人杀伤抑制性受体CD158b cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 :CD1 5 8b基因克隆与表达。方法 :采用RT -PCR技术 ,从正常人外周血单个核细胞中扩增编码CD1 5 8b的cDNA ,经酶切后将其克隆于pMBP -c表达质粒上 ,酶切和测序鉴定。构建的高效表达克隆子经IPTG诱导后 ,表达的重组蛋白经SDS -PAGE电泳分析。结果 :RT -PCR获得了预期大小的cDNA ,DNA测序结果与GenBank登记的人CD1 5 8b编码序列一致。pMBP -c -CD1 5 8b表达质粒酶切后结果与预期相符。表达的重组蛋白经SDS -PAGE电泳分析 ,得到分子量为 5 8kD的蛋白质 ,与理论值一致 ,所获重组蛋白占菌体总蛋白 2 5 %。结论 :获得了CD1 5 8b基因 ,并成功在大肠杆菌中表达 ,所获重组蛋白为进一步研究CD1 5