利用脂肪酸合成酶抑制剂和磷酸香草醛反应筛选高产油脂酵母菌

利用80MeV/u碳离子束对产油菌株粘红酵母进行辐照诱变,采用含有脂肪酸合成酶抑制剂cerulenin的培养基进行高产油脂突变株的初筛,并通过磷酸香草醛反应和氯仿甲醇抽提法对初筛菌株油脂含量进行分析。结果表明,cerulenin对酵母细胞生长有较好的抑制作用,浓度为8.96×10?6mol/L时,抑制率达98%以上,可作为筛选浓度。通过磷酸香草醛反应法对初筛菌体油脂含量进行定量分析,发现菌体油脂含量与该反应在530nm处的光吸收成线性正相关,初筛菌株的正突变率达65%以上。该方法快速方便,是一种较为理想的产油酵母筛选方法。通过该方法,筛选出了2株油脂含量高于对照90%以上的突变株。

脂肪酸合成酶与乳腺癌

脂肪酸合成酶(FAS)在包括乳腺癌在内的多种原发恶性肿瘤中表达增强。FAS过度表达与肿瘤侵袭性有关,研究FAS可为肿瘤化疗提供新的途径,具有重要的临床价值。Cerulenin和C75是FAS抑制剂,可能具有选择性抗肿瘤作用。

添加生物素和浅蓝菌素对裂殖壶菌发酵产DHA的影响

为提高发酵产量,根据裂殖壶菌生物合成二十二碳六烯酸(DHA)的途径,考察添加代谢途径关键酶的辅酶及酶的抑制剂对发酵裂殖壶菌的影响。结果表明:添加生物素可促进油脂积累,添加浅蓝菌素有利于DHA及不饱和脂肪酸含量的提高。添加生物素0.3 mg/L时,DHA占细胞干质量分数达11.26%,相对于对照提高了13%;当添加浅蓝菌素0.1mg/L时,DHA占细胞干质量分数可达12.2%。

浅蓝菌素在诱导骨肉瘤细胞株U2-OS凋亡过程中对Bcl-2和Bax的影响

目的研究凋亡蛋白Bcl-2、Bax是否参与浅蓝菌素(Cerulenin)诱发骨肉瘤细胞株U2-OS凋亡信号传导。方法采用Western-blotting检测Cerulenin作用前、后骨肉瘤细胞株U2-OS中凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达变化情况,了解不同的Cerulenin剂量和作用时间骨肉瘤细胞株U2-OS中凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达变化情况。结果骨肉瘤细胞株U2-OS中Bcl-2和Bax呈阳性表达,Cerulenin作用细胞株后Bcl-2表达量随着浓度增加和作用时间延长而递减,Bax表达量随着浓度增加和作用时间延长而递增。结论Cerulenin可能通过下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达而诱导骨肉瘤细胞凋亡。

乳腺癌中脂肪酸代谢的异常变化及其意义

目的 :探讨乳腺癌细胞中脂肪酸代谢的变化及抑制脂肪酸合成酶对乳腺癌细胞生长的影响及其作用机制。方法 :通过RT PCR方法对乳腺癌等四种肿瘤细胞株中FASmRNA的表达进行观察比较 ;应用MTT法观察脂肪酸合成酶抑制剂浅蓝霉素 (Cerulenin)对乳腺癌细胞MCF 7生长的影响 ;通过流式细胞仪检测细胞周期变化。 结果 :FASmRNA在乳腺癌细胞MCF 7中呈高表达。浅蓝霉素可抑制乳腺癌细胞MCF 7生长 ,2 .5、5、10和 2 0mg/L的浅蓝霉素作用 4 8h的抑制率分别为 (4 3.4 7± 4 .5 8) %、(6 2 .92± 2 .6 8) %、(81.93± 0 .91) %和 (6 7.7± 12 .2 7) % (与对照组比P <0 .0 5 )。软脂酸可以部分逆转浅蓝霉素对MCF 7细胞生长的抑制作用。流式细胞仪测定显示 ,浅蓝霉素引起MCF 7细胞发生G2 /M期阻滞。 4 8h组 ,浅蓝霉素 10mg/L使 (6 3.33± 18.31) %的MCF 7细胞阻滞于G2 /M期 (与对照组比P <0 .0 1)。 结论 :乳腺癌细胞中脂肪酸合成代谢增强 ,抑制脂肪酸合成酶可诱导乳腺癌细胞发生G2 /M期阻滞 。

Inhibitor of fatty acid synthase induced apoptosis in human colonic cancer cells

INTRODUCTIONThe treatment of human epithelial malignancies islimited by drug resistance and toxic and side effects,which results in the failure in the treatment ofmajority of advanced cancer victims.To seek for anew,and specific antineoplastic therapy willprovide hope for tumor treatment.Althoughdisordered intermediary metabolism in cancer cellshas been known for many years,much of the

低产乙酸啤酒酵母菌株A12的选育及中试

以啤酒酿造生产菌株啤酒酵母JM-36为出发菌株,用甲基磺酸乙酯(EMS)诱变,用含浅蓝菌素的麦芽汁琼脂平板分离抗浅蓝菌素的突变株,在低温下发酵,以发酵液的乙酸、双乙酰、乙醛、高级醇、发酵度和凝聚性为筛选指标,得到1株发酵特性优良的菌株A12。以13°BX麦芽汁为培养基,用100L发酵罐在10℃下发酵14d,菌株A12发酵液的发酵度为68.2%,乙酸、双乙酰、乙醛和高级醇的含量分别为62.3mg/L、0.081mg/L、5.321mg/L和76.43mg/L。菌株A12的主要发酵特性优良且稳定,啤酒口感良好。

脂肪酸合成酶抑制剂对wistar大鼠免疫指标影响的研究

[目的]探讨脂肪酸合成酶抑制剂浅蓝菌素对wistar大鼠免疫指标的影响。[方法]腹腔注射浅蓝菌素,测定大鼠血清IL-2和INF-γ的变化及淋巴细胞转化率,在试验结束后测定胸腺和脾脏指数。[结果]与对照组和控制摄食组比较试验组IL-2水平显著升高(P﹤0.05),INF-γ水平、脾脏指数和淋巴细胞转化率显著高于控制摄食组,胸腺指数高于对照组和控制摄食组。[结论]浅蓝菌素可明显改善机体的免疫机能。

口腔鳞状细胞癌脂肪酸代谢的初步研究

目的观察舌鳞状细胞癌细胞株TCA-83脂肪酸代谢特点,探讨利用脂肪酸合成途径进行抗癌治疗的可能性.方法采用放射性同位素标记方法和液体闪烁测量方法观察TCA-83细胞和正常人牙龈成纤维细胞[3H]掺入细胞总脂质的量,通过MTT法观察脂肪酸合酶抑制剂-浅蓝菌素对TCA-83细胞的细胞毒性作用.结果①TCA-83细胞和正常人牙龈成纤维细胞[3H]掺入细胞总脂质的量分别为68±12.7cpm/2×105细胞和13±4.2cpm/2×105细胞,差异有显著性(P=0.011).②浅蓝菌素在浓度为2.5μg/ml时,对正常人牙龈成纤维细胞的细胞毒性较小,但对TCA-83细胞仍有明显的毒性.结论脂肪酸合成活性增高是口腔鳞状细胞癌重要的生化特征,浅蓝菌素对口腔鳞状细胞癌有选择性的细胞毒作用.本研究为通过脂肪酸合成途径来控制肿瘤细胞生长提供了参考.

浅蓝菌素联合表阿霉素对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖的抑制作用

目的研究浅蓝菌素(Cerulenin)增强表阿霉素(Epirubicin)对人骨肉瘤细胞(U2-OS)抑制作用。方法在体外表阿霉素和浅蓝菌素单独及联合作用于人骨肉瘤细胞U2-OS,MTT法检测其增殖抑制情况,金氏Q值评价联合用药效应。结果表阿霉素及浅蓝菌素均对人骨肉瘤细胞(U2-OS)有抑制作用;联合用药细胞抑制率明显增高,Q值分别为1.24(1μg/ml表阿霉素+1μg/ml浅蓝菌素)和0.96(10μg/ml表阿霉素+20μg/ml浅蓝菌素)。结论浅蓝菌素能增强表阿霉素对人骨肉瘤细胞(U2-OS)的抑制效应。

黄芩素在诱导骨肉瘤细胞株U2-OS凋亡过程中对Bax和Bcl-2 mRNA表达的影响

目的:研究黄芩素在诱导骨肉瘤细胞株U2-OS凋亡信号转导过程中对凋亡相关基因Bcl-2、Bax的影响。方法:采用RT-PCR检测黄芩素作用前、后骨肉瘤细胞株U2-OS中Bcl-2和Bax的mRNA表达变化情况,了解不同的黄芩素剂量和作用时间骨肉瘤细胞株U2-OS中凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达变化,并计算Bcl-2/Bax比值。结果:与骨肉瘤组相比,黄芩素作用组Bcl-2的mRNA表达随着浓度增加和作用时间延长而递减,Bax的mRNA表达随着浓度增加和作用时间延长而递增,Bcl-2/Bax比值下降。结论:黄芩素能通过下调Bcl-2的mRNA表达和上调Bax的mRNA表达而诱导骨肉瘤细胞凋亡。

NF-κB在脂肪酸合酶抑制剂诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡中的作用

目的 探讨 NF-κB在脂肪酸合酶抑制剂 ( FASI)诱导人结肠癌 Lo Vo细胞凋亡中的作用。方法 FASI—浅蓝菌素处理大肠癌 Lo Vo细胞株 ,四唑盐比色试验 ( MTT法 )、片断 DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪及荧光染色 ( AO/EB)等方法检测细胞调亡 ,用凝胶电泳迁移率法 ( EM-SA)检测 NF- κB活性。结果 Lo Vo细胞在 FASI作用下 ,细胞增殖被阻遏 ,并呈现剂量效应关系。同时诱导细胞发生凋亡。FASI对人成纤维细胞增殖无明显影响。NF- κB在不同浓度浅蓝菌素 ( 1 0 -9～ 1 0 -5)处理 Lo Vo细胞 1 2 h后 ,可抑制 NF- κB活性 ,其抑制程度呈剂量依赖性递减。结论FASI可能通过抑制 Lo Vo细胞内源性脂肪酸合成 ,诱发细胞凋亡来阻遏 Lo Vo的增殖。NF- κB可能参与 FASI诱导人结肠癌 Lo

浅蓝菌素对前列腺癌细胞株PC-3生长抑制的研究

目的:探讨脂肪酸合成酶(FAS)的抑制剂浅蓝菌素对前列腺癌细胞株PC-3的生长抑制作用。方法:采用人前列腺癌细胞株PC-3在体外实验中用MTT法观察浅蓝菌素对细胞株的生长抑制作用;流式细胞术(FCM)对细胞株的凋亡及细胞周期的变化进行检测;蛋白免疫印迹(W estern b lotting)法检测浅蓝菌素对PC-3细胞中FAS蛋白水平表达的影响。结果:PC-3细胞在浅蓝菌素的作用下,细胞增殖被明显阻遏,并呈现剂量效应关系,在浓度为2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L的浅蓝菌素作用下,PC-3细胞24h的抑制率分别为(34.78±2.47)%、(46.76±3.18)%、(58.13±3.55)%、(65.31±2.81)%,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪显示,细胞经浅蓝菌素作用后,细胞凋亡增多,PC-3细胞在浅蓝菌素浓度5.0mg/L三个时间组(24h,48h,72h)的细胞凋亡率分别为(28.29±1.88)%、(44.73±2.69)%、(61.25±1.43)%;且G0/G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例减少。蛋白免疫印迹实验中,随着浅蓝菌素作用时间的延长,PC-3细胞中的FAS蛋白水平表达量明显减少,药物作用时间与细胞中蛋白水平表达量呈负相关。结论:浅蓝菌素能抑制PC-3细胞生长,且其呈现时间和浓度依赖性。

浅蓝菌素脂质体的制备及其对肿瘤细胞体外增殖影响的研究

目的制备浅蓝菌素脂质体并研究其对HER2/neu(erbB-2)原癌基因过表达肿瘤细胞株体外增殖的影响。方法采用超声薄膜分散法制备浅蓝菌素脂质体;正交设计优化处方;HPLC法测定药物包封率及脂质体中药物浓度;离心加速实验及冷藏实验考察脂质体稳定性;活细胞计数法测定细胞生长曲线;MTT法测定游离浅蓝菌素及浅蓝菌素脂质体对细胞的增殖抑制作用。结果浅蓝菌素脂质体的平均粒径为134.3 nm,稳定性良好,最佳处方条件下药物包封率为(53.45±3.67)%,脂质体中药物质量浓度为(1.126±0.065)mg/mL,剂量依赖性抑制SK-B r3和SK-Ov3细胞的增殖,IC50分别为9.62和9.32μmol.L-1。结论该制备工艺和处方可行,所制备的浅蓝菌素脂质体对SK-B r3细胞和SK-Ov3细胞有明显的增殖抑制作用,且作用强于游离浅蓝菌素。

脂肪脂合酶与肿瘤

脂肪脂合酶(FAS)在恶性肿瘤中表达增高,酶活性增强。FAS的过度表达与肿瘤的发生、演变、侵袭、预后有关。了解肿瘤细胞中FAS的作用为肿瘤的诊断、治疗提供新的思路。浅蓝菌素、C75是FAS的抑制剂,是肿瘤药物治疗的的靶位。

脂肪酸合酶抑制剂对大肠癌细胞NF-κB活性的抑制作用

目的 探讨脂肪酸合酶抑制剂对大肠癌细胞NF κB活性的抑制作用。方法 用脂肪酸合酶抑制剂(FASI) 浅蓝菌素处理大肠癌LoVo细胞株 ,用凝胶电泳迁移率法 (EMSA)检测NF κB活性。结果 实验分别用不同浓度浅蓝菌素 (10 -9～ 10 -5M )处理LoVo细胞 12h后 ,可抑制NF κB活化 ,其抑制程度呈剂量依赖性递减 ,与对照组相比较浅蓝菌素 (10 -9～ 10 -5M )处理LoVo细胞 12h后NF κB条带扫描像素积分比分别为 0 .787,0 .45 1,0 .379,0 .338,0 .32 2。结论 浅蓝菌素处理人大肠癌LoVo细胞后 ,NF κB活化程度随浅蓝菌素的剂量递增而递减。提示浅蓝菌素对LoVo细胞NF κB活性的具有抑制作用。

脂肪酸合酶抑制剂阻遏人结肠癌细胞增殖的实验研究

目的：探讨脂肪酸合酶抑制剂对人结肠癌细胞增殖的影响。方法：应用细胞形态学、ＭＴＴ法及成集落实验方法进行检测和观察。结果：癌细胞在脂肪酸合酶抑制剂浅蓝菌素作用下，细胞增殖被阻遏，并呈现剂量—效应关系。同时发现癌细胞呈现细胞凋亡的形态学改变。凋亡细胞表现为细胞固缩，核染色质凝聚、边集或断裂。浅蓝菌素对人成纤维细胞增殖无明显影响。结论：脂肪酸合酶抑制剂可能通过抑制ＬｏＶｏ细胞内源性脂肪酸合成，诱发细胞凋亡来阻遏ＬｏＶｏ细胞的增殖。

浅蓝菌素对人结肠癌裸鼠移植瘤bcl-2及bax基因表达水平的影响

目的 :通过观察人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤bcl 2及bax基因表达水平 ,探讨脂肪酸合酶抑制剂浅蓝菌素选择性的抑瘤途径和机制。方法 :建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型 ,浅蓝菌素每公斤体重 160mg腹腔注射 ,1次·d-1,连续10d ,第 17天处死并解剖动物 ,瘤组织作免疫组织化学检测bcl 2及bax基因表达水平。结果 :浅蓝菌素处理组结肠癌LoVo细胞移植瘤bcl 2基因蛋白表达率为 68.5 % ;对照组bcl 2蛋白阳性表达率为 87.8% ,阳性细胞弥漫分布。两组间有显著性差异 (P <0 .0 1)。bax基因蛋白在浅蓝菌素组移植瘤组织阳性表达率为 75 .4% ,主要呈强阳性表达 ;对照组阳性表达率为 9.5 %。两组间比较有统计学差异 (P <0 .0 1)。结论 :浅蓝菌素可使结肠癌LoVo细胞移植瘤的bcl 2基因表达下调 ,bax基因表达增强 ,提示bcl 2及bax基因在浅蓝菌素诱导的人结肠癌LoVo细胞凋亡中可能起着重要的调控作用。

浅蓝菌素对人成骨肉瘤细胞U2-OS在裸鼠体内生长抑制的作用

目的研究浅蓝菌素(cerulenin)对人成骨肉瘤细胞U2-OS在裸鼠体内生长抑制作用。方法建立人成骨肉瘤细胞U2-OS BALB/C裸鼠瘤模型。18只成瘤裸鼠按随机数字表分成3组,每组6只;对照组(DMSO溶剂)、低剂量cerulenin组(0.2 mL cerulenin配制液40 mg.kg-1.次-1)、高剂量cerulenin组(0.2 mL cerulenin配制液80 mg.kg-1.次-1)于腹腔隔日注射连续6次。动态观察3组肿瘤体积及裸鼠质量变化,用药结束后18 d处死裸鼠,测量瘤重、计算瘤重抑制率,测量肿瘤体积、计算肿瘤体积抑制率。肿瘤组织行形态学观察。TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况。结果高、低剂量cerulenin组肿瘤体积抑制率分别为51.2%和24.2%,瘤重抑制率分别为49.1%和25.5%。各组间瘤体体积与瘤重比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。瘤体组织学显示cerulenin组较对照组出现明显的细胞凋亡的超微结构改变,瘤细胞体积较小,多数细胞微绒毛消失,胞质密度增高。TUNEL法显示高、低剂量cerulenin组,对照组癌细胞凋亡率为(17.1±1.2)%、(10.3±0.8)%、(3.5±0.5)%,3组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 cerulenin能够有效诱导人成骨肉瘤细胞U2-OS在裸鼠体内凋亡,抑制肿瘤的生长。

浅蓝菌素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的实验研究

目的 :观察浅蓝菌素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡作用 ,探讨浅蓝菌素抗癌的可能性。方法 :TCA 83细胞经浅蓝菌素 (10 μg/ml)处理 2 4h后 ,提取基因组DNA ,行DNA凝胶电泳。舌癌新鲜组织经浅蓝菌素(10 μg/ml)处理 2 4h后 ,行原位细胞凋亡染色 (TUNEL)。 结果 :DNA凝胶电泳得到典型的梯状DNA电泳图 ,TUNEL分析显示 ,浅蓝菌素处理组癌细胞凋亡率明显高于未经浅蓝菌素处理的癌细胞凋亡率 (P <0 .0 0 0 1) ,浅蓝菌素诱导高分化鳞状细胞癌凋亡的作用更强。结论 :浅蓝菌素可直接诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生凋亡 ,为脂肪酸合酶抑制剂的临床应用提供了直接的参考。