CD_3AK细胞对肝癌患者细胞免疫功能影响

本文采用抗ＣＤ３单克隆抗体激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ）对３８例原发性肝癌患者进行治疗，并对该患者治疗前后的Ｔ细胞亚群进行测定。观察ＣＤ３ＡＫ细胞对肝癌的疗效以及对该患者细胞免疫功能影响。结果显示：肝癌患者治疗后ＣＤ３、ＣＤ４和ＣＤ８均比治疗前有不同程度的增高，ＣＤ３和ＣＤ４均有统计学意义。提示ＣＤ３ＡＫ细胞能增强肝癌患者细胞免疫功能。

淫羊藿甙逆转转化生长因子β_2对LAK、CD_3AK细胞的免疫抑制作用

探讨淫羊藿甙逆转转化生长因子 β2 (TransformingGrowthFactorβ2 ,TGFβ2 )对LAK、CD3AK细胞的免疫抑制作用及其机制。方法 :采用MTT法 ,RT PCR和流式细胞术。结果 :淫羊藿甙能逆转受TGFβ2 抑制的LAK和CD3AK细胞的杀伤活性 ,并能部分恢复受TGFβ2 抑制的LAK细胞表面IL 2Rα表达和CD3AK细胞内穿孔素mRNA水平 ,以及CD3AK细胞的增殖活性。结论 :淫羊藿甙通过恢复LAK细胞IL 2Rα表达 ,提高CD3AK细胞内穿孔素mRNA水平及促进CD3AK增殖 ,逆转TGFβ2 对LAK、CD3AK的免疫抑制作用。

CD_3AK细胞与LAK细胞的比较

抗ＣＤ３单抗和ｒＩＬ－２共刺激法诱生扩增的ＣＤ３ＡＫ与用等量ｒＩＬ－２诱生扩增的ＬＡＫ间有明显差异：１）扩增倍数和细胞毒活性强度及其动态学不同：在诱生初期，ＣＤ３ＡＫ细胞数下降，细胞扩增倍数低于ＬＡＫ（０．８３对１．７，Ｐ＜０．０１）；对Ｋ５６２的细胞毒活性低于ＬＡＫ（３８％对４３．９％，Ｐ＞０．０５），诱生８天后ＣＤ３ＡＫ的扩增倍数和细胞毒活性都上升并超过ＬＡＫ（５．１３对１．４，Ｐ＜０．０１；４９．４％对２６％，Ｐ＜０．０５）。２）细胞表型不同：ＣＤ３ＡＫ中Ｔ细胞较多，ＬＡＫ细胞中ＮＫ表型细胞百分率高。

CD_3AK细胞治疗中晚期肝癌的初步观察

目的：观察中晚期肝细胞癌（HCC）患者采用抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞（CD3AK细胞）治疗的效果。方法：140例中晚期HCC患者分为3组：A组51例（CD3AK细胞加化疗）；B组45例（单纯化疗）；C组44例（单纯CD3AK细胞治疗）。治疗前后分别作肝脏B超或（和）CT检查，并检测外周血T细胞亚群和血清可溶性白细胞介素2受体（sIL－2R）水平。结果：①A、B、C组的部分缓解率分别为45．1％、17．7％和20．5％。A、B组比较有显著性差异（P＜0．01）；②免疫指标：经CD2AK细胞治疗的HCC患者的CD3、CD4水平和CD4／CD8比值均有不同程度升高，sIL－2R水平显著下降。结论；CD3AK细胞治疗中晚期HCC安全可靠、有效、无明显副反应，并有提高HCC患者免疫功能的作用。

CD_3AK细胞介导细胞因子抗肿瘤作用机制的研究

目的 :探讨 CD3AK细胞介导细胞因子抗肿瘤作用的机制。方法 :将卵巢癌细胞株 (A2 780 )分成两组 ,实验组采用 CD3AK+ A2 780 ,对照组采用 L AK+ A2 780 ,分别共育 2 4h并于作用前和作用后每 4h收集一次上清液以检测 TNF- α和 IFN- γ分泌水平。结果 :实验组和对照组共育前、后上清液中均有 TNF- α和 IFN- γ分泌 ,但共育后 TNF- α和 IFN- γ分泌水平显著高于共育前 (P <0 .0 1) ,且同一效靶比的实验组 TNF- α和 IFN- γ分泌水平明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :CD3AK细胞可通过分泌细胞因子 TNF- α和 IFN- γ杀伤肿瘤细胞。

CD_3AK细胞治疗癌性腹水的疗效观察

采用ＣＤ３ＡＫ细胞和小量ｒⅠＬ－２联合腹腔内注射，治疗２４例癌性腹水患者。结果表明ＣＤ３ＡＫ细胞的临床应用安全可行，病人在治疗期间一般状况改善，生存质量提高，其中１６例患者腹水完全消失，８例腹水明显减少，连续观察３个月腹水未见进一步增加，未出现任何毒副反应。提示：ＣＤ３ＡＫ细胞与小量ｒⅠＬ－２腹腔内联合应用治疗癌性腹水安全有效，可延长患者生存期，提高生存质量。

CD_3AK细胞诱导肿瘤细胞凋亡的形态学研究

目的 :在光学显微镜和电子显微镜下观察 CD3AK诱导肿瘤细胞凋亡的形态学变化。方法 :将 CD3AK细胞与人卵巢癌细胞株 A2 780 共育 2 4h,然后分别涂片和制成超薄切片观察肿瘤细胞形态学变化特点。结果 :在光镜下 ,可见 CD3AK细胞聚积于靶细胞周围 ,并粘附于靶细胞膜上 ,可见肿瘤细胞核固缩 ,细胞体积变小 ,细胞质均质红染 ;电镜下 ,可见凋亡的肿瘤细胞表面微绒毛消失 ,染色质沿皱缩的核膜下聚积成新月状 ,细胞质起泡等典型的形态学改变。结论 :CD3AK细胞可诱导肿瘤细胞凋亡。

脐血CD_3AK细胞诱导K_(562)细胞凋亡的实验研究

目的 探讨脐血CD3AK细胞诱导K5 6 2 细胞凋亡的作用。方法 用细胞形态学观察 ,DNA琼脂糖凝胶电泳 ,原位末端标记法检测 2 0例K5 6 2 细胞、2 3例CD3AK细胞诱导的K5 6 2细胞凋亡率。结果 K5 6 2 细胞自然凋亡率 (3.5 0± 0 .97) % ;经CD3AK细胞诱导的K5 6 2 细胞凋亡率 (2 7.38± 4.91) % ,二者之间具有显著性差异 (t=15 .1 P <0 .0 1)。结论 脐血CD3AK细胞能诱导K5 6 2 细胞凋亡。

肝动脉化疗栓塞加门静脉灌输CD_3AK细胞治疗转移性肝癌的研究

目的 :观察肝动脉化疗栓塞 +门静脉插管化疗、灌输 CD3AK细胞治疗转移性肝癌的临床疗效及对机体免疫功能的影响。方法 :将 2 5例大肠癌肝转移患者随机分为 A,B两组 ,A组行肝动脉化疗栓塞 +门静脉插管化疗、灌输CD3AK细胞治疗 ,B组行肝动脉化疗栓塞 +门静脉插管化疗治疗。结果 :A组患者的细胞免疫指标在术后迅速恢复且维持在高水平状态 ,避免了机体由于手术打击而导致术后免疫力普遍降低的现象。而 B组术后细胞免疫功能较术前明显降低 ( P<0 .0 5 ) ,且恢复缓慢。A、B两组术后同期各指标相比较有显著性差异 ( P<0 .0 5 )。C组外周血单个核细胞的分布及体液免疫功能指标在术前、术后相比较无明显差异 ( P>0 .0 5 ) ,但均比 A、B组高。A组临床有效率为 80 % ,B组为 6 0 %。结论 :肝动脉化疗栓塞 +门静脉插管化疗、灌输 CD3AK细胞治疗转移性肝癌能提高临床疗效 ,提高肿瘤的 期切除率及迅速恢复。

螺旋藻多糖对CD_3AK细胞增殖能力的影响

研究了螺旋藻多糖（PS）对CD3McAb激活的杀伤细胞（CD3McAbactivatedkillercells,CD3AKcells）增殖能力的影响。结果表明，当PS浓度为2．5μg／ml培养体系条件下，对CD3AK细胞具有明显的刺激细胞增殖作用（P＜0．02）；对培养长达23d的CD3AK细胞杀伤肿瘤细胞（K563细胞）的活性仍维持在较高的水平（46．5％～50％）。

妇科肿瘤患者CD_3AK细胞对卵巢癌细胞杀伤活性动态观察

为探讨妇科良、恶性肿瘤患者CD3AK细胞体外对肿瘤细胞的杀伤活性，将5例妇科良性肿瘤，12例妇科恶性肿瘤患者的外周血单个核细胞制备成CD3AK细胞，用MTT法测定CD3AK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）的杀伤活性，同时观察不同效靶比的杀瘤情况，每周测定1次，共4周。结果：①良性肿瘤组CD3AK细胞对3AO的杀伤活性随着效靶比的增大而增强，在培养第1、4周，效靶比为20：1和40：1的杀瘤活性明显高于10：1；动态观察其杀瘤活性，培养第2周最低，第3、4周则较强；②恶性肿瘤组CD3AK细胞杀瘤活性当效靶比为10：1时低于20：1和40：1；动态观察其杀瘤活性，培养第2、3周高于第1、4周；③良、恶性肿瘤相比，CD3AK细胞杀瘤活性于培养第2周恶性肿瘤组显著高于良性肿瘤组（10：1，20：1）（P＜0．05），培养第4周（20：1）良性肿瘤组又显著高于恶性肿瘤组（P＜0．05）。结果提示：良、恶性妇科肿瘤患者CD3AK细胞对肿瘤的杀伤活性并不相同，临床上应针对良、恶性肿瘤患者CD3AK细胞的各自特点，选择适宜的治疗时间。

妇科良、恶性肿瘤患者CD_3AK细胞的表型特征

为了解妇科肿瘤患者ＣＤ３ＡＫ细胞的表型特征，并探讨来源于妇科良，恶性肿瘤患者ＣＤ３ＡＫ细胞表型特征的异同，采用间接免疫荧光法测定良，恶性妇科肿瘤患者ＣＤ３ＡＫ细胞的ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８阳性细胞率。

CD_3AK细胞和LAK细胞的表型测定

用抗ＣＤ＿３抗体和低剂量ＩＬ－２以及单独用高剂量ＩＬ－２分别诱生正常鼠、免疫鼠脾细胞为ＣＤ＿３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞。用间接免疫荧光法和微云细胞毒实验两种方法测定培养４ｄ和９ｄ的细胞表型。结果：正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ和ＬＡＫ细胞中ＣＤ＿３与ＣＤ＿８阳性细胞率均高于诱生前正常鼠脾细胞（Ｐ＜０．０１）。正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ细胞中，ＣＤ＿３与ＣＤ＿８阳性细胞率明显高于正常鼠ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。免疫鼠ＣＤ＿３ＡＫ与正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ的表型相似，而免疫鼠ＬＡＫ细胞的ＣＤ＿８阳性细胞率显著增加，明显高于正常鼠ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。

脐血CD_3AK细胞杀伤白血病细胞的实验研究

目的 研究脐血CD_3AK细胞对白血病细胞的杀伤作用。方法 以抗CD_3单克隆抗体刺激脐血淋巴细胞产生CD_3AK细胞,以MTT法检测脐血CD_3AK细胞对K562细胞株的杀伤作用,并以正常入外周血单个核细胞作对照。结果 效靶比为10∶1,20∶16寸,脐血CD_3AK细胞对K562细胞和正常PBMC细胞的细胞毒活性分别为72.58±12.58％,18.68±10.84％,78.15±10.35％,20.28±11.46％。脐血CD_3AK细胞对K562细胞有显著的杀伤作用,而对正常PBMC无明显细胞毒作用(P<0.01)。结论 脐血CD_3AK细胞对K562细胞有高效杀伤作用,在肿瘤的过继性免疫治疗过程中有良好的应用前景。

妇科恶性肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞表型特征动态比较

ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞均为异质细胞群，为了比较妇科恶性肿瘤患者ＬＡＫ细胞和ＣＤ３ＡＫ细胞在体外培养过程中的表型特征，采用间接免疫荧光法动态观察ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞的ＣＤ＾＋３，ＣＤ＾＝４，ＣＤ＾＋８细胞率。

原发性卵巢癌患者CD_3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为探讨CD3AK细胞和LAK细胞杀瘤作用的特异性及靶细胞选择性，对比观察了3例原发性卵巢癌患者CD3AK细胞和LAK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）和人早幼粒细胞白血病细胞系（HL60）的杀伤活性。结果表明：LAK细胞在培养第1～3周，各效靶比（10：1，20：1，40：1）对HL60的杀伤活性略高于对3AO的杀伤活性，但差异无显著性（P＞0．05）；CD3AK细胞在培养第1周，各效靶比（10：1，20：1，40：1）对HL60的杀伤活性均显著高于对3AO的杀伤活性（P＜0．05），而培养第2、3、4周时，对HL60和3AO的杀伤活性无显著区别（P＞0．05）。提示：LAK细胞和CD3AK细胞均缺乏杀瘤特异性，而CD3AK细胞具有一定的靶细胞选择性。

妇科肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为比较CD3AK细胞和LAK细胞的杀瘤特性，观察了妇科肿瘤患者CD3AK细胞和LAK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）的杀伤活性。结果表明：良性肿瘤组LAK细胞杀瘤活性高峰在培养第1、2周，显著高于同期培养的CD3AK细胞（P＜0．05，P＜0．01），第3周则较低，而CD3AK细胞的杀瘤活性高峰在培养第3、4周，显著高于LAK细胞（P＜0．05）；恶性肿瘤组，LAK细胞杀瘤高峰在培养第1周，显著高于同期培养的CD3AK细胞（P＜0．05），而CD3AK细胞杀瘤高峰在培养第2、3周，显著高于同期培养的LAK细胞（P＜0．05）。提示：妇科恶性肿瘤组LAK细胞和CD3AK细胞杀瘤活性高峰均较妇科良性肿瘤早1周左右；CD3AK细胞杀瘤活性高峰较LAK细胞延迟1～2周。说明CD3AK和LAK细胞的杀瘤活性在不同培养阶段表现不同，LAK细胞宜短期培养，CD3AK细胞宜长期培养。

妇科良、恶性肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞体外扩增能力比较

为探讨妇科良、恶性肿瘤患者CD3AK细胞的体外增殖能力，对其外周血淋巴细胞用CD3MAb＋IL－2诱导CD3AK细胞，体外动态观察CD3AK细胞增殖倍数，并与同期培养的LAK细胞进行对比。结果：①良性肿瘤组CD3AK细胞在培养第1周，增殖倍数高于恶性肿瘤组，但无显著性差异（P＞0．05），第2、3、4周，良、恶性肿瘤组CD3AK的增殖倍数较接近；②LAK细胞增殖倍数，在良性肿瘤组培养第1周时显著高于恶性肿瘤组（P＜0．05），培养第2、3周也高于恶性肿瘤组，但无统计学意义（P＞0．05）。结果提示：CD3AK细胞和LAK细胞短期培养时，不宜取材于恶性肿瘤患者。

CD_3AK介导的MHC非限制性杀瘤作用途径的研究

本实验探讨了小鼠ＣＤ３ＡＫ介导的ＭＨＣ非限制性杀瘤作用途径。ＣＤ３ＡＫ可在体外杀伤小鼠肝癌细胞ＨＣａ－Ｆ和成纤维瘤细胞Ｌ９２９，但其培养上清无杀瘤活性，多聚甲醛固定能明显降低ＣＤ３ＡＫ对Ｈｃａ－Ｆ的杀瘤活性，但对Ｌ９２９的杀瘤活性影响不大，结果表明ＣＤ３ＡＫ的杀瘤机制主要是直接杀伤。

小鼠CD_3AK的诱生与抗瘤活性的实验研究

采用固相抗小鼠ＣＤ_３单抗和重组白细胞介素２刺激小鼠脾细胞以诱生抗ＣＤ_３单抗激活的杀伤细胞（ＣＤ_３ＡＫ）。结果表明用这种方法诱生的ＣＤ_３ＡＫ能够增殖并介导体外抗瘤活性。