中药成分CDP对乳腺癌细胞P16,E-CADHERIN去甲基化作用的研究

目的探讨中药成分CDP对乳腺癌细胞系T47D和MDA-MB-435的抑癌基因P16和E-CADHERIN启动子区CpG岛的去甲基化作用。方法培养人乳腺癌细胞系T47D和MDA-MB-435,分别用不同剂量、同一剂量不同时间的CDP和5-azacytidine(5-aza-C)处理细胞;用甲基化特异性PCR(MSP)和半定量RT-PCR,检测细胞中P16和E-CADHERIN基因的甲基化改变和RNA表达恢复情况。结果①在25、50、75和100μmol/L剂量的CDP持续作用6d后,T47D细胞P16基因启动子区CpG岛甲基化特异性条带减弱,在100μmol/L剂量时消失,在4个剂量CDP作用下,非甲基化特异性条带均重新出现;在75和100μmol/L浓度作用下时,T47D细胞中出现P16基因重新表达;②在50μmol/LCDP作用144h后,T47DP16基因启动子区CpG岛甲基化特异性条带仍存在;非甲基化特异性条带24h出现并持续到144h;在药物作用144h时,P16出现表达。③在MDA-MB-435细胞中,用不同剂量CDP处理或同一剂量CDP处理不同时间后,均未观察到E-CADHERIN非甲基化条带的出现,RT-PCR也未检测到E-CADHERIN基因的表达。结论在T47D细胞中,中药成分CDP可以剂量、时间依赖的形式逆转高甲基化的P16基因,而对MDA-MB-435细胞中高甲基化的E-CADHERIN基因无效,提示CDP药物存在靶分子反应多样性。