HCVCE2融合蛋白在家蚕培养细胞、蚕幼虫中的表达及其初步应用

目的:高效表达HCVCE2融合蛋白并进行初步应用.方法:将2a型HCV全长CE2基因的cDNA重组于质粒pBacPAK8,构建重组转移载体pBacPAK CE2,与经线性化修饰的家蚕核型多角体病毒(BmNPV)DNA共转染家蚕培养细胞株,构建重组病毒.双酶切及PCR鉴定重组病毒基因组中目的片段的表达.重组病毒感染BmN细胞株及五龄家蚕幼虫后,SDS PAGE分析细胞培养上清、细胞抽提物及幼虫体液样品中,HCVCE2融合蛋白的特异性条带.并用间接ELISA法初步检测表达产物的生物活性.结果:双酶切及PCR鉴定重组病毒基因组含有约1.6kb的目的片段,重组病毒感染后的BmN细胞培养上清、细胞抽提物及幼虫体液样品中,均可见一Mr约90×103的特异性条带;用间接ELISA检测证明表达产物具有较好的免疫原性.结论:HCVCE2融合基因在家蚕培养细胞及蚕幼虫中获得了高效表达,并具有生物活性,为进一步进行疫苗的研究及临床诊断试剂的开发奠定基础.