抗CEA抗体可变区基因的克隆及其嵌合抗体的表达

目的 在真核细胞中表达抗癌胚抗原 (carcinoembryonic antigen,CEA)人 -鼠嵌合抗体。方法 从分泌抗 CEA鼠单抗 C5 0的杂交瘤细胞中扩增、克隆可变区基因。测序鉴定后连入真核表达载体 ,导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢 (dihydrofolate reductase- deficient Chinese ham ster ovary,CHO- dhfr- )细胞进行表达。采用间接和竞争抑制 EL ISA检测表达产物的人源性和抗原结合特异性。结果 序列测定初步确定所克隆的是功能性抗体可变区基因。在转染细胞上清中测到抗 CEA嵌合抗体的表达。EL ISA试验证实该嵌合抗体具有人的恒定区 ,并与原鼠单抗 C5 0有相同的抗原结合特异性。结论 成功地在真核细胞中表达了抗 CEA人 -鼠嵌合抗体。

用细胞-ELISA法检测抗CEA抗体

目的 以高表达CEA的人结肠癌细胞系LoVo作为抗原 ,建立检测抗CEA抗体的细胞 ELISA法。方法 将1.0× 10 6 mL浓度 2 0 0 μL的LoVo加入培养板培养 2 4h ,用 0 .0 2 5 %戊二醛固定 ,加入经CEA基因疫苗免疫小鼠血清 ,亲和素 生物素复合物 ,酶标仪检测OD值。结果 建立了ABC CELISA检测抗CEA抗体 ,2套基因疫苗诱导抗CEA抗体效价不同。结论 ABC CELISA法简便 ,敏感度高 ,为研究CEA体液免疫提供了方法。

胃肠道癌患者血清中抗癌胚抗原(CEA)抗体的检测及意义

目的：探讨循环中抗癌胚抗原（ＣＥＡ）特异性抗体的情况，评价ＣＥＡ及抗体的联合检测在胃肠道癌诊断中的作用。方法：用放免法检测血清中 ＣＥＡ含量，用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体，用竞争抑制法检测抗体的特异性。结果：胃肠道癌患者血清 ＣＥＡ含量升高者（≥１５ ｎｇ／ｍｌ）为 ３０．９％（２１／６８），抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体阳性者为３５．３％（２４／６８），ＣＦＡ及抗 ＣＥＡ抗体的联合检测可使阳性率提高到５４．３％（３７／６８）；胃肠道良性疾病患者（多发性息肉、溃疡、胰腺炎等）血清ＣＥＡ升高者为３．３％（１／３０），抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体阳性者为 ３．３％（１／３０）；健康对照组血清 ＣＥＡ升高者为 ０，抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体阳性者为 ２．５％（１／４０）。结论：胃肠道癌患者血清中抗癌胚抗原（ＣＥＡ）抗体的检出率较高，这些抗体可作为胃肠道癌的一种肿瘤标志物。

抗CEA嵌合抗体在CHO细胞中的高效表达

目的为了在CHO-dhfr 细胞中高效表达有活性的抗人CEA鼠-人嵌合抗体。方法构建抗CEA嵌合抗体的真核高效表达载体,转染CHO-dhfr-细胞,通过加入 MTX进行基因扩增表达,获得高产细胞株。采用Western bolt、ELISA 、体内放射免疫实验等方法鉴定所表达的嵌合抗体的生物学特性。结果获得产量可达60 μg/ml的细胞株。Western blot、 ELISA、体内放射免疫实验证明所表达的嵌合抗体的确含人抗体的恒定区,并特异地与 CEA结合。结论成功地在真核细胞CHO-dh fr-中高效表达了抗CEA嵌合抗体,并具有良好的生物活性。

抗CEA嵌合小分子抗体的构建与表达

目的构建表达抗 CEA小分子抗体 ,以利于放射免疫诊断及导向治疗。方法构建 CEA单链抗体基因 ,克隆入载体 p Kp L - 3a,在大肠杆菌中包涵体表达 ,EL ISA检测活性。将轻重链基因克隆入分泌型表达载体 p SCMH,在大肠杆菌中表达 ,EL ISA检测活性。将 CEA嵌合抗体的轻链和 Fd基因克隆入杆状病毒表达载体 p Ac U W5 1中 ,在 sf9细胞中分泌表达 ,EL ISA检测活性及测定产量 ,竞争抑制 EL ISA测定其识别的抗原表位。结果多种方法复性的包涵体及原核分泌表达的单链抗体未测到活性。昆虫细胞中表达的小分子抗体具抗体活性 ,产量为 1.7μg/m L,竞争抑制实验显示其与亲本鼠单抗 C5 0识别相同的表位。结论该 CEA抗体基因在大肠杆菌中不能表达出有功能的分子 ,而在昆虫细胞中表达了具活性抗体分子 ;某些抗体基因只有在真核细胞中才能表达出有功能的抗体分子。

癌胚抗原特异性单克隆抗体(Anti-CEA)核酸适配体的筛选

目的 :筛选癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单克隆抗体(Anti-CEA)的核酸适配体(aptamers),为肺癌血清肿瘤标志物核酸适配体的筛选奠定实验基础。方法:利用羧基化琼脂磁珠作为筛选介质,以Anti-CEA为筛选的目标靶分子,通过消减SELEX技术及实时定量PCR技术,从随机ss DNA文库中筛选出与Anti-CEA特异性结合的aptamers,并通过凝胶阻滞实验(EMSA)鉴定筛选到的Anti-CEA-aptamer复合物,然后将得到的第10轮富集文库扩增为双链DNA,通过切胶纯化后,连接PMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,同时利用交错PCR技术鉴定阳性克隆,经测序,获得aptamers的序列。结果:经过10轮筛选得到了4条与Anti-CEA结合的aptamers,测序结果显示均为不同序列。结论:验证筛选出的与Anti-CEA结合的aptamer,特异性检测结果表明2号aptamer与靶分子结合的特异性很高,且与非特异蛋白无明显吸附,筛选出的aptamers用于识别Anti-CEA,将为肺癌的早期诊断和早期治疗提供新的突破口。

^(153)Sm标记DTPA-抗CEA单克隆抗体的研究

目的研究(１５３)Ｓｍ通过二乙三胺五乙酸（ＤＴＰＡ）环酐（ｃＤＴＰＡａ）为双功能络合剂标记抗ＣＥＡ单抗的方法。方法确定ｃＤＴＰＡａ与抗体偶联的最佳条件，并测定偶联物的免疫活性及在体外的稳定性。结果(１５３)Ｓｍ标记抗ＣＥＡ单抗的方法简便、快速，且抗体与ｃＤＴＰＡａ偶联后其免疫活性无明显丧失。在抗体浓度为２０ｍｇ／ｍｌ时，最佳偶联条件为：抗ＣＥＡ单抗与ｃＤＴＰＡａ的摩尔比为１：２０，偶联反应中ｐＨ为７～８。在最佳偶联条件下，用高比活度的(１５３)Ｓｍ（２２．２ＳＧＢｑ／ｍｌ），ＣＥＡＭｃＡｂ－ＤＴＰＡ的标记率可达６０％。结论通过ＤＴＰＡ环酐法将(１５３)Ｓｍ标记到单抗上所制备的放射免疫偶联物可作为一种有希望的放射免疫治疗剂。

单克隆抗体BG_6及多克隆抗体CEA对乳腺癌的联合诊断价值

测定５１例乳腺癌，１５例良性乳腺疾病及１７例各种其它良、恶性疾病，结果显示：抗人乳腺癌单克隆抗体ＢＧ＿６特异性较强，但诊断阳性率仅为７６．７％，如与多克隆抗体ＣＥＡ联合使用，可大大提高其阳性率，即两种抗体交叉阳性率可达９６％．在乳腺癌类型中，恶性度较大的单纯癌、硬癌及浸润型导管癌，ＢＧ＿６阳性率表达显著高于其它类型。对少数乳腺腺病及囊性增生症病例中出现阳性，可能反映乳腺上皮的癌变过程。

^(131)I标记抗CEA单克隆抗体C50对荷人乳腺癌裸鼠局部放射免疫治疗效果

目的:观察放射免疫导向药物局部用药对荷人乳腺癌裸鼠的治疗效果。方法:将抗CEA单抗C50与131I偶联,制成放射免疫导向药物131I-C50。将已乳腺原位接种人乳腺癌MCF-7细胞且肿瘤直径已达0·5cm的裸鼠16只随机分为实验Ⅰ组、实验Ⅱ组、实验对照组(Ⅲ组)及空白对照组(Ⅳ组),每组4只。对荷人乳腺癌裸鼠进行肿瘤局部注射,Ⅰ组给予131I-C5018·5MBq,Ⅱ组给予131Ⅰ-C503·7MBq,Ⅲ组给予131I-mIgG18·5MBq,Ⅳ组给予C500·75μg,给药当日后6周内每周测定肿瘤大小,计算抑瘤率。结果:Ⅰ组和Ⅱ组与Ⅲ组之间的肿瘤体积、抑瘤率、重量比较差异有显著性(P<0·01),Ⅰ组与Ⅱ组上述指标比较差异亦具有显著性(P<0·05),Ⅲ组与Ⅳ组比较差异无显著性(P>0·05)。结论:放射性核素131I标记抗CEA单抗C50局部治疗可抑制荷人乳腺癌裸鼠肿瘤的生长。131I-C50具有潜在的临床应用价值。

^(153)Sm标记抗CEA单克隆抗体在荷人结肠癌裸鼠体内的放射性分布

目的以153Sm标记的抗CEA单克隆抗体对荷人结肠癌移植瘤裸鼠进行肿瘤定位显像的研究。为结肠癌早期诊断提供一种新方法,并为其临床应用提供实验依据。方法每只荷瘤裸鼠从尾静脉注射7.4 MBq/0.1 ml于注射后2、4、82、4 h行全身SPECT显像。于4、82、4 h分批处死裸鼠并测定分别在肿瘤、血液、心脏、肺等重要脏器单位重量的放射性比值(%ID/g).结果153Sm-CEA能够选择性地积聚于肿瘤组织,其摄取率高于153Sm-IgG,(P<0.05)。结论153Sm-AFP在荷人结肠癌裸鼠体内,对过度表达CEA的结肠癌具有集合力。为临床上结肠癌的诊断提供实验依据。

用于检测癌胚抗原CEA的丝网印刷免疫传感器

采用溶胶-凝胶技术将电子媒介体亚甲基蓝和辣根过氧化物酶（HRP）标记的癌胚抗原（CEA）固定在一次性丝网印刷碳电极表面,制备了CEA免疫传感器.该免疫传感器在含CEA样品的溶液中培育后,抗原-抗体免疫结合物的形成会阻碍HRP活性中心与亚甲基蓝之间的电子传递,使HRP对H2O2电催化氧化的效率降低.循环伏安和计时电流法用于研究免疫电极的电化学特性,在优化的条件下催化效率的降低与CEA质量浓度分别在1.0～6.0 μg/L和6.0～138 μg/L范围内成线性关系,检出限为0.4 μg/L,测定的组内和组间相对标准偏差分别为7.4%和11.2%.该测定无须分离、洗涤步骤,分析时间短,操作方便,检测成本低,具有实际应用价值.

CEA多表位融合蛋白在胃肠道肿瘤血清学诊断中的研究价值

目的以CEA多表位融合蛋白为抗原,即ozlf-86/87融合蛋白,检测胃肠道肿瘤患者血清中抗CEA抗体,鉴定融合蛋白的抗原性,为融合蛋白作为诊断抗原提供依据,为下一步动物免疫反应实验奠定基础。方法以CEA多表位融合蛋白作为诊断抗原,采用间接ELISA法,分别对收集的39例胃癌患者血清、25例结肠癌患者血清、30例慢性胃炎患者血清和30例健康对照者的血清中的抗CEA抗体进行检测,用方差检验分析胃结肠癌患者实验组和慢性胃炎、健康患者对照组血清抗体效价之间差异性。结果胃癌和结肠癌实验组与对照组血清抗体效价之间差异均有统计学意义(P<0.01)。对胃癌患者和结肠癌患者血清抗体的诊断敏感度分别为35.9%和44.0%,结论本实验通过工程菌表达纯化的CEA多表位融合蛋白具有很好的抗原性,对用于血清学诊断的研究有一定的可行性,对制备ELISA血清检测试剂盒提供了理论基础,为下一步免疫反应及抗CEA抗体的制备奠定基础。

血清CA15-3、CEA联合检测在乳腺癌诊治中的临床意义

目的观察血清CA15-3和CEA联合检测在乳腺癌临床诊治中的价值。方法选取乳腺癌患者50例作为观察组,另选取乳腺良性病变患者50例作为对照组。采取免疫放射分析法,分别对2组血清CA15-3和CEA进行联合检测,比较2组CA15-3和CEA水平和阳性率的差异,并比较50例乳腺癌患者中手术后复发、转移患者与治愈患者的血清CA15-3、CEA水平和阳性率的差异。结果观察组CA15-3和CEA检测数值及其阳性率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组治愈28例(56.0%),复发13例(26.0%),术后转移9例(18.0%),术后复发与转移患者CA15-3和CEA的检测值和阳性率均显著高于治愈患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血清CA15-3和CEA的联合检测不仅能提高乳腺癌的诊断率,还可作为评价预后的有效指征,值得临床推广。

^(131)I标记抗CEA单抗在荷人乳腺癌裸鼠体内的放射免疫显像及生物学分布

目的研究131I标记的抗CEA单克隆抗体C50(简称131I-C50)及正常小鼠IgG(简称131I-mIgG)在荷人乳腺癌裸鼠体内的放射免疫显像及生物学分布,为临床应用提供依据。方法每只荷瘤鼠尾静脉注射标记抗体3·7MBq/0·1ml,于注射后24、48、96、120小时行SPECT,于48、96、120小时分批处死,测定肿瘤、血液、肝、肺、等重要脏器的单位重量放射性比值(T/NT)及各组织摄取百分比(%ID/g)。结果131I-C50注射后24~120小时内,SPECT可见阳性显像,阳性率为50%;瘤/血比值在120小时最高,达3·07±1·01。131I-mIgG注射后在24~120小时内未出现放射性浓聚呈全身性分布。结论C50在荷人乳腺癌裸鼠体内,对过度表达CEA的乳腺癌具有亲合力,可望用作乳腺癌诊断及预后判断的导向载体。

Immunoscintigraphy of local recurrent rectal cancer with^(99m)Tc-labeled anti-CEA monoclonal antibody CL58

AIM: To explore a specific diagnostic method for local recurrent rectal cancer.METHODS: Immunoscintigraphy with 99mTc-labeled anti-CEA monoclonal antibody (MoAb) CL-58 was performed for patients suspected of having a postoperative local recurrent rectal cancer and the findings were compared with the results of conventional imaging and pathology.RESULTS: A total of 36 patients with a suspected local recurrent rectal cancer underwent immunoscintigraphy with 99mTc-conjugated CL58. Local recurrence of rectal cancer was identified in 31 patients and established in 30 during operation, endoscopy and pathological examination. No local recurrence was found in 5 patients without specific accumulation of 99mTc during the follow-up. Immunoscintigraphy had a positive rate of 86.11%, a specificity of 83.33%, and a sensitivity of 100%.CONCLUSION: Immunoscintigraphy has a highly specific and predictive value for detecting local recurrent rectal cancer, especially after abdominal perineal resection (APR).

肿瘤放射免疫显像

肿瘤放射免疫显像(Radioimmunoimaging，RII)系以抗肿瘤抗体或其片段为特异性导向运载工具交联诊断用放射性核素定位于肿瘤组织，采用核医学显像设备于体外探测肿瘤位置的一种核医学诊断技术。自1978年Goldenberg首次报告抗CEA抗体临床肿瘤定位以来，RII的临床应用已有近万例报告，其中包括实体瘤(如：大肠癌、黑色素瘤、乳癌、卵巢癌、肝癌、前列腺癌、

大肠癌瘤体内注射单抗放免结合物(C_(50)-^(131)Ⅰ)的临床实验

以抗CEA单克隆抗体C_(50)(2mg)标记放射性同位素^(131)Ⅰ(C_((50)^-)^(131)Ⅰ,放射剂量10Mci),注射入16例大肠癌的肿瘤瘤体内及其周围。用另10例大肠癌患者,单纯以放射性同位素^(131)Ⅰ溶液注射于大肠癌肿瘤内及周围作为对照。两组患者均于给药后48、72小时进行全身SPECT检查,了解肿瘤部位同位素聚集的量(占给予量的百分比),同时通过手术切除标本观察肿瘤细胞的坏死情况。结果:单抗组中的肿瘤部位的^(131)Ⅰ聚集艟为14.04±9.10％,对照组中为4.28±3.01％,两者相比具有显著性差异;单抗组16例给药后,有10例发生了中等度的肿瘤细胞坏死,4例发生了大面积的肿瘤细胞坏死,对照组中只有4例发生了中等度的细胞坏死,两组相比有显著性差异。作者认为放射免疫药物的局部应用,提高了药物在实体肿瘤部位的聚集,从而增强了导向药物对实体肿瘤细胞的杀伤作用。