CFL2基因研究进展

CFL2(Cofilin2)基因是肌动蛋白结合蛋白cofilin家族的新成员,主要在哺乳动物的骨骼肌和心肌表达,被认为是肌肉组织肌动蛋白装配的调节器,对正常肌肉功能和肌肉再生起着重要的作用。目前未见对CFL2基因进行全面介绍的文章,因此拟对CFL2基因的表达、结构、蛋白功能及其与肌病相关性方面的研究进展作一综述。

CFL2基因半定量多重RT-PCR检测方法的建立

目的在CFL2基因功能的研究中,建立一种能检测CFL2基因mRNA表达水平的半定量多重RT-PCR体系。方法细胞总RNA经反转录合成cDNA,以GAPDH为内参与CFL2进行同管扩增,以常规PCR体系为参照对退火温度、Mg^(2+)、dNTP和循环数等参数进行优化并与常规组比较,建立了检测C2C12细胞CFL2基因半定量多重RT—PCR体系。结果CFL2和GAPDH的cDNA同时PCR扩增后电泳条带清晰,与预期产物大小一致,两对引物间无明显竞争,其扩增效率和特异性与单一基因的RT—PCR体系相同。结论成功建立CFL2基因半定量多重RT—PCR方法,有利于半定量检测CFL2 mRNA表达变化。

猪CFL2基因启动子的克隆及转录活性分析

Cofilins(CFL)包括CFL1和CFL2,是真核细胞中肌动蛋白结合蛋白家族的成员。哺乳动物CFL2基因主要在骨骼肌和心脏中表达,对肌纤维形成和肌肉再生具有重要作用。为了研究猪CFL2基因的转录,试验运用Genome walking对CFL2基因的主要转录起始位点上游2.5kb序列进行克隆;运用PCR扩增猪CFL2基因5′侧翼区的12个DNA片段,并插入荧光素酶报告载体pGL4.10构建重组载体;所有重组报告基因载体转染C2C12、NIH3T3或HeLa细胞,48h后分别测定其荧光素酶活性。生物信息学分析结果表明,该序列中存在2个TATA盒(-508和-453bp)、1个GC盒和1个CAAT盒;预测CFL2基因启动子区存在的转录因子结合位点有SP1、AP1、AP2和GATA-1。pGL4.10-1554(-1502^+51bp)的转录活性最高,启动子活性区域为-1502^-1317bp。本研究结果为进一步研究CFL2基因转录调控奠定基础。

CFL2基因新发位点变异致杆状体肌病1例

杆状体肌病是先天性肌病的一种,因肌肉病理检查发现杆状体结构而得名,由于基因变异导致骨骼肌细肌丝及相关组分受累引起,病变主要累及骨骼肌,心肌很少受累,临床表现以肌无力、肌张力减低为主。目前尚无特异性治疗方法,治疗目标主要是改善症状,提高生存质量。本文报道1例CFL2基因新发位点变异导致的新生儿杆状体肌病。

鸡CFL2基因3′UTR多态性与肉质性状的关联分析

以固始鸡×安卡鸡F2代资源群为研究对象,利用PCR-RFLP方法检测鸡CFL2基因3′UTR多态性,并将不同基因型与肉质性状进行相关性分析。结果表明:在鸡CFL2基因3′UTR区预测到5个microRNA靶位点。在CFL2基因3′UTR区发现G577A位点,该位点为KpnⅠ自然酶切位点,表现为GG、AA和GA 3种基因型,基因型频率分别为0.589、0.349和0.061,经χ2适合性检验,该位点在群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态。该突变位点对鸡的腿肌肌纤维密度和肌纤维直径具有显著影响(P<0.05)。结果显示,CFL2基因对鸡的腿肌肌纤维性状有一定影响,同时为该基因的标记辅助育种和进一步研究提供参考。

猪CFL2b基因在成肌细胞中的表达及对肌球蛋白重链基因表达的影响

猪CFL2b基因主要在骨骼肌中表达,对肌肉的发育和肌纤维的形成具有一定作用。为了解猪CFL2b基因与肌纤维性状的相关性,利用定向克隆和基因转染技术获得能稳定表达猪CFL2b基因的成肌细胞株,荧光显微镜观察及Western Blotting检测CFL2b基因在成肌细胞中的表达;应用实时定量PCR技术对细胞内肌球蛋白重链基因(MyHC)的表达变化进行检测。结果显示:CFL2b基因对MyHC的表达有明显影响,其中MyHC2x基因和MyHC2b基因的表达明显上调,MyHC1/slow的表达变化不明显。表明CFL2b基因与猪的肌纤维性状密切相关,推测猪CFL2b基因的高表达可能导致猪的不良肉质性状,可以考虑将CFL2b基因作为猪肉质性状的候选基因。

猪CFL2b基因部分序列的克隆及组织表达谱分析

在猪QTL定位基础上,利用比较基因组学原理,参照猪CFL2的cDNA序列,对猪CFL2基因的部分基因组DNA序列进行克隆、测序;利用RT-PCR半定量法检测CFL2基因在不同组织的表达情况.结果显示,所克隆的猪CFL2基因部分基因组DNA序列长度为2377bp,包括4个外显子和4个内含子,该基因mRNA序列与已报道的人CFL2b基因序列相似性为89%;猪CFL2基因在多种组织中均有表达,但在骨骼肌和心肌中表达丰度较高.结果表明,本研究成功测序了猪CFL2b基因部分基因组DNA序列,为进一步研究该基因与肌肉发育及生理功能的关系奠定了基础.

猪CFL2b/荧光蛋白融合基因在小鼠成肌细胞中的表达与定位

[目的]了解猪CFL2b基因在成肌细胞中的表达与定位。[方法]用RT-PCR方法扩增得到猪CFL2b基因,连接到T载体上,双酶切后通过定向克隆将其与真核表达载体pEGFP-N1的绿色荧光蛋白基因融合,构建CFL2b-荧光蛋白融合基因表达载体。然后经真核表达质粒-脂质体介导,导入C2C12细胞系。[结果]荧光显微镜观察显示:在空白载体pEGFP-N1转染的C2C12细胞中荧光布满整个细胞,而在转染阳性载体pEGFP-N1-CFL2b的C2C12细胞中荧光主要聚集在细胞质的肌动蛋白丝。表明转染的C2C12细胞系能够高效表达猪CFL2b蛋白,猪CFL2b基因表达的蛋白定位于细胞质中。[结论]该研究为CFL2b基因的功能及该基因与猪肉质性状的相关性的研究奠定了基础。