CDM3对人诱导多能干细胞与覆有基质胶的聚己内酯共培养制作心肌补片的影响

目的通过标准的化学定义和基于小分子诱导方案(CDM3)促进人诱导多能干细胞心肌向分化,初步制备心肌补片,为进一步通过其他体外实验研究心肌补片成熟度以及体内动物实验研究其安全性提供实验数据和理论依据。方法复苏、培养和鉴定人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSCs)后,将hiPSCs接种到覆有基质胶的聚己内酯(polycaprolactone,PCL)上,24 h后在荧光显微镜下通过DAPI荧光观察细胞生长情况,并通过OCT4荧光进行hiPSCs干性鉴定,固定后进行电镜扫描观察补片表面细胞形态。培养的第1 d、3 d、5 d、7 d分别通过CCK-8法测定细胞活力,绘制生长曲线观察细胞生长增殖情况。hiPSCs与PCL共培养24 h后,分为对照组、CDM3组,继续培养6 d,第8 d在荧光显微镜下通过DAPI荧光观察细胞生长情况,并通过OCT4荧光进行hiPSCs干性鉴定,通过cTnT和α-actin进行心肌细胞标志物鉴定。结果hiPSCs与PCL共培养24 h免疫荧光显示:OCT4发出绿色荧光,hiPSCs在PCL支架上保持干性。DAPI发出蓝色荧光,细胞呈克隆生长,细胞形态均一。扫描电镜显示,hiPSCs在覆有基质胶的PCL上黏附生长,细胞轮廓清晰可见,形态正常。CCK-8法细胞活力测定绘制生长曲线显示:hiPSCs在覆有基质胶的PCL支架上增殖生长。对照组与CDM3组继续培养6 d后,免疫荧光显示:对照组hiPSCs高表达干细胞干性标志物OCT4,不表达心肌标志物c T nT和α-a c t i n;C D M 3组明显表达心肌标志物c T nT和α-a c t i n,不表达干细胞干性标志物O C T 4。结论hiPSCs可以在覆有基质胶的PCL支架上增殖生长,在CDM3作用下,促进hiPSCs分化为心肌样细胞,初步制成心肌补片,为进一步临床治疗心肌梗死提供一种更好的治疗方法。

机械牵张对人诱导多能干细胞分化来源的心肌细胞成熟的影响

目的通过使用标准的化学定义和基于小分子诱导方案(chemically defined medium,3 components,CDM3)获得人诱导多能干细胞分化来源的心肌细胞(human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes,hiPSC-CMs),进一步对其施加机械牵张,探讨机械牵张对hiPSC-CMs成熟的影响及潜在机制。方法复苏、培养和鉴定hiPSCs后,将hiPSCs接种到覆有基质胶的传统培养皿上。24 h后在荧光显微镜下通过DAPI荧光观察细胞生长情况,并通过八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)荧光进行hiPSCs干性鉴定,在细胞汇合度达到80%时更换CDM3分化培养基,分化6 d后将获得的hiPSC-CMs分为对照组和机械牵张组,拉伸结束后重新种板培养24 h后在荧光显微镜下通过DAPI荧光观察细胞生长情况,通过心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)和肌球蛋白轻链2V(myosin light chain 2V,MLC2V)荧光进行hiPSC-CMs心肌细胞标志物鉴定,Piezo1荧光进行潜在机制研究。结果hiPSCs培养24 h免疫荧光显示:OCT4发出绿色荧光,hiPSCs保持干性。DAPI发出蓝色荧光:细胞呈克隆生长,细胞形态均一。机械牵张结束后重新种板培养,24 h后免疫荧光显示机械牵张组较对照组心肌标志物cTnT和MLC2V表达增高(P<0.05);机械牵张组较对照组机械敏感型离子通道Piezo1蛋白表达增高(P<0.05)。结论机械牵张可以促进人诱导多能干细胞分化来源心肌细胞的成熟,这可能与Piezo1蛋白表达增高有关。

胰腺术后胰源性糖尿病研究进展

胰腺疾病近年来发病率呈增长趋势,手术仍是治疗的首选方案。胰腺良性疾病病人预后较好,而继发于胰腺术后的糖尿病不同程度地影响病人的生活质量。目前尚未有针对胰源性糖尿病统一的诊治规范。此文作者通过对文献复习并结合南京大学医学院附属鼓楼医院既往研究结果对胰源性糖尿病的定义、发病机制、发病率、诊断、治疗做一综述,以期为胰腺术后胰源性糖尿病的诊治提供参考。