花生CEM1基因的克隆及表达载体构建

通过规模测序和生物信息学分析,从花生荚果不同发育时期全长cDNA文库中筛选出MADSbox家族的一个cDNA全长序列,命名为CEM1基因(GenBank登录号为EY396043)。该基因全长1 061 bp,包含762 bp的开放阅读框,编码253个氨基酸,蛋白质的分子量为29.405 ku,等电点(pI)为9.18。蛋白质信号肽分析和疏水性分析表明,该基因编码的蛋白质信号肽剪切的可能性很小,具有亲水性。同时构建CEM1基因的VIGS表达载体,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

花生不同部位CEM1基因表达特征分析

在花生荚果和种子不同发育时期全长cDNA文库中,通过对规模测序和生物信息学分析,筛选出MADS-box家族的一个cDNA全长序列,命名为CEM1基因。半定量RT-PCR技术分析表明,CEM1基因仅在花生生殖器官里表达,特别是果皮里表达丰富,在幼果里有大量表达,而果针里有少量表达,在根、茎、叶里无表达,初步分析该基因可能与花生果皮发育相关。

CNIS supports CEM11

Under the auspices of CNIS,the forum on promoting the improvement of industrial energy efficiency and the use of clean energy was held virtually on September 15,2020,as part of the Clean Energy Ministerial 11(CEM11).The event was attended by representatives from some 30 countries,regions and international organizations.

微小RNA⁃34a调控儿童急性淋巴细胞白血病细胞CEM/C1生长和迁移的分子机制研究

目的研究微小RNA⁃34a(miR⁃34a)对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞CEM/C1增殖、迁移的影响以及可能作用机制。方法选取重庆市第十三人民医院血液科2017年10月至2018年12月住院32例ALL病儿骨髓样本。另选取该院同期25例原发性血小板减少症病儿的骨髓样本作为对照组。实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)检测miR⁃34a在ALL骨髓样本的表达量;CEM/C1细胞按随机数字表法分为对照组、阴性对照(NC)组、miR⁃34a组;对照组细胞常规培养,NC组和miR⁃34a组CEM/C1细胞分别在Lipofectamine 2000介导下转染阴性对照质粒以及miR⁃34a模拟物,qPCR检测转染效率;细胞计数试剂盒8(CCK⁃8)实验检测CEM/C1细胞的增殖,Transwell检测细胞迁移;在线软件TargetScan预测miR⁃34a与Krüppel样因子4(KLF4)的靶向关系,双荧光素酶报告基因进一步进行验证。结果与对照组相比,ALL骨髓样本中miR⁃34a的表达量下调[(0.33±0.05)比(1.00±0.08),t=15.680,P<0.001]。与对照组(1.00±0.08)相比,NC组miR⁃34a的表达量(0.99±0.08)无明显变化,miR⁃34a组CEM/C1细胞中miR⁃34a的表达量(3.21±0.23)上调(F=423.135,P<0.05)。对照组、NC组、miR⁃34a组细胞培养48 h后细胞活性分别为(0.65±0.05)、(0.69±0.06)、(0.42±0.04),F=40.818,P<0.001;迁移细胞数分别为(142.36±12.47)个、(137.45±13.49)个、(79.89±6.23)个,F=57.683,P<0.001,差异有统计学意义。与NC与KLF4⁃wt共转染的细胞相比,miR⁃34a与KLF4⁃wt共转染的细胞荧光素酶活性[(0.45±0.03)比(1.00±0.06),t=20.083,P<0.001]降低;与NC与KLF4⁃mut共转染的细胞相比,miR⁃34a与KLF4⁃mut共转染的细胞荧光素酶活性差异无统计学意义[(1.03±0.07)比(1.01±0.07),t=0.495,P>0.05]。结论miR⁃34a在ALL中表达量下调,其可通过对靶基因KLF4的调控影响CEM/C1细胞增殖、迁移。