抗菌肽CGA-N12通过lncRNA CASC2/AQP-1改善念珠菌感染引起的肺泡上皮细胞凋亡的研究

通过构建小鼠念球菌感染肺损伤模型探讨抗菌肽CGA-N12通过lncRNA CASC2/AQP-1改善念珠菌感染引起的肺泡上皮细胞凋亡机制。方法 通过构建小鼠念球菌感染肺损伤模型,实验结束后,取肺组织,检测肺W/d重量比、肺MPO活性等,qRT-PCR检测lncRNA CASC2等分子的表达;western blot检测AQP-1、细胞凋亡相关蛋白表达。结果 在C. albicans诱导的ALI小鼠和肺上皮细胞中,CASC2的表达降低,此外,CASC2和AQP1是相应蛋白表达的靶标,CASC2可以通过调控间接调控AQP1的表达。此外,CASC2和AQP1通过调节靶标来控制上皮细胞的凋亡。结论 通过本次研究验证了lncRNA CASC2与AQP-1靶向结合调控机制。并揭示了抗菌肽CGA-N12通过下调lncRNA CASC2靶向调控AQP-1改善念珠菌感染引起的肺泡上皮细胞凋亡的作用机制。

抗菌肽CGA-N12对腹腔注射热带念珠菌小鼠的治疗作用

CGA-N12为嗜铬粒蛋白A的N端65-76位氨基酸组成的衍生肽,前期研究表明,CGA-N12具有特异性抗念珠菌活性,尤其对临床病原真菌热带念珠菌拮抗活性最强。为研究CGA-N12体内抗真菌活性,建立了热带念珠菌深部感染小鼠模型,分别用每日15mg/kg和30mg/kg的CGA-N12对小鼠进行治疗,并设每日15mg/kg伊曲康唑治疗对照组和感染对照组。通过测定治疗后小鼠存活率、体重变化、肾脏载菌量,以及组织器官病理变化,判断CGA-N12对小鼠的治疗效果。结果表明,每日15 mg/kg和30mg/kg的CGA-N12治疗14d后与感染对照组相比,小鼠肾脏载菌量分别降低97.6%和99.1%,小鼠存活率分别提高40%和45%,体重分别增加1.3g和5.9g,免疫器官指数均显著增加,而与治疗对照组差异不显著。病理切片观察,每日15mg/kg和30mg/kg的CGA-N12对组织器官的病变均有明显改善,并且没有出现伊曲康唑治疗后产生的肝小叶血管内皮细胞增生和肾出血现象。结果表明,CGA-N12对热带念珠菌深部感染小鼠具有治疗作用。

抗菌肽CGA-N12诱导的活性氧打开热带念珠菌线粒体通透性转换孔

嗜铬粒蛋白A-N12(chromogranin A-N12,CGA-N12)是衍生自人嗜铬粒蛋白A的N-端抗念珠菌肽,由第65至76位氨基酸组成。前期研究表明,CGA-N12能够降低热带念珠菌线粒体膜电位,诱导线粒体依赖性细胞凋亡。有文献报道,线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)蛋白质复合物上的二硫键和自由巯基的氧化还原状态对mPTP开关具有调节作用。本文研究了CGA-N12对热带念珠菌细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)聚集、DTT还原作用下CGA-N12对线粒体膜去极化、线粒体肿胀、Ca^2+泄露等的影响,以期阐明CGA-N12诱导mPTP打开的分子机制。结果发现,CGA-N12使细胞内活性氧聚集,线粒体膜电位降低,线粒体肿胀,但DTT可通过还原作用抑制CGA-N12诱导线粒体产生的上述现象。结果表明,CGA-N12通过诱导ROS维持mPTP蛋白质复合物上的二硫键和巯基的氧化状态打开mPTP,提高线粒体膜通透性,使线粒体膜电位耗散。该研究结果为阐明CGA-N12对热带念珠菌的凋亡机制提供了理论依据。

抗菌肽CGA-N12对兔播散性白念珠菌感染的治疗效果及机制研究

通过制备多肽CGA-N12抗白念珠菌的体外实验及抗兔播散性白念珠菌感染模型的体内实验探讨CGA-N12对兔播散性白色念珠菌感染的抗菌活性及相关机制。方法 体外细胞试验检测CGA-N12在体外抗白念珠菌的最低抑菌浓度、最低杀菌浓度。体内动物试验采用新西兰大白兔播散性白念珠菌感染模型,计算治愈率、死亡率绘制生存曲线及相关免疫细胞、细胞因子检测。结果 通过体外细胞实验阐明CGA-N12具有抗菌活性及抗菌强;通过动物实验阐明CGA-N12与传统抗生素伊曲康唑比较具有相同的抗菌活性,但没有肝肾功能损伤,并通过相关分子及细胞因子等检测探索CGA-N12参与免疫功能的机制。结论 从体外到体内,分子-细胞-动物层次阐明CGA-N12对兔播散性白色念珠菌感染的抗菌活性及相关机制。为播散性白色念珠菌感染的治疗提供新靶点。