^(131)I-抗CEA单抗防治大肠癌根治术后肝转移的实验研究

目的 探讨1 3 1 I 抗癌胚抗原 (CEA)单抗防治裸鼠体内人结肠癌细胞肝转移的效果。方法 裸鼠脾内注入人结肠癌细胞后、脾切除后第 4或第 8d腹腔注射1 3 1 I 抗CEA单抗 ,观察术后生存时间 ,并对肝脏进行组织学检查。结果 术后第 4或第 8d注射1 3 1 I 抗CEA单抗均显著延长裸鼠术后生存时间 ;术后第 4d注射可使肝转移率减少 33 3% ,第 8d注射不能使肝转移率减少。结论 术后早期行放射免疫治疗可取得较好的治疗效果 。

人源性噬菌体抗体库中抗CEA单抗的筛选与初步鉴定

目的 探讨利用噬菌体抗体库技术制备抗CEA的人源性单抗的可行性。方法 以纯化的CEA为抗原 ,应用噬菌体表面呈现技术 ,通过 3轮亲和富集及 2轮淋巴细胞吸附实验 ,从已构建好的人源性噬菌体抗体库中筛选出抗CEA的人源性单抗 ,随机挑出 10株单克隆在大肠杆菌中进行表达 ,并采用ELISA、SDS PAGE及基因测序进行初步鉴定。结果 ELISA显示有 9株单抗具有与CEA特异性结合的能力 ,挑选其中 2株具有较高亲和力的单克隆 ,经 12 %SDS PAGE蛋白电泳 ,在分子量约为 2 5kd处可见一新增蛋白带 ,与基因编码蛋白的理论计算值相符合 ,基因测序结果与GeneBank等相比对具有较高的序列同源性。结论 噬菌体抗体库技术是研制人源性单抗的有效途径。

经门静脉注射^(131)I标记抗CEA单抗后对荷瘤鼠CEA水平影响的实验研究

目的 研究经门静脉途径 (脾脏 )注射131I标记抗CEA单抗后对荷瘤鼠血清、腹水和瘤组织中CEA水平的影响。方法在接种结肠癌细胞悬液后 1 0min内 ,分别经脾脏和经尾静脉注射131I标记抗CEA单抗 ,对照组注射131I标记正常小鼠IgG。结果 经脾RAIT组荷瘤鼠血清、腹水和瘤组织中的CEA水平分别为 ( 2 3.8± 4 .3)、( 4 0 .1± 5.2 )、( 4 5.7± 7.0 ) μg/L ,对照组则为 ( 4 4.1±4 .7) ,( 52 .3± 7.0 ) ,( 6 7.0± 9.2 ) μg/L ,差异均有非常显著性 (P <0 .0 1 ) ;经脾RAIT组荷瘤鼠血清CEA水平也低于经尾静脉RAIT组 ( 2 9.7± 4 .8μg/L) ,两组之间具有显著性差异 (P <0 .0 5)。 结论 经门静脉途径注射131I标记抗CEA单抗较经尾静脉注射能更有效地降低荷瘤鼠血清中的CEA水平。

^(188)Re-抗CEA单抗对结肠癌细胞凋亡的诱导作用

目的 观察188Re 抗CEA单抗C5 0放射免疫治疗 (RIT)对结肠癌细胞的凋亡诱导作用 ,探讨RIT的抗肿瘤作用机制。方法 BALB/c小鼠结肠癌模型瘤内注射 18 5Mbp188Re C5 0 ,6h后以新鲜肿瘤组织块制备肿瘤单细胞悬液并采用流式细胞仪 (FCM )行倍体与S期细胞比例检测 ;取肿瘤组织固定后行透射电镜观察与原位末端标记法 (TUNEL)检测。结果 RIT治疗后 6hC2 6结肠癌细胞在用PI染色的FCM直方图上出现典型的凋亡峰 ,C2 6细胞凋亡百分比为 16 6 4 % ,而对照组未见凋亡峰。肿瘤S期细胞比例为 10 4 1% ,对照组则为 33 14 %。肿瘤G0 G1期细胞比例为6 8 6 % ,对照组为 35 12 % ,治疗后G1期细胞呈现明显的阻滞现象 ;TUNEL检测肿瘤细胞出现凋亡改变 ,凋亡指数 (AI)为 2 6 4 % ,而对照组则无凋亡改变发生 ;电镜下癌细胞出现典型的凋亡细胞形态学改变。结论 诱导结肠癌细胞凋亡是188Re C5 0抗肿瘤效应的重要作用机制。

^(153)Sm标记DTPA-抗CEA单抗的放射化学纯度的分析

目的 :应用纸层析法 ,建立153Sm通过DTPA环酐 (cDTPAa)标记抗CEA单抗的放射化学纯度分析方法。方法 :在多种纸层析系统中 ,经实验确定最佳纸层析分离条件 ,并将测定结果与SephadexG - 5 0凝胶柱层析法进行比较。结果 :最佳分离条件为 :展开剂组分比为磷酸三丁酯∶丁酮∶乙酸乙酯 =4∶10∶3,支持物为30 %硝酸铵处理的新华Ⅰ号滤纸。其标记率测定结果与柱层析法结果一致。结论 :结果表明该法设备简单 。

抗-CEA单抗的188Re标记

采用转移能力更强的葡萄糖酸钠和ＳｎＣｌ２的混合液及Ｎａ１８８ＲｅＯ４，用直接标记法标记了抗－ＣＥＡ单抗。研究了影响标记率的若干因素，如抗体和抗坏血酸的用量、亚锡的浓度、反应液ｐＨ值以及反应时间等，探索出标记率可达８０％以上的标记条件。

人结直肠癌粘膜下注射^(125)I标记抗CEA单抗CL58放射免疫导向手术的研究

目的 探讨12 5I标记的抗CEA单抗 (monoclonalantibody ,McAb)CL5 8在结直肠癌放射免疫导向手术 (radioimmunoguidedsurgery,RIGS)中的应用价值。方法 将12 5I标记单抗CL5 8在纤维结肠镜直视下注射于 2 9例结直肠癌患者癌周粘膜下 ;给药后 3～ 14d行根治手术 ,术中使用手持式γ探测仪 (gamma detectingprobe ,GDP)对肿瘤、区域淋巴结、手术切缘等靶部位 (target,T)进行放射性检测 ,以正常肠壁为对照本底 (normaltissue,NT) ,以T/NT≥ 3为判别大肠癌、肠壁浸润及淋巴结转移的标准 ;全部标本行病理学检验 ;病理学阴性的淋巴结标本进行免疫组化染色寻找微转移灶。结果GDP探测判别肿瘤的灵敏度为 93 1% ,判别切缘的特异度为 95 5 %。RIGS判别淋巴结的灵敏度及特异度分别为 92 0 %、87 8% ,与临床判别相比差异有显著性意义 (χ2 =5 84,P <0 0 5 )。免疫组化证实RIGS能够检出部分病例中常规病理检验未发现的淋巴结微转移灶。结论 应用12 5I标记的抗CEA单抗CL5 8进行结直肠癌RIGS 。

抗CEA单抗-天花粉蛋白偶联物的研制及活性鉴定

应用SPDP化学偶联法,将天花粉蛋白通过二硫键交联与抗CEA单抗制备成免疫毒素,经Sepbadex G-150凝胶过滤和Blue Sepharose-4B离子梯度交换层析纯化,电泳鉴定显示这一免疫毒素纯度高,偶联蛋白克分子比合理。应用间接免疫荧光染色技术和ELISA法测定结果证明,其与CEA人结肠癌细胞(LoVo)具有特异结合反应,仍保留大部份原抗体活性。具有较好的导向性。体外毒性试验结果表明,免疫毒素对靶细胞(LoVo)有选择性的杀伤作用,50％细胞毒剂量(I.C50)为10^(-9)范围,比单用天花粉蛋白和天花粉蛋白与正常小鼠IgG-偶联物对靶细胞杀伤能力分别增强约150倍和2000倍,而对实验对照细胞(Hela)杀伤无增强作用。

^(131)I-抗CEA单抗在结肠癌模型及结肠癌患者体内的生物学分布

目的 观察１３１Ｉ抗ＣＥＡ单抗（Ｃ５０） 在结肠癌生物体内的生物学分布，评估１３１ＩＣ５０ 在机体内的导向作用及其稳定性。方法 采用改良氯胺Ｔ 法以１３１ＩＣ５０ 进行荷人结肠癌裸鼠及结肠癌患者体内生物学分布及肿瘤放免显像研究。每鼠腹腔内注射１３１ＩＣ５０ １００ μＬ（３ ７００ ｋＢｑ）。１，２ ，３ ，４ 和６ 天后显像并测定各脏器的放射性分布；每例结肠癌患者静脉注射１３１ＩＣ５０ １ ｍｇ （１６０ ＭＢｑ） ，４８ ～７２ 小时后采用单光子发射型计算机辅助断层仪（ＳＰＥＣＴ） 进行扫描显像，２ ～３ 天后于术中采集肿瘤及正常组织并检测其放射性分布。结果 荷人结肠癌裸鼠注射标记抗体后４８ 小时肿瘤区即有放射性浓聚，随着时间的推延，影像渐趋清晰，本底逐渐下降。第６ 天结束时，瘤／肠和瘤／血放射性计数比值（Ｔ／ＮＴ） 分别为１０－４０ ±０－６９ 和０－７０ ±０－０８ ，均达最大值。１３１ＩＣ５０ 在结肠癌患者体内不同组织的生物学分布则显示：１３１ＩＣ５０ 在瘤区明显集聚，Ｔ／ＮＴ 多数达５ 以上。显像结果清晰，血本底很低。结论 １３１ＩＣ５０ 在生物体内能与肿瘤抗原发生特异性结合，具有很好的导向性，且在内环境下稳定性?

Immunoscintigraphy of local recurrent rectal cancer with^(99m)Tc-labeled anti-CEA monoclonal antibody CL58

AIM: To explore a specific diagnostic method for local recurrent rectal cancer.METHODS: Immunoscintigraphy with 99mTc-labeled anti-CEA monoclonal antibody (MoAb) CL-58 was performed for patients suspected of having a postoperative local recurrent rectal cancer and the findings were compared with the results of conventional imaging and pathology.RESULTS: A total of 36 patients with a suspected local recurrent rectal cancer underwent immunoscintigraphy with 99mTc-conjugated CL58. Local recurrence of rectal cancer was identified in 31 patients and established in 30 during operation, endoscopy and pathological examination. No local recurrence was found in 5 patients without specific accumulation of 99mTc during the follow-up. Immunoscintigraphy had a positive rate of 86.11%, a specificity of 83.33%, and a sensitivity of 100%.CONCLUSION: Immunoscintigraphy has a highly specific and predictive value for detecting local recurrent rectal cancer, especially after abdominal perineal resection (APR).

^(90)Y间接法标记单克隆抗体的实验研究

目的:采用间接法对抗CEA单抗(McAb)及CD45McAb进行90Y标记,并确定最佳标记条件,为90Y放射免疫导向治疗CEA分泌性肿瘤及急性白血病奠定基础。方法:利用DTPA环酐(cDTPAa)作为络合剂,将90Y偶联至CEAMcAb与CD45McAb上,确定cDTPAa与抗体偶联的最佳条件,并测定偶联物的免疫活性及在体外的稳定性。结果:在抗体浓度为20mg/ml时,最佳偶联条件为:抗CEA单抗与cDTPAa的摩尔比为1:20,偶联反应中pH值8.2,在最佳偶联条件下,90Y标记CEAMcAb与CD45McAb的标记率均>93,放化纯度均>95,体外稳定性良好,并且两类标记物均保持较好的免疫活性。结论:90Y标记的CEAMcAb与CD45McAb是较理想的放射免疫靶向治疗制剂,可用于下一步的CEA分泌性肿瘤及急性白血病的治疗研究。