人CEA信号肽-EK位点-HBD2融合基因的构建

目的 构建人CEA信号肽 EK激酶 HBD2抗菌肽融合基因。方法 PCR方法将CEA信号肽、EK激酶识别位点序列、上下游酶切位点及保护性碱基克隆在一个片段上 ,酶切后 ,T4DNA连接酶将此片段定向连接在含HBD2基因片段的 pBluescriptSK质粒上 ,构建成人CEA信号肽 EK激酶 HBD2抗菌肽融合基因 pBluescriptSK载体。 结果 融合基因经琼脂糖电泳、测序正确。结论 成功构建了人CEA信号肽 EK激酶 HBD2抗菌肽融合基因 pBluescriptSK克隆载体。

人hBD2高表达易分离逆转录表达载体构建

目的 通过现代分子生物学技术 ,构建人pLNCX2 CEA信号肽 EK激酶 hBD2抗菌肽逆转录表达载体 ,为下一步在真核细胞中高表达hBD2奠定基础。方法 PCR法将CEA信号肽、EK激酶识别位点序列、上下游酶切位点及保护性碱基克隆在一个片段上 ,酶切后 ,T4DNA连接酶将此片段定向连接在含hBD2基因片段的 pBluescriptSK质粒上 ,经过反复构建 ,最终完成pLNCX2 CEA EK hBD2 (成熟肽 )融合基因及其载体 ,并采用逆转录病毒法将融合基因整合到宿主细胞中。 结果 构建到逆转录表达载体pLNCX2上的目的基因双酶切后琼脂糖电泳及测序正确 ,RT PCR检测出宿主细胞融合基因表达。结论 成功构建pLNCX2 CEA EK hBD2逆转录表达载体 ,并整合入宿主细胞中表达。