胃癌中抑癌基因GKN1和p16的表达及意义

目的观察胃动蛋白1(gastrokine-1,GKN1)和p16蛋白在胃癌和正常胃组织中的表达,探讨二者表达与胃癌临床病理特征的关系,为获取胃癌诊断和预后相关的蛋白分子提供实验依据。方法应用免疫组化EliVision Plus法检测78例胃癌和30例正常胃黏膜中GKN1和p16蛋白的阳性率。结果正常胃黏膜组织和胃癌组织中GKN1的阳性率分别为93.3%与15.4%;正常胃黏膜组织和胃癌组织中p16的阳性率分别为96.7%和32.1%,GKN1和p16在胃癌组织中表达下调;GKN1表达与胃癌临床分期、Lauren分类和HP感染有关(P<0.05),p16蛋白表达与胃癌临床分期、分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 GKN1和p16均为抑癌基因,二者在胃癌中的表达缺失均与胃癌的发生密切相关。

P16抑癌基因在卵巢肿瘤中的表达

目的：研究抑癌基因P16与卵巢癌的关系，方法：用免疫组织化学及原位杂交方法检测T72例卵巢肿瘤组织中P16抑癌基因蛋白及其mRNA的表达情况。结果：免疫组化显示：P16在卵巢癌、良性卵巢肿瘤、交界性肿瘤及正常卵巢组织中的检出率分别为：7．89％、60．00％、6．67％和83．30％，各组与卵巢癌组相比有显著差异（P＜0．01）。原位杂交表明在上述不同组织中P16mRNA的阳性率分别为21．05％、70．00％、58．33％和75．00％，各组与卵巢癌组相比有显著差异（P＜0．05）。结论：P16在卵巢癌中的表达明显低于其它卵巢肿瘤及正常卵巢组织中，表明P16作为一种重要的抑癌基因。

P^(16)抑癌基因产物在肺癌中的表达及临床意义

研究P16在肺癌中的表达与临床病理的关系。用免疫组织化学ABC法检测60例肺癌石蜡标本P16蛋白的表达水平。结果：8例小细胞肺癌P16蛋白的阳性表达率为100％。52例非小细胞肺癌P16蛋白的阳性表达率为57．6％，其中伴有淋巴结转移的肺癌P16蛋白的阳性表达率（18．1％）显著低于无淋巴结转移者（P16阳性表达率为86．6％，P＜0．01），低分化肺癌P16蛋白的阳性表达率（30％）显著低于中、高分化肺癌P16蛋白的阳性表达率（75％），P＜0．05。P16蛋白表达阳性的病人的3a生存率为64．8％。而P16蛋白表达阴性者其3a生存率仅20．3％（P＜0．05）。P16蛋白的表达与病人年龄、性别无关。结论：P16蛋白表达与肺癌组织类型、分化程度及转移有关。P16蛋白的状态可作为判断非小细胞肺癌预后的指标。

胆管癌中PTEN和p16抑癌基因蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨抑癌基因PTEN和p16蛋白表达与胆管癌生物学行为的关系。方法 应用免疫组化方法检测 43例胆管癌组织和 10例慢性胆管炎胆管壁组织的PTEN和p16基因蛋白的表达 ,并综合分析它们与胆管癌临床病理因素间的关系。结果 在胆管癌组织中 ,PTEN和p16表达阳性率分别为3 9 .5 %和 44 .2 %。PTEN和p16表达与胆管癌的TNM分期、分化程度和转移密切相关 (P <0 .0 5 )。PTEN表达与p16表达呈正相关 (r =0 .62 ,P <0 .0 0 5 )。结论 检测PTEN和p16抑癌基因表达可作为评估胆管癌生物学行为和预后的参考指标。

新型抑癌基因 p16

新型抑癌基因ｐ１６朱如玮刘振延作者单位：苏州医学院病理解剖教研室（苏州２１５００７）细胞的增殖失控是肿瘤组织最显著的特点，癌基因、抑癌基因对细胞增殖周期各环节直接或间接的调控作用发生异常，从而导致肿瘤的发生。近２０年来人们先后发现了十余种抑癌基因，其...