用固定化啤酒酵母细胞合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱

κ-卡拉胶 -魔芋多糖复配胶包埋的啤酒酵母细胞 ,经冻融处理后用于合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱 (CDP-胆碱 )。结果表明 :2 5 0 m L摇瓶中加入 5 0 m L反应液 (葡萄糖 40 0 mmol/ L,CMP1 0 mmol/ L,磷酸胆碱 5 0 mmol/ L,K2 HPO4 -KH2 PO4 缓冲液 1 0 0 mmol/ L,Mg SO4 1 0 mmol/ L,p H=8.0 ) ,固定化细胞 1 2 0 0 g/ L,3 4°C、1 5 0 r/ min下 ,反应 4h后补加 40 0 mmol/ L葡萄糖 ,反应 8h可使60 %以上的 CMP转化为 CDP-胆碱。反应液经灭菌和添加辅酶 I(NAD+ )后 ,固定化细胞可连续使用 4次 ,CDP-胆碱转化率维持在 40

酿酒酵母磷酸胆碱胞苷转移酶基因(cct)的克隆表达及活性测定

以酿酒酵母(Saccharomyces cervisiae)基因组DNA为模板,克隆并表达了编码磷酸胆碱胞苷转移酶的基因cct。根据NCBI提供的序列信息,设计扩增cct基因的引物,经PCR扩增、酶切后,将cct插入到表达载体pET-29a(+)中,构建了重组质粒pET-29a-cct,经过酶切验证和测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在30℃条件下经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE结果显示构建的工程菌可高效表达相对分子质量约45 k的蛋白,与理论值相符。对粗酶液进行活性测定,表达产物可检测到CCT酶活性,即可转化CTP和磷酸胆碱为CDP-胆碱,此结果可为CDP-胆碱的生物合成提供依据。

黄酮类化合物影响卵磷脂的研究进展

黄酮类化合物对机体有重要生理功能,能促进机体脂质代谢、提高免疫功能、改善生产性能,是一类具有广阔发展前景的新型饲料添加剂。本文综述了蛋黄卵磷脂在肝脏中合成过程和转运途径,探讨黄酮类化合物能够提高蛋黄卵磷脂含量的可能性。