几种壳聚糖类产品的致敏试验研究

目的通过豚鼠最大剂量试验(GPMT)、小鼠局部淋巴结试验(LLNA)、人细胞系激发试验(h-CLAT)探究几种壳聚糖类产品的致敏性。方法将羧甲基壳聚糖、壳聚糖止血粉、羧甲基壳聚糖愈创膏、羧甲基壳聚糖止血纱作为试验样品,按GB/T 16886.12规定的比例浸提制备受试液,按GB/T 16886.10-2017进行GPMT、LLNA试验,按OECD442(E)进行h-CLAT试验,对样品进行致敏性检测。结果羧甲基壳聚糖、壳聚糖止血粉、羧甲基壳聚糖愈创膏、羧甲基壳聚糖止血纱的GPMT、LLNA试验结果均为阴性。h-CLAT试验中,羧甲基壳聚糖、羧甲基壳聚糖愈创膏、羧甲基壳聚糖止血纱的综合判定结果为阴性;壳聚糖止血粉100%、50%、25%浓度受试液CD54的相对荧光强度(RFI)均高于2.00,CD86的RFI均高于1.50,综合判定结果为阳性。结论采用作为皮肤致敏评价体外替代方法之一的h-CLAT评估壳聚糖止血粉的致敏反应风险有待于进一步研究。

神经肽Y免疫反应神经纤维在豚鼠肠系膜淋巴结的分布

为了探讨神经肽调节消化道免疫功能的机制，本研究应用免疫组织化学ＡＢＣ法结合葡萄糖氧化酶－ＤＡＢ－硫酸镍铵增强技术，于３０μｍ厚恒冷箱切片上观察了含ＮＰＹ神经纤维在豚鼠肠系膜淋巴结的分布。结果显示，含ＮＰＹ神经纤维呈串珠样或线状，广泛分布于淋巴结各部。在门区和髓质，阳性纤维主要分布于血管壁及其周围，髓索和髓窦壁也有一些串珠样粗纤维走行。皮质内呈线状含ＮＰＹ神经纤维多定位于皮质深层的淋巴组织和微血管壁；皮质浅层的小结间区内偶见阳性纤维分布，淋巴小结内未发现阳性纤维。髓索和皮质深层淋巴组织中走行的含ＮＰＹ神经纤维与免疫细胞关系密切。被膜和小梁结缔组织中亦有一些阳性纤维分布。本研究结果提示，肠系膜淋巴结存在含肽神经支配可能是神经肽调节消化道免疫功能的重要途径之一。

豚鼠淋巴结基质祖细胞的实验研究

豚鼠淋巴结单个核细胞体外单层培养形成CFU—F集落,其种植的细胞数与成集落数呈良好的线性关系;淋巴结基质祖细胞的Do值为2.8Gy,n值1.5;低浓度(10μg/ml)PHA对集落形成有一定的刺激效应,高浓度(40μg/ml)可抑制集落的形成;经对集落大小、所含细胞数及密度进行比较,说明CFU—F是非均质的,可能因存在不同的亚群。

SP、NKA、NKB和CGRP免疫反应纤维在豚鼠气管和支气管淋巴结内的定位

应用ABC免疫酶组织化学方法,在16只豚鼠的气管和支气管淋巴结内观察到SP、NKA、NKB和CGRP免疫反应神经纤维,4种阳性神经纤维在淋巴结内的分布基本相同。镜下可见阳性反应纤维分布于淋巴结的皮质和髓质,血管周围的区域中纤维数量较多,远离血管的区域纤维数量较少,血管壁内也见阳性纤维。阳性纤维还分布于淋巴窦周围和淋巴结被膜内。本研究证明的淋巴结内的4种肽能神经纤维,可能是这些神经肽类物质参与神经免疫调整机制的形态学依据。

抗体形成细胞发育的免疫电镜研究

用包埋前免疫电镜技术,研究以辣根过氧化物酶二次免疫后2、3、5、8和10天豚鼠腘淋巴结中抗体形成细胞的发育和分化。按照细胞的不同发育阶段和抗体阳性反应特征,可将它们分为四类细胞:(1)Ⅰ类细胞(淋巴细胞),核位于细胞中央,胞质很少,核周腔呈阳性反应,细胞质中有大量均匀分布的阳性颗粒;(2)Ⅱ类细胞(前浆细胞),核质比减低,有的核偏位,胞质中出现大量颗粒状短或棒状阳性反应物,其中有一些呈平行排列;(3)Ⅲ类细胞(前浆细胞),胞质中显示大量平行排列的阳性反应物;(4)Ⅳ类细胞(浆细胞),胞质中平行排列的阳性反应物连结成网状。根据细胞的形态以及胞质中阳性反应物从颗粒状、短棒状到平行排列的片层和连结成网状的变化,显示出从淋巴细胞经前浆细胞发育为成熟浆细胞,不断合成并累积抗体的动态过程。

免疫过程中酸性磷酸酶在豚鼠腘淋巴结中的分布

在抗体形成细胞发育的兔疫组织化学研究中,我们曾发现经辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,简称HRP)二次免疫后早期(2~3天),豚鼠腘淋巴结的皮质区和髓质区几乎同时出现抗体阳性细胞。至第6~9天,这二个区域的阳性细胞数增加达到最高峰,主要是前浆细胞和浆细胞。

小鼠局部淋巴结实验方法检测化学物致敏性

目的探讨小鼠局部淋巴结免疫化学方法作为豚鼠致敏性实验方法的替代方法。方法采用5-溴-2′-脱氧尿苷结合的小鼠局部淋巴结细胞免疫化学方法和豚鼠局部封闭涂皮试验(Buehler test)分别检测2,4-二硝基氯代苯和凡士林的致敏性。结果小鼠局部淋巴结免疫化学方法在评价化学物致敏性方面比豚鼠局部封闭涂皮试验法简单、实用,可检测的化学物浓度较低。结论小鼠局部淋巴结免疫化学方法可替代豚鼠致敏性实验方法用于评价化学物的致敏性。