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DF-1细胞替代CEF细胞测定IBDV液抗原含量和血清中和抗体效价的研究
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作者 李林 沈佳 +5 位作者 史爱华 赵蕾 习硕 姜北宇 张建伟 章振华 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第15期90-92,97,共4页
为了探讨DF-1细胞替代鸡胚成纤维(chicken embryo fibroblast,CEF)细胞作为培养基质用于测定鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)液抗原含量及血清中和抗体效价的可行性,试验以DF-1细胞和CEF细胞作为培养基质测定... 为了探讨DF-1细胞替代鸡胚成纤维(chicken embryo fibroblast,CEF)细胞作为培养基质用于测定鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)液抗原含量及血清中和抗体效价的可行性,试验以DF-1细胞和CEF细胞作为培养基质测定了6批次IBDV BJQ902株病毒液抗原含量和用不同剂量ND、IB、IBD三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+BJQ902株)免疫SPF鸡血清和未免疫SPF鸡血清的中和抗体效价。结果表明:6批次病毒液病毒含量为1×10^(7.7)~1×10^(8.1)TCID50/0.1 mL,两种细胞对同一批次病毒样品的测定结果一致,重复测定无差异;IBDV阳性血清样品中和抗体效价为8~17 lb,两种细胞对同一血清样品中和抗体效价的检测结果无差异。说明DF-1细胞可以替代CEF细胞作为培养基质,用于IBDV液抗原含量及血清中和抗体效价的测定。 展开更多
关键词 DF-1细胞 cef细胞 鸡传染性法氏囊病毒 抗原含量 中和抗体效价
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基于iTRAQ技术分析柔嫩艾美耳球虫感染后CEF细胞的差异表达蛋白 被引量:2
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作者 王璐 朱顺海 +6 位作者 赵其平 黄兵 韩红玉 刘桂玲 李志行 赵焕之 董辉 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第5期8-16,共9页
柔嫩艾美耳球虫是一种严格的细胞内专性寄生虫,可主动入侵鸡的盲肠上皮细胞。当受到柔嫩艾美耳球虫感染时,宿主细胞会发生相应的变化以应对感染引起的损伤。迄今为止,对宿主细胞应对球虫感染机制的研究极其有限。本研究利用相对和绝对... 柔嫩艾美耳球虫是一种严格的细胞内专性寄生虫,可主动入侵鸡的盲肠上皮细胞。当受到柔嫩艾美耳球虫感染时,宿主细胞会发生相应的变化以应对感染引起的损伤。迄今为止,对宿主细胞应对球虫感染机制的研究极其有限。本研究利用相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术结合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术分析了感染柔嫩艾美耳球虫子孢子72 h后原代鸡胚成纤维(CEF)细胞的蛋白质组表达变化,结果共鉴定出3967个非冗余蛋白质,与不感染组相比,感染组有259个蛋白质的表达量发生了明显变化,其中上调蛋白质145个和下调蛋白质114个;GO和KEGG通路分析结果发现,这些差异表达蛋白具有结合活性、催化活性、转运子活性等分子功能,主要参与细胞外基质受体互作、糖酵解/糖异生、粘着斑、氨基酸的生物合成、半胱氨酸和蛋氨酸代谢等通路;qPCR结果发现,8个基因的mRNA转录水平变化与iTRAQ结果一致,2个基因的不一致;Western blot结果发现感染组细胞的FABP4蛋白表达量显著降低,与iTRAQ结果中蛋白表达水平变化相一致。本研究结果为柔嫩艾美耳球虫与宿主之间互作关系的深入研究提供了重要的基础数据。 展开更多
关键词 ITRAQ 球虫 cef细胞 差异表达蛋白
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10种中药成分对鸡胚成纤维细胞生长的影响 被引量:9
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作者 胡元亮 孔祥峰 +2 位作者 张宝康 刘家国 王德云 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期601-603,共3页
将鸡胚成纤维细胞 ( CEF)分别与当归多糖 ( CAPS)、黄芪多糖 ( APS)、板蓝根多糖 ( IRPS)、淫羊藿多糖 ( EPS)、蜂胶多糖 ( PPS)、淫羊藿黄酮 ( EF)、蜂胶黄酮 ( PF)、黄芪黄酮 ( AF)、黄芪皂甙 ( AS)和人参皂甙 ( GS)等 10种中药成分... 将鸡胚成纤维细胞 ( CEF)分别与当归多糖 ( CAPS)、黄芪多糖 ( APS)、板蓝根多糖 ( IRPS)、淫羊藿多糖 ( EPS)、蜂胶多糖 ( PPS)、淫羊藿黄酮 ( EF)、蜂胶黄酮 ( PF)、黄芪黄酮 ( AF)、黄芪皂甙 ( AS)和人参皂甙 ( GS)等 10种中药成分一起加入到 96孔细胞培养板中培养 ,分别在培养 2 4、36、4 8、6 0、72 h时用 MTT法测定中药成分对 CEF增殖的影响。结果表明 ,所有中药成分均能显著促进 CEF增殖 。 展开更多
关键词 中药成分 鸡胚成纤维细胞 生长 增殖 量效关系 时效关系 免疫增强剂
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中药成分对培养细胞的生长和抵抗病毒感染的影响 被引量:11
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作者 孔祥峰 胡元亮 +3 位作者 王德云 刘家国 张宝康 邱妍 《畜牧与兽医》 北大核心 2003年第11期4-7,共4页
将 5种浓度的含当归多糖 (CAPS)、黄芪多糖 (APS)、板蓝根多糖 (IRPS)、淫羊藿多糖 (EPS)、蜂胶多糖 (PPS)、淫羊藿黄酮 (EF)、蜂胶黄酮 (PF)、黄芪黄酮 (AF)、黄芪皂甙 (AS)和人参皂甙 (GS) 1 0种中药成分分别加入到已培养 48h、 1 2h... 将 5种浓度的含当归多糖 (CAPS)、黄芪多糖 (APS)、板蓝根多糖 (IRPS)、淫羊藿多糖 (EPS)、蜂胶多糖 (PPS)、淫羊藿黄酮 (EF)、蜂胶黄酮 (PF)、黄芪黄酮 (AF)、黄芪皂甙 (AS)和人参皂甙 (GS) 1 0种中药成分分别加入到已培养 48h、 1 2h前接种新城疫病毒的鸡胚成纤维(CEF)细胞单层中 ,于病毒接种后 72h用中性红染料吸收法测定CEF细胞的活性 ,以评价各中药成分对培养细胞的生长和抗病毒感染的影响。结果表明 ,EF、PPS和PF显著促进细胞生长 ,CAPS、IRPS和GS显著抑制细胞生长 ,EF、GS、PPS、AF、PF、APS和EPS 7种中药成分显著抑制病毒感染 ;部分中药成分的作用各有所长 ,且有一定的量效关系。 展开更多
关键词 中药成分 培养细胞 生长 抗病毒感染 量效关系 新城疫 药理作用 免疫增强剂
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中药成分对传染性法氏囊病毒感染细胞的影响 被引量:22
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作者 胡元亮 刘家国 +3 位作者 陈玉库 张宝康 孙祥峰 王效田 《畜牧与兽医》 北大核心 2003年第12期8-10,共3页
将黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、淫羊藿多糖、板蓝根多糖、黄芪黄酮、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、黄芪皂甙、人参皂甙等 1 0种中药成分与鸡传染性法氏囊病毒 (IBDV)以 3种顺序加入到培养 2 4h的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中。即先加中药后接种... 将黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、淫羊藿多糖、板蓝根多糖、黄芪黄酮、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、黄芪皂甙、人参皂甙等 1 0种中药成分与鸡传染性法氏囊病毒 (IBDV)以 3种顺序加入到培养 2 4h的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中。即先加中药后接种病毒、先接种病毒后加中药、中药和病毒同时加入 ,观察细胞病变的程度 ,以评价它们对IBDV感染细胞的影响。结果表明 ,先加中药后接种病毒和中药与病毒同时加入时 ,多数中药成分处理组在病毒接种后 72h的细胞病变程度明显减轻 ,表明多数中药能抑制病毒感染细胞 ,且有一定的量效和时效关系。 展开更多
关键词 中药成分 传染性法氏囊病毒 鸡胚成纤维细胞 接种 细胞病变 抑制作用 时效关系 时效关系
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传染性法氏囊病病毒在鸡胚细胞上的优化繁殖 被引量:7
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作者 张立 张元兴 +1 位作者 严春 俞俊棠 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1996年第6期707-711,共5页
研究了传染性法氏囊病病毒(IBDV)在鸡胚细胞上繁殖的优化条件,结果表明,鸡胚细胞体外增殖培养后对IBDV的敏感性并不减弱,而且有提高。维持培养基中血清浓度的变化(体积分数在0.01~0.10范围内)对病毒的繁殖影响... 研究了传染性法氏囊病病毒(IBDV)在鸡胚细胞上繁殖的优化条件,结果表明,鸡胚细胞体外增殖培养后对IBDV的敏感性并不减弱,而且有提高。维持培养基中血清浓度的变化(体积分数在0.01~0.10范围内)对病毒的繁殖影响不大。该病毒更适宜于稍偏酸性和较高温度下繁殖。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病 病毒 鸡胚细胞 优化 繁殖
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RNAiFect^(TM)和SuperFect转染试剂对4种细胞活性的影响 被引量:2
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作者 李定霏 岳华 +2 位作者 傅安静 马莉 黄兴 《西南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2005年第S1期53-56,共4页
在RNA干涉中,转染试剂的用量与siRNAs的量成正相关关系,但因转染试剂对细胞有一定的毒性作用,超过一定用量可以引起细胞形状改变、脱落、甚至死亡,直接影响着干涉的效率,所以确定转染试剂的优化用量,是RNA干涉试验中的重要环节.将不同... 在RNA干涉中,转染试剂的用量与siRNAs的量成正相关关系,但因转染试剂对细胞有一定的毒性作用,超过一定用量可以引起细胞形状改变、脱落、甚至死亡,直接影响着干涉的效率,所以确定转染试剂的优化用量,是RNA干涉试验中的重要环节.将不同用量的RNA iFectTM和SuperFect两种转染试剂分别加入鸡胚成纤维(CEF)细胞、293细胞、PK细胞和MDCK细胞中,在4h和24h后观察细胞的活力情况,比较了不同转染试剂对不同细胞的影响.结果表明:相同用量的两种转染试剂对293细胞、PK细胞和MDCK细胞的生长的影响远远小于对CEF细胞的影响;两种转染试剂用于外源小分子转染时,建议在293细胞、PK细胞和MDCK细胞上的用量不超过3u l;两种转染试剂对CEF细胞的毒性较大,不适合用于转染. 展开更多
关键词 RNAiFectTM转染试剂 SuperFect转染试剂 鸡胚成纤维细胞 293细胞 PK细胞 MDCK细胞 毒性
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纳米二氧化钛的细胞增殖效应及其安全性 被引量:3
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作者 张林 庞小峰 《生命科学仪器》 2007年第7期54-56,共3页
Mosmann已经用3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)比色法检测了纳米TiO2在人肝细胞的增殖情况。通过化学沉积的方法可以制备纳米TiO2,它的纳米结构可以通过电子扫描显微镜检测。我们首先测量纳米TiO2一些基本特性然后深入... Mosmann已经用3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)比色法检测了纳米TiO2在人肝细胞的增殖情况。通过化学沉积的方法可以制备纳米TiO2,它的纳米结构可以通过电子扫描显微镜检测。我们首先测量纳米TiO2一些基本特性然后深入到肝脏细胞,再在这些细胞增加一些纳米TiO2。利用生物学的方法我们观察并测量肝脏细胞在正常状态下的细胞增殖情况,通过与对照组对比的结果表明纳米TiO2在人的肝脏细胞的增殖的影响很小。我们进一步发现纳米TiO2对鸡胚成纤维(CEF)细胞的毒性(安全性)的尺度。最后我们首次通过毒物学确定了在100nm和1000nm TiO2的毒性。 展开更多
关键词 纳米二氧化钛 MTT比色法 人肝细胞 鸡胚成纤维细胞 生物学效应 增殖 毒性
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北半球冬季风时期越赤道气流的初步分析 被引量:4
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作者 李曾中 杨麟美 +1 位作者 周江兴 高曙 《应用气象学报》 CSCD 北大核心 1994年第2期190-195,共6页
利用1980-1986年格点风资料,分析了各年北半球冬季风期间(12-2月)东半球对流层低层及高空的越赤道气流通道。在该地区冬季低空具有气候意义的通道是105°L125°E、45°L80°E及150... 利用1980-1986年格点风资料,分析了各年北半球冬季风期间(12-2月)东半球对流层低层及高空的越赤道气流通道。在该地区冬季低空具有气候意义的通道是105°L125°E、45°L80°E及150°E5条,其中以100°一130“E为主要通道。高空则主要集中在80°一120°E区间。在1983一1984、1984一1985年两个冬季,45°E处出现较强的低空北风越赤道气流,这与高纬度大西洋东部上空持续的强阻塞形势有关。这支强越赤道气流与南印度洋及南太平洋多热带风暴也有联系。由平均经圈环流分析指出,冬季风期间在80°一125°E存在着一个较完整的冬季风环流圈。 展开更多
关键词 越赤道气流 冬季风 季风 北半球
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鸡全胚成纤维细胞在鸡痘细胞活疫苗生产中的应用 被引量:3
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作者 齐铁英 张亚华 +7 位作者 南锡 陆明哲 佐颖 姜力 齐琳 南文龙 武佳斌 李鑫 《中国兽药杂志》 2002年第11期45-47,共3页
采用鸡胚全部组织(全胚法)制备鸡胚成纤维单层细胞和采用鸡胚部分组织(常规法)制备鸡胚成纤维单层细胞生产了鸡痘细胞活疫苗,接毒后均产生大量的感染多核细胞和典型细胞融合性病变(胡椒粒样)。鸡胚效价检测表明,鸡痘细胞苗和鸡痘组织苗... 采用鸡胚全部组织(全胚法)制备鸡胚成纤维单层细胞和采用鸡胚部分组织(常规法)制备鸡胚成纤维单层细胞生产了鸡痘细胞活疫苗,接毒后均产生大量的感染多核细胞和典型细胞融合性病变(胡椒粒样)。鸡胚效价检测表明,鸡痘细胞苗和鸡痘组织苗均可引起鸡胚绒毛尿囊膜水肿、增厚或痘斑,但鸡痘细胞苗产生痘斑数量明显高于鸡痘组织苗。鸡体刺种结果表明,鸡痘细胞苗诱发的免疫反应(发痘)好于鸡痘组织苗;与常规法相比,全胚成纤维单层细胞制备方法可提高鸡胚利用率2倍以上。全胚法也可应用于制备其他鸡成纤维细胞疫苗。 展开更多
关键词 鸡全胚成纤维细胞 鸡痘细胞活疫苗生产 应用
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中药黄芩苷对鸡胚成纤维细胞的安全浓度和生长的影响
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作者 丁婵 褚秀玲 苏建青 《中国兽药杂志》 北大核心 2017年第1期35-40,共6页
为了研究中药黄芩中有效成分黄芩苷对鸡胚成纤维细胞(CEF)生长的影响,应用细胞病变观察法(CPE)观察黄芩苷对CEF细胞生长的影响,并采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定黄芩苷对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度。黄芩苷浓度在312.5μg/m L时... 为了研究中药黄芩中有效成分黄芩苷对鸡胚成纤维细胞(CEF)生长的影响,应用细胞病变观察法(CPE)观察黄芩苷对CEF细胞生长的影响,并采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定黄芩苷对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度。黄芩苷浓度在312.5μg/m L时为最大安全浓度,低于此浓度时黄芩苷能促进CEF的贴壁及生长,细胞生长良好,呈梭形,折光性强。结果表明,黄芩苷在中、低浓度能促进CEF细胞的贴壁和生长且对CEF细胞的作用都具有时效性,应用细胞病变观察法与MTT法,最终得出黄芩苷对CEF的最大安全浓度为312.5μg/m L。 展开更多
关键词 黄芩苷 cef细胞 安全浓度
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pSecTag-EGFP真核表达载体的构建及其转染鸡胚胎成纤维细胞条件的优化
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作者 杨娜娜 史卫峰 +2 位作者 崔英杰 赵晓民 杜立新 《泰山医学院学报》 CAS 2007年第8期586-588,共3页
目的构建含报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体pSecTag-EGFP,用以研究pSecTag/HygroB转染鸡胚胎成纤维细胞的转染效率,为目的基因的成功表达奠定基础。方法用PCR方法克隆得到EGFP基因,通过酶切、连接、转化构建pSecTag... 目的构建含报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体pSecTag-EGFP,用以研究pSecTag/HygroB转染鸡胚胎成纤维细胞的转染效率,为目的基因的成功表达奠定基础。方法用PCR方法克隆得到EGFP基因,通过酶切、连接、转化构建pSecTag-EGFP分泌型真核表达载体,设计优化实验,通过脂质体介导的方法转染鸡胚胎成纤维细胞,在荧光显微镜下直接观察该基因的表达。用B radford法检测不同组合的细胞培养液中的EGFP蛋白的相对含量。结果脂质体介导的方法能有效转染鸡胚胎成纤维细胞,实验中EGFP蛋白相对表达量随质粒量的增加而明显升高(P<0.01)。其中脂质体2μl、质粒1.0μg时目的蛋白相对表达量最高。结论pSecTag-EGFP质粒构建成功,并成功优化了转染条件。 展开更多
关键词 真核表达载体 鸡胚胎成纤维细胞 增强绿色荧光蛋白 脂质体 转染
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不同接毒方法培养鸡痘细胞苗维持液与细胞内病毒含量的测定 被引量:1
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作者 袁建琴 高斌战 《山西农业大学学报(自然科学版)》 CAS 2007年第3期308-311,共4页
以同步接毒和异步接毒培养鸡痘细胞苗,在其他条件相同前提下,发现同步接毒维持液的pH变化、细胞病变与异步接毒存在一定差异。为明确两种接毒法对病毒增殖效果的影响,本试验分别对维持液和病变细胞的毒价进行了监测。经过试验测得同步... 以同步接毒和异步接毒培养鸡痘细胞苗,在其他条件相同前提下,发现同步接毒维持液的pH变化、细胞病变与异步接毒存在一定差异。为明确两种接毒法对病毒增殖效果的影响,本试验分别对维持液和病变细胞的毒价进行了监测。经过试验测得同步接毒法的细胞内含毒量明显高于异步接毒法。 展开更多
关键词 鸡痘苗 细胞苗 鸡胚成纤维细胞 同步接毒法 异步接毒法
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玉屏风多糖体外抗新城疫病毒效果的研究 被引量:8
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作者 戴超月 蒋焱平 +4 位作者 郭彦 刘雨桐 杨鸿 计慧琴 邓桦 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第7期30-33,共4页
以新城疫病毒(NDV)感染鸡胚和鸡胚成纤维细胞,探索玉屏风多糖(Yupingfeng polysaccharides YPF-P)及其含药血清的抗病毒效果。SPF兔采用500 mg/kg体重YPF-P灌服给药,于第1、3、5、7天采集全血,制备不同浓度含药血清;培养SPF鸡成纤维细胞... 以新城疫病毒(NDV)感染鸡胚和鸡胚成纤维细胞,探索玉屏风多糖(Yupingfeng polysaccharides YPF-P)及其含药血清的抗病毒效果。SPF兔采用500 mg/kg体重YPF-P灌服给药,于第1、3、5、7天采集全血,制备不同浓度含药血清;培养SPF鸡成纤维细胞(CEF),分别加入不同浓度的YPF-P及其含药血清,进行细胞毒性试验;采用先加多糖后加病毒、先加病毒后加多糖、多糖和病毒感作后同时加入的3种给药方式,观察YPF-P及其含药血清对病毒的阻断、抑制和直接杀灭作用。结果与正常对照组相比,不同浓度YPF-P(0.625、1.25、2.5、5、10 mg/m L)和7 d的YPF-P含药血清的CEF细胞活性均显著增强(P<0.05或P<0.01)。CEF培养24 h后,YPF-P抑制病毒作用明显,与NDV对照组相比差异极显著(P<0.01);3种给药方式与NDV对照组相比,含药血清组细胞活性均极显著升高(P<0.01)。表明YPF-P及其含药血清均对CEF无毒副作用,且可显著增强细胞活性;YPF-P及其含药血清有较好的抑制病毒毒性的作用。 展开更多
关键词 玉屏风多糖 含药血清 细胞活力 抗病毒
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3种细胞培养流感病毒的比较 被引量:9
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作者 杨琴 张兴晓 杨灵芝 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第11期76-79,共4页
将流感病毒分别接种于鸡胚成纤维细胞(CEF)、Vero和MDCK细胞,并改变细胞维持液中FBS浓度,然后检测胰酶的用量、细胞培养流感病毒的最佳时间、细胞接种病毒最佳吸附时间和接种剂量、收获细胞液后的血凝素(HA)滴度。结果表明,胎牛血清对... 将流感病毒分别接种于鸡胚成纤维细胞(CEF)、Vero和MDCK细胞,并改变细胞维持液中FBS浓度,然后检测胰酶的用量、细胞培养流感病毒的最佳时间、细胞接种病毒最佳吸附时间和接种剂量、收获细胞液后的血凝素(HA)滴度。结果表明,胎牛血清对病毒的繁殖有明显抑制作用;加入约4μg/mL的胰酶可提高病毒产量。最佳收获时间为60 h^72 h,吸附时间为90 min,接种剂量为0.1 mL/L;CEF、MD-CK细胞上病毒HA滴度高于Vero细胞。 展开更多
关键词 鸡胚成纤维细胞 VERO细胞 MDCK细胞 流感病毒
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Choice for host-specific high-adhesive <i>Lactobacillus</i>strains
16
作者 Xueyan Lin Zhonghua Wang +2 位作者 Zhongxiang Niu Hongjie Liu Yun Wang 《Advances in Bioscience and Biotechnology》 2012年第2期149-152,共4页
Adhesive ability was tested in seven Lactobacillus solated from the chicken digestive tract after cultivation with CaCo-2 cells (intestinal epithelial cells), MDCK (dog kidney) cells and CEF (chicken embryo fiber) cel... Adhesive ability was tested in seven Lactobacillus solated from the chicken digestive tract after cultivation with CaCo-2 cells (intestinal epithelial cells), MDCK (dog kidney) cells and CEF (chicken embryo fiber) cells. We noted the following important observations regarding the adhesive ability between different Lactobacillus strains and three cell types: the adhesive interaction between the SDnB7, SDnE1 and SDnA3 lactobacillus strains and CaCo-2cells was greater compared to controls, the adhesive effect between SDnB1 and CEF cells was also greater than controls and Lactobacillus showed only minimal adherence to MDCK cells. Incubation time also affected Lactobacillus adherence to CaCo-2cells: adhesive ability was optimal at 37°C when incubated for 2 days and this was confirmed by a local increase in the concentration of Lactobacillus around CaCo-2 cells when incubated for 24 h as opposed to 3 h. Adherence ability in lactobacillus was also tested at various concentrations (108, 107, 106, 105 and 104 ). The number of Lactobacillus that adhered around the cells was significantly increased in the treatment with 108 bacterial cells. Transmission electron microscopy revealed that the cellularity of the junction between CaCo-2cells and Lactobacillus was not compromised. Transmission electron microscopy also revealed that the thalli fabric structure remained intact. 展开更多
关键词 HOST SPECIFIC CaCo-2cells MDCK cellS cef cellS High Adhesion LACTOBACILLUS
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鸡胚成纤维细胞ATP合成酶β亚基基因的克隆与测序
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作者 吾鲁木汗·那孜尔别克 黄菊英 恩特马克·布拉提白 《伊犁师范学院学报(自然科学版)》 2020年第2期42-47,共6页
用MEM培养基对CEF细胞进行培养,采用RNA提取试剂盒提取CEF细胞总RNA,通过RT-PCR技术扩增编码ATP合成酶β亚基的ATP5B基因片段,将其克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,PCR技术鉴定重组载体后,测定ATP5B基因的核苷酸序列.... 用MEM培养基对CEF细胞进行培养,采用RNA提取试剂盒提取CEF细胞总RNA,通过RT-PCR技术扩增编码ATP合成酶β亚基的ATP5B基因片段,将其克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,PCR技术鉴定重组载体后,测定ATP5B基因的核苷酸序列.结果表明,CEF细胞ATP5B基因长度为1401 bp,编码466氨基酸残基的多肽,与在GenBank数据库中已报道不同鸟类ATP5B基因序列的同源性在86.91%~99.64%之间.克隆的CEF细胞ATP5B基因,为进一步开展ATP5B基因的表达、纯化及其致病机理研究奠定了基础. 展开更多
关键词 cef细胞 ATP合成酶β亚基 基因克隆 DNA测序
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去泛素化酶UL36的抑制剂LDN57444抑制马立克氏病病毒的增殖 被引量:3
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作者 王文婧 范青松 +7 位作者 刘宇航 王婷 邓国辉 谢知航 王梦涵 吕岩 许家翠 艾永兴 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1949-1957,共9页
马立克氏病病毒(MDV)引起的鸡马立克氏病(MD)可用疫苗进行防御,但疫苗无法阻止MDV对鸡的感染以及MDV的传播和毒力的增强,MD仍为养禽业的重要威胁。而抑制细胞内MDV增殖是增强疫苗防御效果的重要策略,化学药物无疑是重要的选择之一。本... 马立克氏病病毒(MDV)引起的鸡马立克氏病(MD)可用疫苗进行防御,但疫苗无法阻止MDV对鸡的感染以及MDV的传播和毒力的增强,MD仍为养禽业的重要威胁。而抑制细胞内MDV增殖是增强疫苗防御效果的重要策略,化学药物无疑是重要的选择之一。本研究在前期研究基础上,以MDV编码的去泛素化酶UL36为靶点,经高通量筛选,从蛋白酶抑制剂库中筛选出对UL36去泛素化酶的活性具有抑制作用的化合物LDN57444,应用酶抑制动力学方法揭示,LDN57444以非竞争性方式抑制UL36去泛素化酶活性,IC_(50)为3.10μmol/L。同源建模结合分子对接分析发现,LDN57444结合于UL36-480的C末端口袋中,通过氢键、Pi-Sigma作用、Pi-Pi堆积作用、Pi-Alkyl作用等方式与UL36-480互作,进而抑制UL36-480的活性。进一步在细胞水平,应用MDV致CEF的CPE模型分析LDN57444对MDV在CEF细胞中的增殖的抑制作用,结果发现,5,20μmol/L的LDN57444可显著抑制CPE的形成,并抑制MDV在CEF细胞内的增殖(P<0.01)。同时,应用MD鸡模型分析LDN57444是否可以抑制MDV在鸡体内的增殖,结果发现,每日高于0.5 mg/kg给药可显著抑制MDV在鸡体内的增殖(P<0.01)。本研究结果表明,化合物LDN57444可以抑制MDV在细胞及动物体内增殖,为进一步研制抗MD药物提供了可靠的依据。 展开更多
关键词 去泛素化酶UL36 马立克氏病病毒 抑制剂LDN57444 cef细胞
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