白细胞介素-38对乳腺癌患者CD8^(+)T淋巴细胞功能的影响

目的探讨白细胞介素-38(IL-38)在乳腺癌患者中的表达及其对CD8^(+)T细胞功能的调控作用。方法纳入2020年7月—2022年9月在新乡医学院第一附属医院就诊的44例乳腺癌患者、25例乳腺良性肿瘤患者和20例对照者。分离所有受试者的血浆和外周血单个核细胞,分离乳腺癌患者肿瘤组织中的肿瘤浸润淋巴细胞,纯化CD8^(+)T细胞。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-38蛋白水平,应用实时定量PCR检测组织IL-38 mRNA相对表达量。使用重组人IL-38刺激乳腺癌患者外周血和肿瘤组织分离的CD8^(+)T细胞,建立CD8^(+)T细胞与乳腺癌细胞系MCF-7的共培养系统,通过测定乳酸脱氢酶水平计算靶细胞死亡比例,ELISA法检测培养上清中穿孔素、颗粒酶B、干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,流式细胞术检测CD8^(+)T细胞的免疫检查点分子表达。结果乳腺癌患者血浆IL-38水平(74.23±19.88 pg/mL)高于乳腺良性肿瘤患者(62.87±16.27 pg/mL,P=0.018)和对照者(61.77±12.75 pg/mL,P=0.013)。乳腺癌患者肿瘤组织中IL-38 mRNA相对表达量显著高于癌旁组织(1.57±0.22 vs.1.00±0.18,P<0.001)。外周血和肿瘤浸润CD8^(+)T细胞诱导靶细胞死亡比例、穿孔素和颗粒酶B分泌在直接接触共培养组中的水平高于间接接触共培养组(P<0.05),但干扰素-γ和TNF-α分泌水平在直接接触共培养组和间接接触共培养组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。在直接接触共培养组内,靶细胞死亡比例、穿孔素、颗粒酶B、干扰素-γ、TNF-α在IL-38刺激组中的水平低于无刺激组(P<0.05)。在间接接触共培养组内,靶细胞死亡比例、干扰素-γ、TNF-α在IL-38刺激组中的水平亦低于无刺激组(P<0.05),但穿孔素和颗粒酶B水平在间接接触共培养组内的IL-38刺激组和无刺激组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。CD8^(+)T细胞中免疫检查点分子表达水平在无刺激组和IL-38刺激组之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌患者中高表达的IL-38可能参与诱导CD8^(+)T细胞功能衰竭。

髓母细胞瘤分子亚型中CD8+T淋巴细胞浸润的临床病理特点

目的:研究CD8+T细胞在髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)各个分子亚型中的浸润特点,分析CD8+T细胞浸润与患者预后的关系,以及C-X-C基序趋化因子11(C-X-C motif chemokine ligand 11)的表达及其受体CXCR3在CD8+T细胞中的表达情况,为进一步探索MB中CD8+T细胞浸润可能的调节机制提供临床病理依据。方法:筛选2012—2019年间来自多所医学中心、具有完整临床资料的MB患者共48例(4个分子亚型各12例),利用NanoString PanCancer IO360 TM基因表达检测平台对48例MB患者的肿瘤标本进行转录组学分析,对患者肿瘤组织的石蜡切片进行CD8免疫组织化学染色分析,验证各亚型MB中CD8+T细胞数量的差异。通过数据库生物信息学分析,探讨CD8+T细胞浸润与患者预后的关系及各种趋化因子在各亚型MB中的表达差异,并采用双重免疫荧光染色验证MB中CD8+T细胞表面CXCR3受体的表达情况,探讨CD8+T细胞浸润至肿瘤内的可能分子机制。结果:MB的WNT亚型中的CD8+T细胞特征指数相对较高,提示WNT亚型中的CD8+T细胞数量显著高于其他三个亚型,这一现象通过CD8免疫组织化学染色方法以及R2在线数据分析平台对美国基因表达数据库Gene Expression Omnibus(GEO)进行数据挖掘得到了证实,且CD8+T细胞增多与患者的生存期呈正相关。数据库分析显示,CXCL11在WNT亚型MB中的表达量明显高于其他三个亚型。免疫荧光染色结果显示,CD8+T细胞表面存在CXCL11的受体CXCR3,提示CD8+T细胞可能通过表面受体CXCR3受CXCL11趋化至MB的微环境中。结论:CD8+T细胞在WNT亚型MB中的浸润相对多于其他亚型,其机制可能与CXCL11-CXCR3趋化因子系统的激活相关,且肿瘤内CD8+T细胞浸润较多的患者预后较好,此结果可能为MB中CD8+T细胞浸润调节机制提供有益的临床病理依据,为未来MB的免疫治疗提供新的潜在治疗靶点。

CD8+T淋巴细胞在非酒精性脂肪性肝炎中的作用

非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是一种与代谢综合征密切相关的肝脏疾病,其发病机制包括胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱、炎症反应等方面。本文简述了CD8+T淋巴细胞通过Fas-Fas配体(FasL)信号通路、释放穿孔素和颗粒酶以及分泌肿瘤坏死因子(TNF)α等细胞因子三种途径发挥细胞毒性作用特异性杀伤病毒及肿瘤靶细胞参与免疫调节;同时总结了CD8+T淋巴细胞促进巨噬细胞招募且与自然杀伤T淋巴细胞协同参与脂肪组织炎症发展,并通过自身攻击及表观遗传学机制导致肝损伤,促进NASH发病。由此得知CD8+T淋巴细胞可能成为NASH新的治疗靶点,未来继续深入研究CD8+T淋巴细胞在NASH中影响发病进程的具体机制有利于进一步指导临床治疗。

CD_(4)^(+)与CD_(8)^(+)T淋巴细胞在骨关节炎中作用的研究进展

骨关节炎是一种慢性、进行性、破坏性的关节炎性病变,常累及软骨及周围组织,最终可导致关节衰竭并伴有疼痛和残疾。许多证据表明免疫机制贯穿骨关节炎的发生发展,目前研究发现,CD_(4)^(+)、CD_(8)^(+)T淋巴细胞介导的细胞免疫通过细胞分化、组织浸润、免疫亚群失衡以及释放不同的细胞因子,激活相关细胞通路,造成滑膜炎症、软骨丢失、降解、内稳态失衡以及软骨下骨重建等。现就CD_(4)^(+)、CD_(8)^(+)T淋巴细胞在骨关节炎中作用的研究进展进行总结。

人类免疫缺陷病毒1感染者外周血CD_8^+ T淋巴细胞表面CD_(38)和人类白细胞抗原DR表达的研究

目的探索人类免疫缺陷病毒(HIV)-1感染者外周血CD_8^+T淋巴细胞表面CD_(38)(CD_(38)^+/CD_8^+)、人类白细胞抗原DR(HLA-DR)(HLA-DR^+/CD_8^+)表达水平的变化及其与疾病进展的关系。方法选取2012年5-8月河南省淮阳县中医院、西平县中医院、驻马店驿城区中医院、泌阳县中医院、博爱县中医院收治的经河南省疾病预防控制中心确诊的HIV-1感染者409例为HIV-1感染组,河南中医学院第一附属医院体检健康者28例为对照组。采用流式细胞仪检测外周血CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞计数和百分比,计算CD_4^+/CD_8^+,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测血浆病毒载量,应用全血染色、流式细胞术检测HIV-1感染者CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+。根据CD_4^+T淋巴细胞计数分为4组:<200 cells/μl组87例、200~<350 cells/μl组119例、350~<500 cells/μl组99例、≥500 cells/μl组104例,比较不同CD_4^+T淋巴细胞计数者间CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+。结果 HIV-1感染组CD_4^+T淋巴细胞计数、百分比低于对照组,CD_8^+T淋巴细胞计数、百分比高于对照组(P<0.001);HIV-1感染组CD_4^+/CD_8^+低于对照组(P<0.001)。HIV-1感染者血浆病毒载量为(38 415±1 067)copies/ml。Pearson相关分析表明,HIV-1感染者CD_4^+T淋巴细胞计数与血浆病毒载量呈负相关(r=-0.246,P<0.001);CD_(38)^+/CD_8^+与CD_4^+T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.260,P<0.001);CD_(38)^+/CD_8^+与血浆病毒载量呈正相关(r=0.409,P<0.001);HLA-DR^+/CD_8^+与CD_4^+T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.225,P<0.001);HLA-DR^+/CD_8^+与血浆病毒载量呈正相关(r=0.378,P<0.001)。200~<350 cells/μl组、350~<500 cells/μl组、≥500 cells/μl组CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+低于<200 cells/μl组(P<0.05)。结论 HIV-1感染者CD_4^+T淋巴细胞计数、百分比降低,CD_8^+T淋巴细胞计数、百分比升高,CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+与血浆病毒载量呈正相关。CD_4^+T淋巴细胞计数、CD_8^+T淋巴细胞计数结合CD_8^+T淋巴细胞的活化水平可以更全面地反映HIV-1感染者免疫功能受损的程度,HIV-1感染后CD_(38)^+/CD_8^+、HLA-DR^+/CD_8^+的变化可作为评价疾病进展的新指标。

健康汉族人外周血CD4^+CD8^+双阳性和CD4^-CD8^-双阴性T淋巴细胞的分布

目的:观察健康汉族人外周血中CD4+CD8+双阳性(double positive,DP)T细胞和CD4-CD8-双阴性(double negative,DN)T细胞的分布频率。方法:利用三色流式细胞术分析36例健康成人(<65岁)、34例健康老年人(≥65岁)和22例免疫抑制者外周血DP T细胞和DN T细胞的分布。结果:老年组外周血DP T细胞比例1.93%±1.52%显著高于免疫抑制组1.23%±0.81%(P=0.05);但与成人组1.54%±1.24%相比,老年组外周血DP T细胞比例虽然有增高的趋势但未见显著差异。老年组、成人组和免疫抑制组外周血DP T细胞绝对计数分别为(0.028±0.022)×109细胞/L、(0.024±0.017)×109细胞/L和(0.021±0.019)×109细胞/L,三组间差异无显著性。成人组外周血DN T细胞比例为8.81%±5.56%,明显高于老年组的5.52%±3.49%和免疫抑制组的3.72%±1.21%(P值分别为0.012和0.000);老年组DNT细胞比例也高于免疫抑制组(P=0.025)。老年组、成人组和免疫抑制组外周血DN T细胞绝对计数分别为(0.083±0.069)×109细胞/L、(0.150±0.111)×109细胞/L和(0.057±0.027)×109细胞/L,成人组外周血DN T细胞的绝对数明显高于老年组(P=0.011)及免疫抑制组(P=0.000),而免疫抑制组与老年人比较则未见显著差异(P=0.155)。成人组外周血更常出现CD3分子表达增高(CD3high)的T细胞。与CD3分子表达正常(CD3norm)的T细胞相比,CD3highT细胞群体中包含大量DN T细胞。结论:年龄≥65岁的健康汉族老年人外周血DP T细胞未见明显增多,但外周血DN T细胞随着年龄增高而明显减低。

浙江省丽水市强直性脊柱炎患者外周血CD_4^+T淋巴细胞和CD_8^+T淋巴细胞程序性死亡因子1的表达及意义研究

目的检测浙江省丽水市强直性脊柱炎(AS)患者外周血CD_4^+T淋巴细胞、CD_8^+T淋巴细胞程序性死亡因子1(PD-1)阳性率,分析其与疾病活动性临床指标的关系,初步探讨其在AS发生发展中的作用。方法收集2013年12月—2014年4月浙江省丽水市中心医院收治的AS患者35例,根据Bath强直性脊柱炎活动指数(BASDAI)分为活动组(BASDAI>4)21例和稳定组(BASDAI≤4)14例,另选取同时期本院体检健康者20例为对照组。应用流式细胞术检测外周血CD_4^+T淋巴细胞、CD_8^+T淋巴细胞PD-1阳性率,分析AS患者外周血CD_4^+T淋巴细胞、CD_8^+T淋巴细胞PD-1阳性率与疾病活动性临床指标的相关性。结果活动组CD_4^+T淋巴细胞PD-1阳性率高于对照组和稳定组(P<0.05);稳定组和活动组CD_8^+T淋巴细胞PD-1阳性率高于对照组(P<0.05)。AS患者外周血CD_4^+T淋巴细胞PD-1阳性率与CD_4^+T淋巴细胞百分比、CD_4^+/CD_8^+呈负相关(P<0.05),与CD_8^+T淋巴细胞百分比、BASDAI、红细胞沉降率(ESR)呈正相关(P<0.05),与C反应蛋白(CRP)无直线相关关系(P>0.05)。AS患者外周血CD_8^+T淋巴细胞PD-1阳性率与CD_4^+T淋巴细胞百分比、CD_8^+T淋巴细胞百分比、CD_4^+/CD_8^+、BASDAI、ESR、CRP无直线相关关系(P>0.05)。结论浙江省丽水市AS患者外周血CD_4^+T淋巴细胞、CD_8^+T淋巴细胞PD-1表达增加,CD_4^+T淋巴细胞PD-1阳性率在AS活动期明显增加,与疾病的炎性反应指标相关,可能在AS的免疫病理中起重要作用。

CD_8T淋巴细胞在大鼠缺血再灌注脑组织中表达的变化

目的观察大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)脑缺血模型再灌注不同时间点的脑组织中CD8T淋巴细胞表达的动态变化,探讨CD8T淋巴细胞与缺血性脑损伤的关系。方法选择成年雄性SD大鼠35只,随机分为假手术组,缺血再灌注24h、3d、5d、7d、10d和14d组,每组5只。采用Zea-Longa线栓法制作大鼠MCAO脑缺血模型,HE染色显示脑缺血再灌注组织病理学形态,SP法免疫组织化学染色显示CD8分子表达的变化,光镜下计数CD8T淋巴细胞数。结果再灌注7d和10d组,脑组织大量神经元细胞质、胞核界限模糊、核固缩溶解,细胞间出现大小不等的空泡。CD8T淋巴细胞于再灌注24h组即开始表达,再灌注7、10d组达到高峰,随后下降。再灌注各时间点组CD8T淋巴细胞数显著高于假手术组(P<0.01)。CD8T淋巴细胞大量表达于缺血再灌注脑组织,且主要分布于脑梗死边缘区。结论 CD8T淋巴细胞参与了脑缺血再灌注损伤。

RA患者外周血检出大量CD4^+CD8^+双阳性T淋巴细胞1例

类风湿性关节炎（RA ）是一种病因未明的慢性全身性炎症性疾病，临床表现特点主要为慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变，属于自身免疫炎性疾病［1］。研究认为，R A 的发生发展与细胞免疫功能紊乱、T 细胞异常活化和 T 细胞亚群的失衡等因素有关［2-3］。研究者在对1例R A患者外周血进行T淋巴细胞亚群分析时发现该患者血液中出现大量的CD4＋CD8＋双阳性（DP）T淋巴细胞，现报道如下。

CD_8^+T淋巴细胞毒性改变在急性脑梗死后肺炎发病中的作用

目的探讨CD_8^+T淋巴细胞毒性改变在急性脑梗死后肺炎发病中的作用,分析急性脑梗死后肺炎的危险因素。方法收集200例急性脑梗死病人的临床资料,并依据是否感染肺炎将其分为肺炎组和非肺炎组。先从单因素方面进行分析,筛选出可能导致急性脑梗死后并发肺炎的有关危险因素,然后进行多因素非条件Logistic回归模型的拟合,对相关的混杂因子进行适度调整,最终揭示参与急性脑梗死后并发肺炎的独立危险因素。结果单因素分析显示:年龄、性别、糖尿病、慢性呼吸系统疾病、贫血、基线空腹血糖、侵入性检查和治疗、质子泵受体阻滞剂、早期康复治疗、意识状况、神经功能缺损程度、日常生活能力、残障程度、吞咽功能与急性脑梗死后并发肺炎显著相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,CD_8^+T淋巴细胞毒性改变、年龄、性别、糖尿病、慢性呼吸系统疾病、贫血、基线空腹血糖、侵入性检查和治疗、质子泵受体阻滞剂、意识状况、神经功能缺损程度、日常生活能力、残障程度、吞咽功能是急性脑梗死后肺炎发生的独立危险因素(P<0.05),而早期康复治疗是急性脑梗死后并发肺炎的一种保护因素。结论 CD_8^+T淋巴细胞毒性改变、年龄、性别、糖尿病、慢性呼吸系统疾病、贫血、基线空腹血糖、侵入性检查和治疗、质子泵受体阻滞剂、意识状况、神经功能缺损程度、残障程度、吞咽功能是急性脑梗死后肺炎发生的独立危险因素。

外周血CD8^(+)T淋巴细胞亚群检测对过敏性鼻炎临床疗效的评估价值

目的探讨外周血CD8^(+)T淋巴细胞亚群检测对过敏性鼻炎(AR)临床疗效的评估价值。方法前瞻性选取2021年3月~2022年2月温州市中西医结合医院耳鼻咽喉科门诊治疗的120例AR患者和40例健康志愿者,分别设为研究组和对照组,比较两组外周血CD8^(+)T细胞、CD8^(+)CD28^(+)T细胞、CD8^(+)CD28-T细胞比率;研究组接受鼻用激素联合口服抗组胺药物治疗方案,根据治疗效果分为有效组(n=107)和无效组(n=13),比较有效组和无效组治疗前CD8^(+)T细胞、CD8^(+)CD28^(+)T细胞、CD8^(+)CD28-T细胞比率;Pearson相关性分析法分析外周血CD8^(+)T淋巴细胞亚群水平与鼻部症状总评分(totalnose symptomscore,TNSS)的相关性;以受试者工作特征(ROC)曲线分析治疗前CD8^(+)T淋巴细胞亚群对AR临床疗效的预测价值。结果研究组治疗前外周血CD8^(+)CD28^(+)T细胞比率高于对照组,CD8^(+)CD28-T细胞比率低于对照组(P<0.05)。研究组总有效率为89.17%;有效组治疗前CD8^(+)CD28^(+)T细胞比率低于无效组,CD8^(+)CD28-T细胞比率高于无效组(P<0.05);Pearson相关性分析显示,CD8^(+)CD28^(+)T细胞比率与TNSS评分呈正相关(r=0.324,P=0.006),CD8^(+)CD28-T细胞比率与TNSS评分呈负相关(r=-0.541,P=0.000)。ROC曲线结果显示,CD8^(+)T细胞、CD8^(+)CD28^(+)T细胞、CD8^(+)CD28-T细胞比率评估AR治疗无效的曲线下面积(AUC)(95%CI)分别为0.647(0.555~0.732)、0.683(0.592~0.765)、0.911(0.845~0.955),其中CD8^(+)CD28-T细胞的评估效能优于CD8^(+)T细胞、CD8^(+)CD28^(+)T细胞比率(P<0.05)。结论AR患者外周血CD8^(+)CD28^(+)T细胞比率升高,CD8^(+)CD28-T细胞比率降低,CD8^(+)T细胞比率相对稳定,治疗前CD8^(+)CD28-T细胞比率可作为预测AR患者的临床疗效的参考指标。

CD4^(+)和CD8^(+)T细胞在结核病免疫应答中的作用

结核分枝杆菌是世界范围内单一感染源致死亡的主要原因,并且已有大量人群被感染后处于长期潜伏感染状态。机体清除结核分枝杆菌主要依赖于特异性免疫应答,其中T淋巴细胞作为参与机体细胞免疫的主要细胞,其增殖和活化在机体特异性免疫应答中发挥着至关重要的作用。笔者分析了结核分枝杆菌感染机体后,T淋巴细胞亚群中的CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞在结核分枝杆菌感染免疫应答中的作用,并且对机体抗结核分枝杆菌感染免疫应答的机制进行总结,为进一步深入探索适应性免疫的抗结核感染网络、结核病的诊断及临床研制新型疫苗提供借鉴。

胃癌组织细胞程序性死亡配体1表达情况和CD_(8)^(+)肿瘤浸润T淋巴细胞密度及其与患者临床病理特征和预后的关系研究

背景目前,胃癌组织细胞程序性死亡配体1(PD-L1)表达情况和CD_(8)^(+)肿瘤浸润T淋巴细胞(TILs)密度是否可作为胃癌患者预后的评估指标尚不明确。目的分析胃癌组织PD-L1表达情况、CD_(8)^(+)TILs密度及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择2016年1月至2018年3月在南阳市第一人民医院行手术治疗的胃癌患者125例,采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应检测其胃癌组织PD-L1 mRNA相对表达量,采用免疫组化方法检测其胃癌组织CD_(8)^(+)TILs密度。分析胃癌组织PD-L1 mRNA相对表达量、CD_(8)^(+)TILs密度与患者临床病理特征的关系;胃癌组织PD-L1 mRNA相对表达量与CD_(8)^(+)TILs密度的相关性分析采用Pearson相关分析;通过电话随访至术后36个月,以患者死亡或失访为终点事件,绘制Kaplan-Meier曲线以进行生存分析;胃癌患者预后的影响因素分析采用单因素和多因素Cox回归分析。结果所有患者胃癌组织平均PD-L1 mRNA相对表达量为3.1,癌巢内平均CD_(8)^(+)TILs数量为36个,最终归为低水平组73例(PD-L1 mRNA相对表达量<3.1)和高水平组52例(PD-L1 mRNA相对表达量≥3.1),低密度组55例(CD_(8)^(+)TILs数量<36个)和高密度组70例(CD_(8)^(+)TILs≥36个)。低水平组与高水平组患者淋巴结转移、脉管侵犯、腹膜转移情况比较,差异有统计学意义(P<0.05);低密度组与高密度组患者浸润深度、淋巴结转移、脉管侵犯、腹膜转移情况比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,胃癌组织PD-L1 mRNA相对表达量与CD_(8)^(+)TILs密度呈负相关(r=-0.412,P<0.001)。中位随访时间为36.0个月,125例患者中预后不良37例,预后良好88例;低水平组与高水平组、低密度组与高密度组患者Kaplan-Meier曲线比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,高水平PD-L1 mRNA〔HR=3.021,95%CI(1.632,5.045)〕、低密度CD_(8)^(+)TILs〔HR=2.158,95%CI(1.854,4.632)〕为胃癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论高水平PD-L1 mRNA、低密度CD_(8)^(+)TILs均是胃癌患者预后不良的独立危险因素,有望成为胃癌患者预后不良的生物标志物。

Notch信号通路对慢性丙型肝炎患者CD8^+T淋巴细胞功能的影响

目的观察Notch信号通路对慢性丙型肝炎患者CD8^+T淋巴细胞功能的影响,初步阐释Notch信号通路在慢性丙型肝炎发病中的作用。方法收集2016年1月-8月在陕西省人民医院就诊的慢性丙型肝炎初治患者38例和健康志愿者17例,分选CD8^+T淋巴细胞,应用实时定量PCR法检测CD8^+T淋巴细胞中Notch1和Notch2 mRNA的表达水平。分别应用直接接触培养系统和间接接触培养系统将从HLA-A2限制性丙型肝炎患者分选的CD8^+T淋巴细胞与HCV感染的Huh7.5细胞共培养,加入Notch信号通路抑制剂DAPT,通过检测乳酸脱氢酶和细胞因子水平分析CD8^+T淋巴细胞的细胞毒性和非细胞毒性功能的变化。2组间计量资料的比较采用t检验。结果 Notch1和Notch2 mRNA在慢性丙型肝炎患者CD8^+T淋巴细胞中的表达水平较健康志愿者均显著升高,分别升高约10倍和4倍,差异均有统计学意义(t值分别为6.63、18.88,P值分别为0.003、<0.001)。抑制Notch信号通路可增加直接接触培养系统中细胞死亡的比例[(26.41±4.76)%vs(13.65±4.65)%,t=3.32,P=0.029];但抑制Notch信号通路对间接接触培养细胞中CD8^+T淋巴细胞毒性无明显影响。抑制Notch信号通路后,IFNγ的表达在直接接触培养系统[(52.19±12.38)pg/ml vs(18.62±5.66)pg/ml,t=4.27,P=0.013]和间接接触培养系统[(18.86±3.09)pg/ml vs(5.52±2.52)pg/ml,t=5.79,P=0.004]中均显著升高。TNFα的表达在抑制Notch信号通路后仅在直接接触培养系统中显著升高[(1296.0±293.3)pg/ml vs(585.3±32.62)pg/ml,t=4.17,P=0.014],而在间接接触培养系统中无明显变化[(297.3±175.4)pg/ml vs(273.7±105.9)pg/ml,t=0.20,P=0.851]。结论抑制Notch信号通路可增强慢性丙型肝炎患者中CD8^+T淋巴细胞的细胞杀伤和非细胞杀伤功能,Notch信号通路在慢性HCV感染中可能通过抑制CD8^+T淋巴细胞功能发挥诱导免疫耐受的作用。

不同病程阶段慢性乙型肝炎患者外周血CD_(8)^(+)CD_(28)^(+)T淋巴细胞变化及意义

目的探讨不同病程阶段慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD_(8)^(+)CD_(28)^(+)T淋巴细胞变化及意义。方法选取文山壮族苗族自治州人民医院2019年3月—2020年2月收治的CHB患者80例为探究对象,依据患者不同病程阶段分为免疫耐受期(A组)、免疫清除期(B组)、非活动期(C组)与再活动期(D组),每组各20例。另外选取本院同期体检健康者20例作为参照组。采取流式细胞术对上述受试者CD_(8)^(+)CD_(28)^(+)T淋巴细胞水平进行检测。比较5组受试者CD_(8)^(+)CD_(28)^(+)T淋巴细胞水平。结果 B组CD_(8)^(+)CD_(28)^(+)T淋巴细胞水平高于A、C、D组、参照组,差异有统计学意义(P<0.05)。C、D组CD_(8)^(+)CD_(28)^(+)T淋巴细胞水平低于参照组,差异有统计学意义(P<0.05)。A组与参照组CD_(8)^(+)CD_(28)^(+)T淋巴细胞水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论不同病程阶段的CHB患者CD_(8)^(+)CD_(28)^(+)T淋巴细胞水平存在明显差异,因此免疫系统功能失调可能参与了该病发生发展的全过程。

共刺激分子CD28、CD137在喉癌患者T淋巴细胞中的表达及其与细胞免疫功能失调的关系

目的探讨共刺激分子CD28、CD137与喉癌患者细胞免疫功能状况的关系。方法应用梯度离心法分离并纯化外周血和肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL),流式细胞术检测喉癌患者外周血T细胞CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD28+细胞亚群分布和双香豆素(phytohemagglutinin,PHA)刺激前后患者外周血T细胞及TIL中CD137的表达。结果喉癌患者CD8+T细胞比率为(32.11±5.07)%,CD8+CD28-T细胞比率为(21.03±5.69)%,均明显高于正常对照组(均P<0.01);CD28+T细胞比率为(45.53±4.51)%,CD8+CD28+T细胞比率为(12.70±3.41)%,均明显低于正常对照组(P均<0.01)。CD137+T细胞活化增殖能力与CD28的阳性表达呈明显的正相关,喉癌患者外周血T细胞和TIL在未受PHA刺激时CD137+T细胞比率分别为(1.90±0.71)%和(3.52±1.64)%,明显高于正常对照组(P均<0.01)。但经PHA刺激48小时后,外周血和TIL中CD137+-48h/CD137+-0h值为分11.48±4.03和10.39±3.02,均明显低于正常对照组,P均<0.01。结论共刺激分子CD28在CD8+T细胞亚群中的表达失调使免疫效应性CD137+T细胞活化增殖能力下降,是引起喉癌患者细胞免疫功能紊乱的重要原因之一。

记忆型CD8阳性T淋巴细胞快速发挥效应功能需要早期代谢过程向糖酵解转变

接触过抗原的记忆型T细胞通过固有的动力学获得效应功能；但是，这些细胞的代谢需求并不清楚。本文作者发现效应性记忆型（effector memory，EM）T细胞能够快速产生IFN—gamma，是通过T细胞抗原受体（T cell antigen receptor，TCR）和共刺激分子CD28的激活，或者是类似的作用方式，而这种激活过程与糖酵解的增加相关。

白细胞介素33在肝细胞癌患者中的表达及其对CD8^(+)T淋巴细胞功能的调节作用

目的观察肝细胞癌(HCC)患者外周血白细胞介素33(IL-33)的变化,探讨IL-33对HCC患者CD8^(+)T淋巴细胞的调节作用和可能机制。方法选择2019年4月—2020年1月陕西省人民医院收治的44例HCC患者和20例健康对照者为研究对象。采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC),酶联免疫吸附试验检测血浆IL-33及其受体肿瘤抑制素2(ST2)的水平,实时定量PCR法检测PBMC中IL-33和ST2 mRNA相对表达量。纯化CD8^(+)T淋巴细胞,使用重组IL-33刺激培养,CCK-8法检测细胞增殖,酶联斑点吸附试验检测穿孔素和颗粒酶B分泌,流式细胞术检测程序性死亡受体-1(PD-1)、淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)表达,比较IL-33刺激前后细胞增殖、毒性分子分泌、免疫检查点分子的变化。CD8^(+)T淋巴细胞与HepG2细胞共培养,通过检测乳酸脱氢酶表达计算CD8^(+)T淋巴细胞诱导HepG2细胞死亡比例,比较IL-33刺激前后CD8^(+)T淋巴细胞杀伤功能的变化。计量资料两组间比较采用t检验或配对t检验,相关性分析采用Pearson分析法。结果HCC组血浆IL-33水平低于对照组[(269.80±63.08)pg/mL vs(339.50±64.43)pg/mL,t=4.072,P<0.001],HCC组PBMC中IL-33 mRNA相对表达量低于对照组(1.07±0.14 vs 2.45±0.87,t=10.250,P<0.001)。血浆ST2水平和PBMC中ST2 mRNA相对表达量在HCC组和对照组之间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。CD8^(+)T淋巴细胞比例与血浆IL-33、ST2水平均无明显相关性(P值均>0.05)。HCC组CD8^(+)T淋巴细胞分泌穿孔素、颗粒酶B的水平均低于对照组(P值均<0.05),而HCC组CD8^(+)T淋巴细胞中PD-1、LAG-3、CTLA-4阳性细胞比例均高于对照组(P值均<0.05)。重组IL-33刺激对两组CD8^(+)T淋巴细胞增殖和免疫检查点分子表达均无显著影响(P值均>0.05),但可促进穿孔素、颗粒酶B的分泌(P值均<0.05)。HCC组CD8^(+)T淋巴细胞杀伤活性较对照组降低(P<0.05),重组IL-33刺激可提升CD8^(+)T淋巴细胞杀伤功能,主要表现为诱导HepG2细胞死亡比例升高(P<0.05),IFNγ和TNFα分泌水平增加(P值均<0.05)。结论HCC患者血浆IL-33水平降低。IL-33可通过促进穿孔素和颗粒酶B的分泌增强HCC患者CD8^(+)T淋巴细胞杀伤活性,为HCC治疗提供新的靶点。

罗伊氏乳杆菌诱导肠道上皮内CD4^+CD8α α^+双阳性T淋巴细胞产生

小肠组织包含CD4^+CD8αα^+双阳性上皮内T淋巴细胞(DP IELs),它们来源于低表达转录因子Th POK的肠道CD4^+T细胞并且具有调节功能。在无菌小鼠中缺乏DP IELs,提示它们的分化依赖于微生物。本研究发现,不同环境下的小鼠DP IELs数量不同,且与罗伊氏乳杆菌的存在有相关性。罗伊氏乳杆菌诱导无菌小鼠DP IELs的产生,而正常饲养小鼠缺乏DP IELs。罗伊氏乳杆菌没有改变DP-IEL-TCR的作用模式,但是产生内源性色氨酸激活CD4^+T细胞的芳烃受体,导致Th POK下调,进而分化成DP IELs。因此,罗伊氏乳杆菌配合色氨酸丰富的日粮,能够将肠道上皮内CD4^+T细胞重塑为免疫调节性T细胞。

扶正化瘀方通过改变急性肝损伤小鼠模型肝脏CD8^(+)T淋巴细胞表型功能预防肝纤维化的价值分析

目的观察应用扶正化瘀方后急性肝损伤小鼠模型肝脏CD8^(+)T淋巴细胞对共培养的肝星状细胞的影响,探讨扶正化瘀方预防肝纤维化的作用机制。方法18只SPF级雄性C57BL/6NCrl Vr小鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀方组,每组6只。扶正化瘀方组提前给予扶正化瘀方灌胃5 d。实验前12 h以2 mL/kg体质量的剂量腹腔注射10%的CCl_(4),腹主静脉取血,留取血清并检测ALT、AST,留取部分肝脏做病理观察;应用流式细胞术分选小鼠肝脏CD8^(+)T淋巴细胞,预先小鼠体内用药,再与小鼠肝星状细胞株(JS 1)以2∶1比例共培养于96孔板中24 h、48 h,使用qPCR方法检测各组Col.ⅠmRNA和α-SMA mRNA表达变化。符合正态分布的计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用SNK-q或LSD-t检验。结果模型组的ALT和AST水平均显著高于正常组(P值均<0.0001)。扶正化瘀方组小鼠的ALT升高的幅度明显小于模型组(P<0.001)。HE染色显示,扶正化瘀方组小鼠肝细胞变性、坏死程度较模型组有所减轻。与正常组比较,模型组总淋巴细胞、CD45、CD4-CD8^(+)T、CD8^(+)CD28-T显著上升,而扶正化瘀方组与模型组相比较,上述淋巴细胞比例显著降低(P值均<0.001)。自各组小鼠肝脏分离的CD8^(+)T淋巴细胞与JS 1共培养48 h,模型组与对照组(JS 1单培养)和正常组相比α-SMA mRNA的表达明显增加(P值均<0.01);Col.ⅠmRNA表达也明显高于对照组和正常组(正常小鼠肝脏CD8^(+)T淋巴细胞与JS 1共培养)(P值均<0.001)。扶正化瘀方组α-SMA mRNA和Col.ⅠmRNA表达显著低于模型组(P值均<0.01)。结论扶正化瘀方能通过改变小鼠肝脏CD8^(+)T淋巴细胞功能表型间接抑制活化的肝星状细胞。