CDKN2A/B基因多态性在颅内动脉瘤形成过程中的功能分析

目的研究CDKN2A/B相关基因位点突变与颅内动脉瘤形成的关系。方法病例组82例为安阳市人民医院神经外科在2017-2021年间收治的开颅夹闭颅内动脉瘤患者。对照组为该院同期收治的入院头CTA检查无颅内动脉瘤的头外伤患者,共114例。两组均使用SNP基因分型,对病例组不同基因型的动脉瘤壁组织内CDKN2A/B基因翻译、表达的产物进行对比分析。结果动脉瘤壁内表达CD⁃KN2A/B基因产物p15^(INK4b)/p16^(INK4a)蛋白,rs10757272位点等位基因T的频率高于对照组(P=0.029,OR=1.658,95%CI:1.051~2.614),rs10757272位点在T/T基因型动脉瘤瘤壁组织中p16^(INK4a)(P<0.001)/p15^(INK4b)(P=0.014)mRNA低水平转录,在T/T基因型中p15^(INK4b)蛋白为低水平表达(P=0.027),p16^(INK4a)蛋白的表达水平差异无统计学意义(P=0.089),但是有相似的低表达趋势。结论rs10757272位点的突变通过影响细胞周期抑制基因CDKN2A/B的表达,影响动脉瘤壁组织细胞的塑性,参与动脉瘤的形成过程。

恶性胸膜间皮瘤细胞培养条件及CDKN2B对癌细胞的作用

目的探讨不同培养条件(RPMI-1640、DMEM和DMEM/F12培养液)对人恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)组织中分离的MPM细胞传代的影响以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(cyclin dependent kinase inhibitor 2B,CDKN2B)对MPM细胞增殖、侵袭和凋亡的作用。方法从MPM组织中分离细胞分别用RPMI-1640、DMEM和DMEM/F12培养液培养。CCK-8检测细胞增殖,细胞核及染色体利用瑞氏-吉姆萨染色观察,免疫荧光实验检测MPM标志物Calretinin、CD141、CK5、EMA和WT-1荧光强度。RT-qPCR和Western blot分别检测CDKN2B的mRNA和蛋白表达能力。Transwell检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果建立的MPM细胞在RPMI-1640、DMEM和DMEM/F12培养液中传至第10代仍具有较好的活力,且MPM标志物Calretinin、CD141、CK5、EMA和WT-1在细胞中均表达,MPM细胞在RPMI-1640培养液中活力较为稳定。CDKN2B在MPM细胞中低表达(P<0.05),过表达CDKN2B显著抑制MPM细胞的增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.05)和上皮间质转化(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01)。结论建立的MPM细胞可在RPMI-1640培养液中稳定传代,CDKN2B可作为MPM诊断和治疗的潜在靶标。

芍药苷调节丝氨酸/苏氨酸激酶/鼠双微基因2/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响实验研究

目的:探讨芍药苷(PAE)调节丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)/鼠双微基因2(MDM2)/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:以OCI-LY3细胞为研究对象,分别设置PAE低浓度组(15μmol/L PAE)、PAE中浓度组(30μmol/L PAE)、PAE高浓度组(60μmol/L PAE)、PAE高浓度+SC79(AKT激活剂)组(60μmol/L PAE+8μg/ml SC79),同时以未经处理的细胞为对照组。48 h后,分析细胞增殖、克隆形成能力及细胞周期和凋亡变化,检测AKT/MDM2/p53信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,PAE低浓度组、PAE中浓度组、PAE高浓度组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期增加,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期降低(均P<0.05)。与PAE高浓度组比较,PAE高浓度+SC79组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期降低,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期增加(均P<0.05)。结论:PAE通过抑制AKT/MDM2上调p53表达,抑制DLBCL细胞增殖、细胞周期进展,诱导其凋亡。

CYP2C19基因多态性、血清NT-proBNP水平与急性脑梗死静脉溶栓预后不良的关系

目的探讨CYP2C19基因多态性、血清N末端B型脑利钠肽前体(NT-proBNP)水平与急性脑梗死(ACI)患者静脉溶栓预后不良的关系。方法选择210例ACI患者,均行阿替普酶静脉溶栓治疗,治疗90 d后根据改良Rankin量表(mRS)评分将患者分为预后不良组(mRS评分≥3分)52例、预后良好组(mRS评分<3分)158例。治疗前采用实时荧光定量PCR法检测CYP2C19基因多态性,时间分辨荧光免疫层析法检测血清NT-proBNP。用Pearson或Spearman分析CYP2C19基因多态性、血清NT-proBNP水平与mRS评分的相关性;用多因素Logistic回归分析ACI患者静脉溶栓预后的影响因素;用受试者工作特征曲线分析CYP2C19基因多态性、血清NT-proBNP水平对ACI患者静脉溶栓预后不良的预测价值。结果预后不良组年龄、高血压比例、糖尿病比例、入院美国国立卫生研究所脑卒中(NIHSS)评分、空腹血糖水平高于预后良好组(P均<0.05)。预后不良组和预后良好组CYP2C19基因多态性比较差异有统计学意义(P<0.05),预后不良组血清NT-proBNP水平高于预后良好组(P<0.05)。ACI患者CYP2C19基因多态性(r_(s)=0.362)、血清NT-proBNP水平(r=0.426)与mRS评分均呈正相关(P均<0.05)。高NIHSS评分、CYP2C19基因慢代谢型、高血清NT-proBNP水平是ACI患者预后不良的危险因素(P均<0.05)。CYP2C19基因多态性、血清NT-proBNP水平单独及联合预测ACI患者静脉溶栓预后的曲线下面积分别为0.752、0.786、0.861,二者联合预测的曲线下面积高于单独预测(P均<0.05)。结论CYP2C19基因多态性和高水平NT-proBNP是ACI患者静脉溶栓预后不良的危险因素,二者联合对不良预后有较高的预测价值。

原花青素B2通过miR⁃499⁃5p促进骨骼肌慢肌纤维基因的表达

旨在探究原花青素B2(Proanthocyanidins B2,PB2)是否通过miR⁃499⁃5p调控骨骼肌慢肌纤维基因的表达.在小鼠C2C12细胞和猪骨骼肌卫星细胞诱导分化形成肌管后,分别向肌管中添加0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL和10μg/mL的PB2,探究不同浓度PB2对慢肌纤维基因表达的影响.在机制研究试验中,分别向C2C12肌管和猪肌管中添加10μg/mL的PB2,同时转染200 nM的miR⁃499⁃5p inhibitor抑制miR⁃499⁃5p的表达.结果表明,不同添加剂量的PB2均可促进C2C12肌管MyHC I基因的表达(P<0.05);添加5μg/mL和10μg/mL的PB2显著增加猪肌管MyHC I基因的表达(P<0.05);添加5μg/mL和10μg/mL的PB2上调C2C12肌管和猪肌管miR⁃499⁃5p的表达水平(P<0.05).机制研究发现,抑制miR⁃499⁃5p解除了PB2对miR⁃499⁃5p、MyHC I mRNA和慢型MyHC蛋白表达的促进作用.以上研究表明,PB2可以通过miR⁃499⁃5p促进骨骼肌慢肌纤维基因的表达.

急性脑梗死患者CYP2C19、MTHFR、SLCO1B1和APOE基因检测结果分析

目的探讨急性脑梗死患者CYP2C19、MTHFR、SLCO1B1和APOE基因多态性分布,为个体化药物治疗提供理论依据。方法选取2020-2022年该院收治的急性脑梗死患者400例作为研究对象,采用PCR-荧光探针方法对急性脑梗死患者CYP2C19、MTHFR、SLCO1B1和APOE基因多态性进行检测,分析基因多态性分布的情况。结果在急性脑梗死患者中,CYP2C19基因表型中EM型占比为44.25%,PM型占比为9.75%;MTHFR基因C677T位点突变型(CT型+TT型)占比为78.50%,CC型占比为21.50%;SLCO1B1基因型中的78.75%为Ⅰ类野生表型,1.50%为Ⅲ类纯合突变型;APOE基因表型中E2型和E3型占比为84.25%,E4型占比为15.75%。结论对400例急性脑梗死患者CYP2C19、MTHFR、SLCO1B1和APOE基因多态性的分布进行了分析,对指导急性脑梗死患者人群个体化用药提供数据支持,对实现安全用药具有重要意义。

细胞衰老基因CDKN2B上调与甲状腺癌侵袭性及免疫细胞浸润的关系

目的 分析生物信息学对细胞衰老相关基因(AGs)CDKN2B与甲状腺癌(TC)的侵袭性及免疫细胞浸润的关系。方法 从肿瘤基因组图谱(TCGA)得到衰老相关基因在TC组织和癌旁正常甲状腺组织中的转录表达谱进行差异分析。对表达上调的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CDKN)2B进行基因层面表达分析及蛋白水平层面的免疫组化分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线对TC组织与癌旁正常组织进行鉴别。在Mexpress数据库中评估THCA患者CDKN2B mRNA表达与THCA患者临床数据的关系。使用基因本体功能注释(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因集富集分析(GSEA)对差异表达基因进行功能及通路富集分析。通过肿瘤免疫评估资源(TIMER)和肿瘤-免疫系统相互作用数据库(TISIDB)确定CDKN2B mRNA的表达与免疫细胞浸润的关系。结果 TCGA数据库分析,与甲状腺癌旁组织相比,CDKN2B mRNA在TC组织中明显高表达,在癌旁组织明显低表达(P<0.05)。ROC曲线分析得出,在CDKN2B临界值为1.945时,其敏感性、特异性和准确性分别为96.58%、84.53%和85.74%。Mexpress数据库分析显示,CDKN2B mRNA的表达与组织学类型、M分期、N分期、个人肿瘤癌症状况、性别、肿瘤分期、总生存时间差异有统计学意义(P<0.05)。GO分析表明,这些差异基因与生长因子受体信号通路和细胞衰老信号通路相关。KEGG通路富集分析主要与细胞衰老和P53信号通路相关。TIMER数据库分析,TC组织中CDKN2B表达与中性粒细胞(r=0.526,,P<0.001)、CD4^(+)T细胞(r=0.507,P<0.001)、树突细胞(r=0.437,P<0.001)、B细胞(r=0.356,P<0.001)、巨噬细胞呈正相关(r=0.335,P<0.001)。TISIDB数据库分析显示CDKN2B表达与Th1细胞、Th2细胞、中性粒细胞、未成熟树突细胞、巨噬细胞相关。免疫组化结果显示,甲状腺乳头癌(PTC)和癌旁组织中CDKN2B表达的阳性率差异显著(P<0.001)。PTC组织中CDKN2B的表达与肿瘤直径和淋巴结转移相关(P<0.05),与患者性别、年龄、腺外侵犯无关(P>0.05)。结论 CDKN2B在THCA中的高表达可能与肿瘤的侵袭和免疫浸润显著相关。

2型糖尿病人群CDKN2A/B基因多态性与冠心病风险的相关性研究

目的观察T2DM人群细胞周期蛋白依赖激酶抑制基因2A/B(CDKN2A/B)基因多态性是否与冠心病风险相关,以早期筛查DM人群中冠心病的高危人群。方法对我院因胸痛症状行冠脉造影或冠脉CT检查的T2DM患者,根据冠脉造影或冠脉CT结果分为冠心病组及非冠心病组。冠心病组共220例,非冠心病组共89例。根据Hapmap数据库选取CDKN2A/B共7个单倍型标记的单核苷酸多态性(SNP):CDKN2A rs2811708(G>T)、rs3088440(A>G)和rs3731239(C>T),CDKN2B rs3217986(A>C)、rs1063192(C>T)、rs2285327(A>G)和rs3217992(A>G)。对所有个体进行PCR扩增并通过RFLP或基因测序方法读取个体的基因型。结果在T2DM人群中,冠心病组中CDKN2A rs2811708的次要等位基因T频率(26.4%)显著高于非冠心病组(17.4%)(P<0.05),基因型分布在两组间存在显著性差异(P<0.05),G/T基因型携带者较G/G基因型携带者发生冠心病的风险显著增加(P<0.05),在校正心血管其他风险因素(如性别、年龄、BMI、DM病程、高血压病病史、脂代谢异常病史、吸烟史)后,这种相关性仍然存在(P<0.01)。结论 T2DM人群中,CDKN2A/B基因单核苷酸多态性可能与冠心病的风险相关。

以皮肤肿块为首发临床表现的伴MYC和BCL2重排弥漫性大B细胞淋巴瘤

报告1例以皮肤肿块为首发临床表现的伴细胞性骨髓细胞瘤病病毒癌(MYC)基因和B细胞淋巴瘤因子2(BCL2)基因重排弥漫性大B细胞淋巴瘤。患者女,87岁。左侧眉弓上方皮肤结节1年。皮肤科检查:左眉上方一肤色圆形肿物,隆起于皮肤表面,肿物表面可见浸润性红斑,伴少许渗出,并见结痂、鳞屑,边界清楚。皮损组织病理检查:表皮形态正常,真皮层内大量母细胞样淋巴细胞结节状浸润。免疫组化:母细胞样淋巴细胞CD45、CD79a、B细胞淋巴瘤因子6(BCL6)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及MYC均(+);CD3、CD2、CD30、细胞角蛋白(CKP)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)及Epstein-Barr病毒编码RNA(EBER)均(-)。荧光原位杂交检测:MYC、BCL2及BCL6均重排。诊断:伴MYC和BCL2重排弥漫性大B细胞淋巴瘤。患者未治疗,2个月后死亡。

利用CRISPR/Cas9构建敲除小鼠模型研究PPP2R3A基因对心脏功能的影响

目的 应用CRISPR/Cas9技术构建蛋白磷酸2调节亚基B″家族α亚型(PPP2R3A)基因敲除小鼠,从分子水平及组织水平上研究PPP2R3A缺失对心脏的影响。方法 将Cas9 mRNA和两个靶向PPP2R3A第3外显子翻译起始密码子附近区域的单导向RNA微注射到C57BL/6小鼠受精卵中。小鼠出生后取其基因组DNA进行聚合酶链反应(PCR)和测序以鉴定基因型,鉴定后,基因PPP2R3A缺失型小鼠为KO组,野生型C57BL/6小鼠为WT组(雄性3只,雌性2只)。小鼠心脏组织经甲醛固定并制成切片后分别进行苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色。提取小鼠心脏组织总RNA和蛋白,应用荧光定量PCR和Western印迹验证基因敲除小鼠的有效性和检测互作蛋白表达。结果 获得F1代PPP2R3A杂合小鼠,PCR和测序结果表明突变小鼠的基因型存在113 bp的缺失突变。与WT组相比,KO组心脏组织中PPP2R3A mRNA和蛋白表达量明显下降(均P<0.05),参与心脏发育的G蛋白信号转导调控因子(RGS)19表达量明显升高(P<0.05)。PPP2R3A蛋白表达受损引起了心脏组织病理学变化。结论 PPP2R3A在体内可能通过与RGS19蛋白互作来参与心脏的发育并对心脏功能产生影响。

miR-10b介导NKG2D调节脑胶质瘤细胞免疫效应的实验研究

目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组、空白组,每组6个复孔。对照组、过表达组、低表达组分别采用脂质体转染法转染阴性对照、miR-10b模拟物、miR-10b抑制剂,空白组予以等量无菌生理盐水。分离和培养1例健康志愿者外周血自然杀伤(NK)细胞。MTT法检测不同效靶比时NK细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测各组NK细胞表面NK细胞激活受体(NKG2D)表达,并检测各组人脑胶质瘤细胞U251表面主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)表达。结果:对照组、过表达组、低表达组转染效率分别为(93.55±2.05)%、(95.67±3.14)%、(94.18±3.26)%;与对照组和空白组相比,过表达组miR-10b表达升高,低表达组miR-10b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组和空白组miR-10b表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均降低、NKG2D表达降低,低表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均增高、NKG2D表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05),各组NK细胞杀伤活性均随效靶比增加而增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组相比,相同效靶比NK细胞杀伤活性、NKG2D表达差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均降低,低表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制miR-10b表达能够增加NK细胞表面NKG2D和人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强NK细胞对人脑胶质瘤细胞U251的杀伤活性。

重组细胞因子基因衍生蛋白与干扰素α-2b分别联合恩替卡韦治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者疗效研究

目的观察比较应用重组细胞因子基因衍生蛋白或干扰素α-2b分别联合恩替卡韦治疗血清HBeAg阳性的慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效.方法2019年3月~2021年3月我院诊治的65例血清HBeAg阳性的CHB患者被分成两组,分别给予干扰素α-2b联合恩替卡韦治疗或重组细胞因子基因衍生蛋白联合恩替卡韦治疗48 w.常规检测血清生化学、血清学和病毒学指标.结果在治疗12 w末,恩替卡韦联合重组细胞因子基因衍生蛋白治疗组血清HBeAg转阴率和HBeAg血清转换率分别为34.4%和25.0%,均显著高于恩替卡韦联合干扰素α-2b治疗组的9.1%和6.1%,差异有统计学意义(P<0.05);在治疗48 w末,恩替卡韦联合重组细胞因子基因衍生蛋白治疗组血清ALT复常率、血清HBeAg转阴率和HBeAg血清转换率分别为87.5%、62.5%和40.6%,均显著高于恩替卡韦联合干扰素α-2b治疗组的78.8%、30.3%和18.2%,差异有统计学意义(P<0.05);在治疗期间,联合干扰素治疗组乏力和发热头痛发生率分别为21.2%和84.9%,显著高于联合衍生蛋白治疗组的3.1%和3.1%(P<0.05),而两组中性粒细胞减少、血小板减少、食欲下降和低钙血症等不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论相比于干扰素α-2b联合恩替卡韦,应用重组细胞因子基因衍生蛋白联合恩替卡韦治疗血清HBeAg阳性的CHB患者能够获得更好的血清学转换率和较小的不良反应,值得进一步观察研究.

乳腺癌患者病理特征与Bcl-2、CXCL13、PAX8表达情况的关系分析

目的分析乳腺癌患者病理特征与B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、趋化因子配体13(CXCL13)、配对盒基因8抗体(PAX8)表达情况的关系。方法收集2021年1月至2023年1月该院收治的160例乳腺癌患者临床资料。采用免疫组化法对其癌组织与癌旁组织Bcl-2、CXCL13、PAX8表达情况进行检测,并分析3项指标与患者病理特征的关系。结果与癌旁组织比较,癌组织Bcl-2、CXCL13、PAX8阳性率更高,差异有统计学意义(P<0.05)。与雌激素受体(ER)阴性、肿瘤最大径≥3 cm、孕激素受体(PR)阴性患者比较,ER阳性、肿瘤最大径<3 cm、PR阳性患者中Bcl-2高表达占比更高,差异有统计学意义(P<0.05);与无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期患者比较,淋巴结转移、Ⅲ~Ⅳ期患者中CXCL13高表达占比更高,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅰ~Ⅱ期、高/中分化、无淋巴结转移患者比较,Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移患者中PAX8高表达占比更高,差异有统计学意义(P<0.05)。ER、PR表达情况与Bcl-2表达情况呈正相关(P<0.05),肿瘤最大径与Bcl-2表达情况呈负相关(P<0.05);临床分期、淋巴结转移情况与CXCL13、PAX8表达情况呈正相关(P<0.05);分化程度与PAX8表达情况呈负相关(P<0.05)。结论乳腺癌患者Bcl-2、CXCL13、PAX8表达情况对疾病的发生和发展具有明显影响,有望成为评估乳腺癌患者病情严重程度的标志物。

姜曲海猪ATP2B1基因克隆、生物信息学及组织表达分析

克隆姜曲海猪质膜钙转运ATP酶1(ATPase Plasma Membrane Ca2+Transporting 1,ATP2B1)基因CDS区序列,对其进行生物信息学分析,并探究ATP2B1基因在不同日龄姜曲海猪子宫组织的表达水平,以期为研究ATP2B1基因在姜曲海猪繁殖性能方面的作用提供参考依据,采用RT-PCR技术扩增姜曲海猪子宫ATP2B1基因CDS区序列,利用生物信息学软件对其进行分析,利用实时荧光定量PCR检测ATP2B1基因在1月龄和8月龄姜曲海猪子宫组织中的表达量。结果显示,姜曲海猪ATP2B1基因CDS区全长3 663 bp,编码1 220个氨基酸,与野猪同源性最高、亲缘关系最近。姜曲海猪ATP2B1蛋白分子质量约为134 737.94 u,原子总数为19 102个,理论等电点(pI)为5.63,带正电荷、负电荷的氨基酸数分别为141、161个。该蛋白最可能位于细胞膜上,为跨膜、非分泌型疏水蛋白质,有159个磷酸化位点和5个N-糖基化位点,无规则卷曲在预测的二级结构中占比最大。实时荧光定量PCR结果显示,ATP2B1基因在8月龄姜曲海猪子宫组织中的表达量显著低于1月龄姜曲海猪子宫组织(P<0.05)。本试验为探明ATP2B1基因对猪繁殖性状的影响提供了分子理论依据。

羊口疮病毒B2L和F1L截短融合基因原核表达产物的免疫原性分析

为分析羊口疮病毒(OrfV)B2L和F1L截短融合基因表达蛋白的反应原性,本研究分别选取B2L、F1L基因序列的主要抗原区域,采用重叠延伸PCR将二者融合后克隆至原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-32a-B2L-F1L,通过PCR、双酶切和测序鉴定,结果显示获得1080 bp的B2L-F1L融合基因目的片段,测序结果经比对分析正确无误,表明正确构建了重组表达质粒pET-32a-B2L-F1L。将pET-32a-B2L-F1L转化BL21(DE3)后经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果显示表达了39 ku的重组蛋白rB2L-F1L。采用Ni-IDA亲和层析方法纯化重组蛋白,经western blot鉴定,结果显示获得39 ku的单一特异性条带,表明rB2L-F1L的纯化效果和免疫原性均较好。采用rB2L-F1L纯化蛋白皮下多点注射免疫羔羊,采用ELISA方法检测免疫后不同时间羔羊血清中的OrfV抗体、IL-2、IFN-γ和IL-4细胞因子。结果显示,与生理盐水组相比,rB2L-F1L能够诱导羔羊产生OrfV特异性抗体,并可显著或极显著诱导羔羊分泌IL-2、IFN-γ和IL-4细胞因子(P<0.05、P<0.01);与弱毒活疫苗组比较,除在免疫后14 d~28 d时rB2L-F1L诱导羔羊产生的IL-2水平显著低于弱毒活疫苗组外(P<0.05),其他细胞因子在各时段两组均无显著差异(P>0.05)。本研究首次将OrfV优势抗原基因融合表达并分析了融合蛋白的免疫原性,为OrfV的检测技术和基因工程亚单位疫苗的研发奠定了良好基础。

磷酸酶与张力蛋白同源物/蛋白激酶B/鼠双微体基因2信号通路相关蛋白表达及与胃癌复发转移的关联

目的探究磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)/鼠双微体基因2(MDM2)信号通路相关蛋白表达及与胃癌复发转移的关联。方法回顾性分析2017年6月至2019年6月江苏大学附属医院收治的130例胃癌患者手术切除胃癌组织及癌旁组织。采用GEPIA数据库分析PTEN、p-AKT、p-MDM2在胃癌组织中的表达,比较癌旁组织、胃癌组织PTEN、p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平。随访至2022年6月,按照复发转移情况将患者分为复发转移组和无复发转移组。比较两组患者胃癌组织PTEN、p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平。采用Logistic回归分析法分析胃癌复发转移的影响因素。结果GEPIA分析TCGA数据库和GTEx项目来源的数据发现,胃癌组织的PTEN水平低于正常组织,p-AKT、p-MDM2水平均高于正常组织(P<0.05)。与癌旁组织比较,胃癌组织PTEN蛋白表达水平降低,p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平升高(P<0.05)。与无复发转移组比较,复发转移组胃癌组织PTEN蛋白表达水平降低,p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平升高(P<0.05)。对130例患者进行随访,随访时间36~60个月,平均随访时间(49.31±8.35)个月,中位随访时间为46个月。其中复发转移患者59例,无复发转移患者71例。与无复发转移组比较,复发转移组Ⅲ-Ⅳ期、中低分化、浸润深度T 3-T 4构成比升高(P<0.05)。Logistic回归分析显示,TNM分期(OR=2.125,95%CI:1.101~3.150)、分化程度(OR=2.659,95%CI:1.365~3.953)、浸润深度(OR=3.037,95%CI:1.254~4.821)、p-AKT(OR=3.142,95%CI:2.379~3.906)、p-MDM2(OR=6.666,95%CI:3.241~10.091)均是胃癌复发转移的危险因素;PTEN是胃癌复发转移的保护因素(OR=0.394,95%CI:0.014~0.774,P<0.05)。结论胃癌中PTEN/AKT/MDM2信号通路PTEN表达下调,p-AKT、p-MDM2表达上调,与胃癌复发转移密切相关,可能作为候选治疗靶点。

糖尿病肾病不同中医辨证分型患者中CDKN2A,CDKN2B,IGF2BP2和CDKAL1基因表达研究

目的:研究糖尿病肾病不同中医辨证分型的患者中CDKN2A,CDKN2B,IGF2BP2和CD-KAL1基因的表达量。方法:提取血液样本中的mRNA,并以此为模板进行反转录得到cDNA,以Real-Time PCR方法测定目的基因的表达量。结果:建立了这4个基因的定量方法,测定了50例正常人和53例糖尿病肾病患者中的基因表达量。结论:本研究在糖尿病肾病不同中医辨证分型的患者中测定了4个基因的表达量水平,对这些基因的表达量与糖尿病肾病中医辨证分型的关系进行了研究,为糖尿病肾病中医的临床诊断提供了量化指标,并同时指出基因研究对于中医中药的临床诊断和治疗具有深远的意义。

妊娠糖尿病患者血糖、血脂水平与CDKN2A/2B基因多态性的相关性

目的探讨妊娠糖尿病患者血糖、血脂水平与CDKN2A/2B基因多态性的相关性。方法选取2015年1月至2017年1月我院内分泌科、产科收治的妊娠期糖尿病患者120例(GDM组),同时选取同期在我院产科门诊检查糖耐量试验正常的孕妇120例作为对照。检测两组孕妇CDKN2A/2B基因多态性,并对妊娠期糖尿病患者血糖、血脂水平与CDKN2A/2B基因多态性的相关性进行分析。结果妊娠期糖尿病患者TT、TC基因型的总胆固醇(TC)、空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)高于CC基因型,差异有统计学意义(P<0.05);TT、TC基因型的高密度脂蛋白(HDL)低于CC基因型,差异有统计学意义(P<0.05);两组孕妇CDKN2A/2B基因TT、TC、CC 3种基因型分布差异有统计学意义(P<0.05);GDM组危险等位基因T分布频率显著高于健康对照组(P <0.05)。结论 CDKN2A/2B基因可能是妊娠糖尿病的易感基因之一,TC、TG、LDL、HDL、FBG与CDKN2A/2B基因多态性具有相关性。

CDKN2B-AS1基因多态性与缺血性脑卒中的相关性研究

目的探讨血管阻塞性相关基因CDKN2B-AS1的rs4977574位点和缺血性脑卒中的相关性。方法选取2018年3月—2018年9月郑州市第一人民医院神经内科收治的212例病人,其中脑卒中病人118例(病例组),非脑卒中病人94例(对照组),测定两组血浆总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FPG)及糖化血红蛋白(HbA1c)水平,并通过小测序法(SNaPshot技术)检测CDKN2B-AS1基因位点rs4977574多态性。评估rs4977574多态性与上述生物标志物的相关性。结果与对照组相比,病例组FPG、HbA1c水平明显升高(P<0.05),校正年龄、体质指数、相关病史及危险因素后,低HbA1c(HbA1c≤6.2%)可明显减弱脑卒中的发生风险[OR=0.295,95%CI(0.139,0.623)];空腹血糖正常(FPG<6.1mmol/L)明显减弱脑卒中的发生风险[OR=0.323,95%CI(0.129,0.809)];rs4977574基因型及等位基因频率在病例组和对照组中分布差异有统计学意义(P<0.05)。进一步分析发现,rs4977574多态性与高HbA1c相关;与AA基因型病人相比,(GG+GA)基因型病人中高FPG的发生率明显增加[OR=12.429,95%CI(5.358,28.831),P=0.000]。结论CDKN2B-AS1基因位点rs4977574基因型和糖代谢相关,并和脑卒中具有相关性。

CDKN2A与胶质瘤相关性的研究进展

胶质瘤是最常见的颅内原发性恶性肿瘤,恶性程度高、治疗效果差,具有高致残率、高复发率等特点。细胞周期依赖性激酶抑制基因(CDKN2A)作为一种抑癌基因在多种肿瘤发生发展过程中发挥重要作用,通过对胶质瘤的遗传和表观遗传分析发现,CDKN2A在胶质瘤中对基因改变、信号通路的改变产生重要影响,并且CDKN2A与胶质瘤的发病机制、分子诊断、恶性程度及患者预后密切相关。因此探讨CDKN2A与胶质瘤的相关性就显得尤为重要。本文就CDKN2A与胶质瘤发生发展的相关性展开综述。