miR-325-3p通过CCL19基因调控非小细胞肺癌脑部转移的发展

目的:探索非小细胞肺癌患者发生脑部转移的分子机制。方法:采用2个独立的分析数据来源(GEO公共数据库芯片和临床募集非小细胞肺癌患者样本)寻找最为显著的差异基因和差异miRNA。定量PCR方法检测差异基因在非小细胞肺癌脑部转移患者和无脑部转移患者中的差异性。利用非小细胞肺癌细胞系A549,检测靶点基因对于肺癌细胞增殖、分化、凋亡以及侵袭的影响,并进一步研究下游分子通路。结果:与非小细胞肺癌无脑部转移患者相比,非小细胞肺癌脑部转移患者呈现352个差异性表达基因,其中CCL19基因差异性最显著(低表达,P<0.01)。CCL19是miR-325-3p的主要候选靶标。CCL19在非小细胞肺癌脑部转移组患者肺部组织中存在低表达,而miR-325-3p存在高表达。荧光素酶实验可以证实miR-325-3p直接调控CCL19的表达活性。miR-325-3p抑制剂转染后,A549细胞的侵袭、增殖和集落形成有了显著的降低(P<0.05),而细胞凋亡水平有了明显的增加。同时转染CCL19 siRNA可以有效地降低miR-325-3p抑制剂对于非小细胞肺癌细胞的调节功能。研究表明,CCL19主要通过调节下游Erk的磷酸化水平影响肺癌细胞功能调控。结论:初步证实,miR-325-3p作为致癌基因,通过调控CCL19的功能,继而影响下游Erk分子信号,最终控制肺癌细胞的侵袭、增殖和集落形成。

五味子苷B调控miR-370-3p/CCL3轴对幼年肺炎小鼠免疫炎症因子水平的影响

目的:探讨五味子苷B(Sch B)在幼年肺炎小鼠的作用机制。方法:将90只幼年雄性小鼠随机分为对照组、模型组、Sch B低剂量组(Sch BL组)、Sch B高剂量组(Sch BH组)、Sch BH+antagomir-NC组、Sch BH+miR-370-3p antagomir组各15只。Sch BL组和Sch BH组小鼠分别灌胃20、60 mg/kg的Sch B;Sch BH+antagomir-NC组和Sch BH+miR-370-3p antagomir组,先将1 nmol的miR-370-3p antagomir、antagomir-NC用20μL的磷酸盐缓冲液(PBS)溶解,在Sch B灌胃后将miR-370-3p antagomir、antagomir-NC质粒分别经尾静脉注射到小鼠体内;对照组和模型组给予等量生理盐水。每天1次,持续给药7 d。测定各组小鼠肺组织的湿干质量比;采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肺组织的病理形态;检测各组小鼠肺组织中炎症因子水平;流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群;实时定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肺组织中miR-370-3p和CCL3的mRNA水平;双荧光素酶实验验证miR-370-3p与CCL3的靶向关系。结果:与对照组相比,模型组幼鼠肺组织结构紊乱,肺泡壁变厚,出现大量炎性细胞浸润,组织受损严重,肺组织湿干质量比、CD8^(+)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、CCL3 mRNA水平均升高,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、miR-370-3p水平均降低(P均<0.05)。与模型组相比,Sch BL组和Sch BH组幼鼠肺组织中肺泡壁变薄,炎性细胞浸润明显减少,损伤减轻,肺组织湿干质量比、CD8^(+)、TNF-α、IL-6、CCL3 mRNA水平均降低,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、miR-370-3p水平均升高(P均<0.05)。加入miR-370-3p antagomir进行回补实验,结果显示Sch B对肺炎幼鼠免疫功能和炎症保护作用被逆转,且CCL3 mRNA水平升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验验证了miR-370-3p与CCL3存在靶向关系。结论:Sch B能够通过靶向调节miR-370-3p/CCL3轴来增强幼年肺炎小鼠免疫功能,并抑制炎症反应。

miR-335-3p靶向调控CCL5在TNF-α诱导椎间盘退变中相关机制

目的探讨在炎性激活条件下的椎间盘退变(IDD)过程中miR-335-3p靶向调控趋化因子配体(CCL)5的机制及可能抑制IDD进展的方法。方法建立人髓核(NP)细胞的原代培养,肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导NP细胞,Trizol法获取NP细胞总RNA,随后对mRNA及miRNA进行高通量测序分析。对miR-335-3p靶向结合mRNA进行预测,结合STRING富集分析miRNA靶标基因,确定TNF-α影响NP细胞的关键基因。应用The Human Protein Atlas(https://www.proteinatlas.org/)分析CCL5及其下游调控蛋白受体趋化因子受体(CCR)5基因在免疫相关细胞中的表达水平。应用Targetscan预测miR-335-3p与CCL53′UTR序列的靶向结合位点。结合promega的双荧光素酶报告系统使用turner仪器进行测量。将人NP细胞分成:Control组(NP细胞)、TNF-α组、mimic-NC组、miR-335-3p mimic组。使用Lipofectamine RNAiMAX将miR-335-3p mimic或miR-NC寡核苷酸序列转染入人NP细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测miR-335-3p的表达情况。Western印迹实验检测NP细胞外基质相关蛋白的表达水平。结果与Control组比较,TNF-α组miR-335-3p基因表达水平显著下调(P<0.01),CCL5基因表达水平显著上调(P<0.01);miR-335-3p mimic组miR-335-3p表达水平较mimic-NC组显著上调(P<0.01),CCL5表达水平显著较mimic-NC组下调(P<0.01)。与Control组比较,TNF-α组生长分化因子(GDF)5和性别决定区Y框蛋白(SOX)9蛋白显著下调,而基质金属蛋白酶(MMP)2蛋白表达水平显著上调(P<0.01);与mimic-NC组比较,miR-335-3p mimic组MMP2蛋白表达水平显著下调,而GDF5和SOX9蛋白显著上调(P<0.01)。结论miR-335-3p在TNF-α诱导的炎症条件下可特异性下调CCL5,从而逆转TNF-α诱导的软骨生成因子SOX9的异常表达。

CCL18-PITPNM3配体受体轴在头颈鳞状细胞癌侵袭转移中的作用及分子机制研究

目的探讨CCL18-PITPNM3(CC chemokine ligand 18-phosphatidylinositol transfer protein 3,CCL18-PITPNM3)配体受体轴在头颈鳞状细胞癌侵袭转移中的作用及其分子机制。方法采用人重组蛋白CCL18处理头颈鳞状细胞癌Tu686、6-10B细胞,siRNA下调PITPNM3的表达,通过CCK-8(cell counting kit-8)、平板克隆实验、流式周期检测生长增殖能力的变化,划痕愈合实验、Transwell侵袭小室实验检测体外迁移侵袭能力的改变,qRT-PCR、Western blot检测EMT分子标志物的表达情况。结果①rhCCL18处理头颈鳞状细胞癌Tu686、6-10B细胞后,细胞划痕愈合率增加,穿过Transwell聚碳酸酯膜的细胞明显增多,rhCCL18处理siRNA下调PITPNM3的Tu686、6-10B细胞,下调组细胞的迁移和侵袭能力较亲本细胞处理组明显减弱;②rhCCL18处理头颈鳞状细胞癌Tu686、6-10B细胞,mRNA水平E-cadherin表达降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin表达升高;蛋白质水平E-cadherin表达降低,Vimentin表达升高。下调两株细胞的PITPNM3表达后rhCCL18再次处理,E-cadherin下调和Vimentin、N-cadherin、Fibronectin上调均未显示出亲本细胞的明显趋势;③rhCCL18处理和下调PITPNM3对Tu686、6-10B 6组细胞的生存率、增殖及细胞周期无明显变化。结论CCL18-PITPNM3配体受体轴可促进头颈鳞状细胞癌的体外侵袭转移能力,可能与EMT转化相关。

CEM-3覆铜板发展前景及对电子玻纤纸的要求

介绍了CEM-3覆铜板的组成结构与特点,分析了CEM-3覆铜板的市场发展前景与技术发展前景及目前玻纤湿法毡的产能情况,重点阐述CEM-3覆铜板对电子玻纤纸的内在质量、表观质量、均匀性、抗拉强度与湿强度等要求。就电子玻纤纸当前的技术标准与技术发展动态给电子玻纤纸行业提出了改进的建议。

肝再生磷酸酶-3、趋化因子CCL26和肿瘤相关性巨噬细胞在结肠癌患者中的表达及其对预后的影响

目的观察肝再生磷酸酶-3（PRL-3）、趋化因子（CCL26）与肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）在结肠癌组织中的表达及对患者预后影响。方法免疫组织化学分析结肠癌患者83例，检测I～Ⅳ期结肠癌组织PRL-3、CCL26和TAMs表达；Kaplan．Meier法对比分析各组患者的生存情况；迁移实验分析CCL26对TAMs迁移作用。结果免疫组织化学分析显示结肠癌患者随着肿瘤分期TNM进展，PRL-3，CCL26与TAM8逐渐升高，在I期结肠癌中三者表达阳性率为（25％、20％、15％），在Ⅳ期肝转移灶中，三者阳性率分别为（94．7％、89．4％、78．9％，P〈0．01）。Kaplan-Meier生存曲线统计分析各蛋白对患者生存影响，PRL-3、CCL26和TAMs阳性的结肠癌患者其术后总生存期明显较阴性组低（P〈0．001）。迁移实验显示随着CCL26浓度递增对TAMs有明显趋化作用（P〈0．01）。结论PRL-3能促进结肠癌组织分泌CCL26，趋化TAMs聚集，促进结肠癌进展，降低患者总的生存期。

高导热型CEM-3覆铜板的开发与研究

研究了采用提高聚合物结晶度和填充无机绝缘导热填料的方法,开发出一种具有良好导热性的CEM-3复合基覆铜板。

HPP对Cl_4致大鼠肝脏灌流损伤的影响

对离体大鼠肝脏进行灌流，用ＣＣｌ４造成肝细胞损伤，观察了２－乙基－３－羟基－６－苯硫基－４（１Ｈ）－吡啶酮（ＨＰＰ）对 ＣＣｌ４诱发的大鼠肝脏灌流损伤的影响，结果表明 ＨＰＰ对 ＣＣｌ４引发的肝细胞损伤导致丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、天门冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的升高有明显的抑制作用．提示 ＨＰＰ对离体大鼠肝脏的损伤有抑制作用．

脉冲辐解研究类胡萝卜素与CCl_3OO的反应

通过脉冲辐解研究CCl_3OO,与胭脂树橙（BIX）,β-胡萝卜素（β-C）及番茄红素（LYC）在水/醇均相混液中反应.在与CCl_3OO反应过程中,类胡萝卜素本底吸收位置（BIX在500nm左右,β-C在450nm左右,LYC在500nm左右）有明显的漂白,BIX与β-C在650nm左右有反应产物生成过程的吸收峰出现.BIX和β-C与CCl_3OO反应的二级反应速率常数分别为1.78×10~8与7.8×108mol^(-10)·dm^3·s^(-1),LYC与CCl3OO反应只观察到漂白过程,表明LYC与CCl^3OO反应产物在检测范围内没有特征吸收,根据漂白过程求得二级反应速率常数为4×10~7mol~/(-1)·dm^3·s^(-1).

多响应锆基金属有机框架荧光传感器对Fe^3+,Cr2O7^2-离子和有机小分子的识别

以2,2’,2"-[(1,3,5)-三嗪-2,4,6-三亚胺基]三苯甲酸(L)和ZrONO3·2H2O为原料,在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)/H2O中合成了一种新的锆基金属有机框架荧光传感器(Zr-MOF).系统地研究了Zr-MOF对水溶中的Fe^3+和CrO3^2-离子的荧光响应,其猝灭常数(Ksv)分别为9.54×10^4,1.75×10^4 L·mol^-1,检测限(LOD)分别为3.78×10^-8,9.12×10^-7 mol/L.同时也研究了Zr-MOF对DMF溶液中的丙酮、CCl4和二甲苯的荧光识别,其猝灭常数(Ksv)分别为6534.3,4325.7,4025.1mL^-1,检测限(LOD)分别为1.09×10^-6,2.73×10^-5和3.17×10^-5 mL.通过FTIR、1H NMR、TAG、PXRD和元素分析等对Zr-MOF进行表征.结果表明,Zr-MOF在沸水和不同pH值溶液中,结构具有较高的稳定性,但其荧光强度在不同的pH值溶液中呈现一定的变化规律.水样和尿样检测证明,Zr-MOF可作为荧光传感器应用到实际溶液检测中.模拟实验表明,Zr-MOF对丙酮,CCl4和二甲苯有较高的选择性和灵敏度.

络合萃取3-氯苯酚的平衡研究

3-氯苯酚(3-Chlorophenol,3-CP)是一种重要的化工原料,但也是一种毒性较大的环境污染物.本文使用最常用的萃取剂——磷酸三丁酯(TBP)为络合剂,四氯化碳为稀释剂,详细探讨了磷酸三丁酯萃取3-氯苯酚的平衡时间、络合剂种类和浓度、体系的pH、溶质浓度等因素对萃取效果的影响;还比较了四氯化碳、磺化煤油对萃取分配比(D)的影响;同时使用红外光谱定性分析了其络合萃取过程,并建立了萃取模型.实验发现:在常温下,振荡频率为(200±10)rpm,振荡2h,即可达到萃取平衡.与三烷基胺和2-乙基己基膦酸单2-乙基己基酯相比,TBP是萃取3-氯苯酚最好的萃取剂;且萃取分配比随萃取剂浓度的增大而增大.体系的pH是影响萃取效率的关键因素,在pH3~4.5范围内其萃取效果最好.四氯化碳作为稀释剂比磺化煤油好.分配比随溶质3-氯苯酚浓度的减小而增大,这也正是络合萃取的优势.红外光谱分析表明,TBP萃取3-氯苯酚是氢键作用机理,体系的pH不影响萃取机制.根据实验结果和萃取机理,建立了萃取模型,其表观络合萃取反应平衡常数为316.8L·mol-1.本研究结果不仅为萃取理论的发展提供了数据,同时也为3-氯苯酚的提纯及工程处理含酚废水、乃至酸性有机废水的治理提供了参考依据.

2010—2013年上海市闵行区生活饮用水中2种挥发性卤代烃的监测

目的探讨2010—2013年上海市闵行区不同水文期生活饮用水中三氯甲烷(CHCl3)和四氯化碳(CCl4)2种挥发性卤代烃(THMs)含量的变化趋势,为改善饮用水质量提供科学依据。方法分别采集2010—2013年闵行区不同水文期(枯水期、丰水期、平水期)出厂水、管网水、二次供水水样,用顶空-气相色谱法测定CHCl3、CCl4,保留时间定性,峰面积定量。结果共采集水样930份,利用方差分析比较2种THMs在不同年份、水文期和水样类型中的差异,CHCl3的含量在不同年份(F=6.43,P<0.01)、不同水文期(F=40.4,P<0.01)、不同水样类型(F=23.66,P<0.01)的差异均有统计学意义。CCl4的含量在不同年份差异无统计学意义(F=1.819,P>0.05),在不同水文期(F=8.42,P<0.01)和不同水样类型(F=5.93,P<0.01)的差异均有统计学意义。结论闵行区生活饮用水中CHCl3含量逐年升高,CCl4变化趋势不显著;CHCl3在不同水文期的含量比较为丰水期>平水期>枯水期,CCl4含量在丰水期最高,平水期和枯水期差异无统计学意义。CHCl3在不同水样中含量比较为出厂水>二次供水>管网水,CCl4含量为二次供水>管网水>出厂水。

水通道蛋白-1在肝硬化腹水大鼠腹膜上的表达

Objective To investigate the changes of aquaporin （AQP-1） expressions on peritonea in liver cirrhotic rats with ascites,and to study the correlation between AQP-1 expressions and ascites form.Methods32 healthy Sprague-Dawley（SD） rats were divided into two groups randomly, 20 rats were used to produce liver cirrhotic models induced with phenobarbitol sodium and CCl4. The distribution and protein expressions of AQP-1 on the rats′ peritonea were measured with immunohistochemistry assay, and the expressions of APQ-1 mRNA were tested with relative GAPDH quantitative RT-PCR. Results （1）The expressions of AQP-1 were mainly on the endothelial cells of capillary vessels and venules on the rats′ peritonea, and also on mesothelial cells. （2）There was no statistically significant difference between the expressions of AQP-1 protein and mRNA in the two groups on the early stage of liver cirrhosis. （3） Downregulations of the expressions of AQP-1 protein and mRNA were observed in B group on the advanced cirrhotic stage.Conclusion Expressions of AQP-1 were downregulated on the peritonea of rats with decompensated liver cirrhosis, which may play a role in the formation of ascites. The changes of AQP-1 Expressions on peritoneal mesothelial cells which were fewer than those on the endothelial cells may be few relations to ascites form.

巨噬细胞炎性蛋白-1α联合4-1BB配体降低肝癌细胞体内致瘤性研究

目的观察巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP1α）联合4-1BB配体（4-1BBL）对肝癌细胞体内致瘤性的影响。方法以小鼠4-1BBL（m4—1BBL）重组逆转录病毒感染Hepa1-6小鼠MIP-1α（mMIP-1α），筛选并扩增抗性克隆，以流式细胞术检测m4—1BBL的表达，绘制并比较mMIP-1α和m4—1BBL同时或单独表达的Hepa1—6细胞的生长曲线。C57B／L小鼠随机分为7组，每组9只，各组分别接种Hepa1-6mMIP-1α＋m41BBL、Hepa1-6m4—1BBL、Hepa1-6mMIP-1α、Hepa1-6pBabepuro、Hepa1-6、Hepa1-6pLXSHD和PBS，观察比较各组肝癌细胞的致瘤性，比较各组小鼠的存活率。结果成功获得同时表达mMIP1α和m4—1BBL的小鼠肝癌细胞Hepa1—6mMIP—1α＋m4—1BBL，mMIP-1α和m4—1BBL同时或单独表达不影响Hepa16的生长曲线。观察5周，Hepa1-6mMIP-1α＋m4—1BBL接种的小鼠均未生长肿瘤，Hepa1-6mMIP-1α＋m4—1BBL的体内致瘤性低于Hepa1-6mMIP-1α和Hepa1—6m4—1BBL。接种Hepa1-6mMIP1α＋m41BBL的小鼠12周末存活率（9／9）高于接种Hepa1-6m41BBL小鼠（6／9）和Hepa1-6mMIP-1α小鼠（1／9）。结论趋化因子MIP-1α联合共刺激分子4-1BBL降低了肝癌细胞体内致瘤性，并使小鼠的生存期延长。