rhTPO对CD_(34)^+细胞增殖及形成CFU-MK作用的研究

目的研究重组人TPO（rhTPO）单独及与rhIL-3、rhIL－6、rhSCF协同体外对巨核系的增殖效应。方法采用纯化的CD+34细胞，进行求固体巨核细胞集落培养和液体悬浮培养，研究TPO及与IL－3、IL－6、SCF协同体外对CD+34细胞增殖及向巨核系空向分化的特性，和形成CFU－MK的作用。结果rhTPO可以诱导CD+34细胞形成CFU－MK，增加巨核细胞集落数，这种作用可以被rhIL－3、rhIL－6、rhSCF增强。液体培养中，rhTPO促进CD+34变细胞分化／成熟为表达GPⅡb／Ⅱa的细胞，增加体系中CD+34。细胞，rhIL-3、rhIL－6、rhSCF可以协同TPO的作用。结论TPO作为一种促增殖因子，促进巨核系祖细胞的增殖及分化。

人巨细胞病毒对人脐血巨核系祖细胞生长的影响及作用机制研究

[目的]探讨人巨细胞病毒(HCMV)对巨核系祖细胞生长的影响及其机制。[方法]采用造血祖细胞体外半固体培 养技术,用HCMV AD169株分别感染去除T细胞和未去除T细胞的脐血单个核细胞。观察CFU-MK集落数;用原位聚合酶链 反应(IS-PCR)检测集落细胞中的HCMV DNA。[结果]2个感染组的CFU-MK集落数均减少,与灭活病毒组比较,分别为 29.5％和48.6％(P<0.05),未去除T细胞组CFU-MK集落数减少比去除T细胞组明显(P<0.05),经IS-PCR检测发现各 病毒感染组CFU-MK细胞中有HCMV DNA存在。[结论]HCMV在体外能抑制CFU-MK的分化和增殖,HCMV感染引起的血小 板减少可能与该病毒对巨核系祖细胞的直接抑制以及免疫因素有关。

几种MK－CSA活性物质对小鼠CFU－MK体外形成的影响

几种ＭＫＣＳＡ活性物质对小鼠ＣＦＵＭＫ体外形成的影响黄成龙王亦流１柳晓兰邱丽玲张卿西毛秉智（军事医学科学院放射医学研究所，北京１００８５０；１海军总医院）自从１９７５年Ｍｅｔｃａｌｆ及１９７９年Ｖａｉｎｃｈｅｎｋｅｒ等人分别建立起小鼠和人类骨髓巨...

基因重组白细胞介素3刺激胎肝巨核细胞祖细胞生长的特性

本文采用血浆凝块、甲基纤维素半固体和液体培养体系结合流式细胞仪巨核细胞DNA双荧光分析，观察了4～5个月胎肝和成人骨髓CFU－MK在体外的增殖和分化特点。结果表明，无论以基因重组白细胞介素3（Interleukin－3，rIL3）或再障狗血清（Meg－CSA）作为刺激因子，股肝CFU－MK集落均较大（大于50个细胞／集落），而成人骨髓CFU－MK集落均较小（小于50个细胞／集落）。在以rIL3（2ng／ml）为刺激因子时，胎肝巨核细胞祖细胞（CFU－MK）集落产率（36.40±16．60）高于成人骨髓（10．05±2．81）（P＜0．01）。与此相反，胎肝CFU－MK源巨核细胞DNA倍性分布以2N和4N为主，成人骨髓则以8N和4N为主，前者的平均倍性值（5．46±0．86）明显低于后者（10．13±1．30）（P＜0．01）。同样，在以Meg－CSA为刺激因子时，也获得了类似的结果，提示胎肝CFU－MK具有很强的增殖能力和较低的分化（倍体化）能力。另外，胎肝CFU－MK集落产率在rIL3浓度为0．5～2ng／ml时逐渐上升，而在2～8ng／ml则持续下降。但在相同浓度范围内，rIL3对成人骨髓CFU－MK和胎肝CFU－GM的作用均无这种双向效应。Meg－CSA（5％～25％）对股肝、成人骨髓CFU－MK和胎肝CFU－GM的作用也呈明显的剂量效应曲线。而且，胎肝CFU－MK源巨核细胞DNA倍性?

骨髓增生异常综合征各系祖细胞的体外培养观察

本文对44例MDS患者的多向祖细胞(CFU—GEMM)、红系祖细胞(BFU—E)、前巨核祖细胞(BFU—MK)、后巨核祖细胞(CFU—MK)、粒系祖细胞(CFU—GM)进行了体外培养观察。结果表明部分MDS骨髓粒系祖细胞体外生长类似白血病生长型。其它各系祖细胞集落数量减少,且明显小于正常,说明祖细胞在增殖分化等方面有明显的缺陷。

自动化单采血小板后CFU—MK的动力学

引言 自动化单采单个献血者的血小板以其纯度高、疗效好,为临床医师所青睐,需求量不断增加,但对机采血小板后献血者体内的变化研究甚少.血小板计数、血小板生成刺激素(TPO)的水平和巨核细胞集落形成细胞(CFU-MK)的分化是调节血小板再生的主要决定因素,且随其中任何一个因素的改变而变化.

PDGF-BB促粒细胞/巨核细胞生长及其作用机制的研究

目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF-BB)对体外粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)、巨核细胞集落形成单位(CFU-MK)的生成作用及其对人巨核细胞株CHRF抗凋亡作用的具体机制。方法:采用血浆凝固培养法培养小鼠和人骨髓细胞CFU-GM和CFU-MK,探讨PDGF-BB对两者CFU-GM、CFU-MK形成能力的影响。通过AnnexinV/PI双染、活性Caspase-3表达及JC-1线粒体膜势能流式细胞术检测研究PDGF-BB对人巨核细胞株CHRF的抗凋亡作用机制。结果:PDGF-BB 0-100 ng/ml能够促进小鼠/人CFU-GM和CFU-MK的增殖并呈剂量依赖性,其中50 ng/ml作用最为明显(P<0.01)。流式细胞术检测结果表明,PDGF-BB通过线粒体及Caspase-3通路对人巨核细胞株CHRF发挥抗凋亡作用(P<0.05)。结论:PDGF-BB能够促进体外小鼠和人粒-单核系及巨核系造血生成,且能通过线粒体途径和Caspase-3通路对巨核细胞发挥抗凋亡作用。

血小板生成素基因在体内的表达及对造血祖细胞增殖活性的影响

探讨了从肌肉组织植入的人血小板生成素（ＴＰＯ）基因在小鼠体内的表达规律，以及对造血祖细胞增殖活性的影响．基因在导入后的２４小时内就开始转录，先于血小板、血液ＴＰＯ浓度、及造血祖细胞的变化．所表达的ＴＰＯ在血液中的聚积可持续４周以上．巨核祖细胞，粒系祖细胞都出现２周左右的增殖增长，长于血小板计数的升高，但红系祖细胞的变化不明显．这些结果显示，基因治疗过程中血小板计数等变化源于ＴＰＯ的表达及刺激，而在此期间一些调控机制被激活，对血小板形成的平衡发挥作用．

多种重组细胞因子对人巨核祖细胞增殖的影响

为了阐明重组人类促血小板生成素（recombinanthumanthrombopoietin，rhTPO）等重组细胞因子对人巨核祖细胞增殖的影响，采用体外培养方法，观察了重组人类促血小板生成素对巨核祖细胞、粒－巨噬系祖细胞和红系祖细胞生长的影响，并观察rhTPO与IL－3、IL－6和干细胞生长因子（stemcellfactor，SCF）联合应用时对巨核祖细胞增殖的影响。结果表明，TPO能特异地、有效地刺激人巨核祖细胞的增殖。IL－3、IL－6和SCF对巨核祖细胞的增殖有不同程度的促进作用，当它们分别与TPO联合应用时，作用强度表现出叠加性.该结果显示，人巨核细胞增殖受多种造血生长因子调控，其中TPO是特异地调控人巨核祖细胞生长的一种细胞因子。

四种重组造血生长因子对小鼠巨核细胞集落的影响

小鼠体外巨核系祖细胞培养表明,重组鼠白细胞介素-3(IL-3),粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、重组人白细胞介素-6(IL-6)及红细胞生成素(EPO)均有不同程度刺激巨核系祖细胞生长的活性。其最适浓度分别为100U/ml,5ng/ml,20ng/ml与1U/ml。对巨核细胞集落刺激作用最强的是IL-3,IL-6与GM-CSF次之,EPO最弱。在种植2×10~5骨髓单个核细胞中分别获得45±3,25±2,20±3及10±2个巨核细胞集落。

ITP患者的异常免疫对骨髓巨核祖细胞的影响

运用改良的血浆凝块体外培养方法，研究２４例成人原发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）患者的骨髓在体外形成巨核细胞集落的能力。结果发现ＩＴＰ患者骨髓的巨核细胞集落生成率与正常对照无显著差异（ｐ＞０．２），其新鲜血清对自身骨髓巨核祖细胞（ＣＦＵ－ＭＫ）或异体正常骨髓ＣＦＵ－ＭＫ有不同程度的抑制作用（ｐ＜０．０１），血清经热灭活后这种抑制作用明显减弱。患者血清的抑制程度与其血清ＰＡＩｇＧ的量呈正相关。患者的血清免疫球蛋白Ｇ组份加补体对ＣＦＵ－ＭＫ生长有显著抑制作用（Ｐ＜０．０１），而完整的Ｔ淋巴细胞对ＣＦＵ－ＭＫ的生长有支持作用。

巴利昔单克隆抗体预防HLA不相合骨髓移植中移植物抗宿主病

目的研究巴利昔(商品名:舒莱)单克隆抗体体外对异基因反应T细胞和造血祖细胞的作用;探讨该抗体在预防HLA不相合骨髓移植中移植物抗宿主病(GVHD)的疗效。方法实验观察分两组。(1)巴利昔组:白血病患者72例,接受单倍型相合未去T细胞的骨髓移植,用巴利昔单克隆抗体预防GVHD;(2)对照组:2000年11月前进行上述相同骨髓移植的白血病患者15例,未用巴利昔单克隆抗体预防GVHD。用有限稀释方法检测巴利昔单抗对细胞毒介导的靶细胞前体(CTLp)的反应能力,在半固体造血祖细胞培养体系中检测巴利昔单抗对粒巨噬系祖细胞(CFUGM)、红系祖细胞(CFUE)及巨核系祖细胞(CFUMK)集落增殖的影响。结果巴利昔组72例骨髓移植后均取得造血重建,骨髓植活直接证据检测证实为完全供者造血,与对照组比较,差异无统计学意义。巴利昔组和对照组移植后急性Ⅱ～Ⅳ度GVHD发生率分别为12.5%(9例)和33.3%(5例),差异有统计学意义(P=0.045);两组的慢性广泛型GVHD发生率比较,差异无统计学意义。移植后18个月内动态观察免疫细胞重建,CD3、CD8、CD19、NK细胞及CD56细胞在12个月内可恢复至正常水平,CD4细胞在移植后18个月内恢复。随访中位数时间22个月,无病生存42例,KaplanMeier生存曲线分析,估计2年无病生存达58.3%。巴利昔组和对照组比较,无病存活和复发率差异无统计学意义。采用供者骨髓单个核细胞进行实验,显示巴利昔单抗能明显降低CTLp细胞生成,降低的数量在10～100倍,但不影响正常造血祖细胞CFUGM、BFUE和CFUMK集落的增殖。结论巴利昔单抗可选择性的限制和减少异基因反应T细胞,从而减少严重急性GVHD的发生率;白血病患者骨髓移植后造血重建未受影响,不增加复发率和感染率。

自体外周血干细胞移植后血小板恢复的预测指标

目的：寻找更确切、有效、方便的预测自体外周血干细胞移植（ＡＰＢＳＣＴ）后血小板恢复能力的指标。方法：利用巨核细胞集落形成单位（ＣＦＵＭＫ）、流式细胞术等技术检测１７例恶性血液病及实体瘤患者外周血干细胞移植物中巨核细胞前体细胞的数量。结果：①ＣＤ３４＋细胞中同时表达血小板膜糖蛋白者＜５％；②ＣＤ３４＋／ＣＤ４１ａ＋细胞的数量与ＡＰＢＳＣＴ后血小板恢复时间之间的相关性较ＣＤ３４＋细胞数量与血小板恢复时间之间的相关性好；③ＣＦＵＭＫ的数量与血小板恢复之间有较好的相关性；④ＣＤ３４＋／ＣＤ４１ａ＋细胞数量与ＣＦＵＭＫ数量之间具有较好的相关性。结论：移植物中ＣＤ３４＋／ＣＤ４１ａ＋细胞数量及ＣＦＵＭＫ数量均可作为ＡＰＢＳＣＴ后血小板恢复的预测指标，但以前者更方便。

褪黑素对照射后小鼠血小板造血的保护作用

目的探讨褪黑素(melatonin,Mel)对照射后小鼠血小板和巨核细胞造血功能的影响。方法18只雌性BALB/c小白鼠随机分为3组正常组(N组),对照组(C组)和Mel组(M组),每组6只。其中N组不接受照射和药物注射,C组和M组小鼠予4Gy的60Coγ射线全身照射,照射后M组每天腹腔注射Mel10mg.kg-1.d-1,连续注射21d,C组注射生理盐水。于照射前及照射后的第7、14和21天采尾血,观察白细胞和血小板计数变化,在第21天采血后取骨髓行巨核细胞集落形成单位(CFU-MK)和骨髓基质细胞集落形成单位(CFU-F)培养。另外观察正常小鼠体外骨髓CFU-MK在不同浓度的Mel(0～500nmol/L)作用下的生长情况。结果M组血小板计数回升明显高于C组(P<0.05),M组的CFU-MK和CFU-F集落生长明显优于C组(P<0.001)。体外小鼠骨髓CFU-MK的生长对Mel有浓度依赖性,Mel浓度为200nmol/L时,CFU-MK集落数目最多,且集落大小和MK成熟度较对照均有明显提高。结论Mel对照射后小鼠骨髓的血小板造血功能有保护作用,Mel可促进骨髓基质细胞和MK增殖分化,从而提升外周血血小板数量。