脆性X综合征FMR—1基因CGG重复数变异的研究

采用PCR凝胶电泳法测定126条正常人群X染色体及来源于脆性X综合征家族的18条染色体的P(CGG)n重复数目。结果:①正常人群中,CGG重复数目最多为28,变动范围21～41(CGG)。FMR-1基因可稳定扩增,且后代受损程度不一。②脆性X家族中,母亲均为正常传递携带者,她们的前突变在卵子减数分裂过程中转变为全突变,从而导致了患病后代。脆性X综合征最罕见的遗传特点是存在正常传递男子,而且他的前突变可通过其女儿传至其孙子及曾孙。因此研究正常男、女性传递者具有临床价值。本方法简单、易行,可用于高危群体的筛查,同时也为遗传咨询和优生优育产前诊断提供依据。

新生儿脆性X综合征筛查对本地区CGG重复数情况分析

目的对新生儿进行脆性X综合征的筛查,统计FMR1基因CGG不同重复数的分布情况。方法采集共992名新生儿的脐带血,提取DNA用于脆性X综合征检测。采用CGG重复区域全长PCR扩增及重复引物PCR的方法扩增样本,并通过毛细管电泳平台进行分型检测。综合两种体系的结果计算样本的CGG重复数。结果992名新生儿脆性X综合征筛查筛查中一次成功检出986例,包括野生型984例、中间型1例、全突变1例。野生型中最常见的CGG重复数为29与30,另外发现了较高频率的36重复。不同重复数的分布在性别间差异无统计学意义(P=0.415)。结论通过全长扩增加重复引物扩增的方法可以有效、准确检测出FMR1基因CGG重复数,结合两种方法的结果计算样本的CGG重复数,提高了检测的灵敏度并实现了CGG重复数的准确判读。此检测体系操作较为简便,检测准确,适合用于新生儿脆性X综合征筛查。

FMR1基因CGG重复数在复发性流产人群中的分布及卵巢功能相关性研究

目的探索新疆乌鲁木齐复发性流产患者脆性X智力低下基因1基因(CGG)n重复次数的分布状态,以及与卵巢功能的相关性。方法收集2017年6月至2019年1月就诊于新疆乌鲁木齐市新疆医科大学第一附属医院妇科,生殖医学中心的复发性流产患者,均在28w前有连续2次或2次以上的妊娠终止。抽血提取基因组DNA、应用AmplideXTMFMR1PCR专利技术进行PCR扩增以及毛细管电泳技术对血液标本进行FMR1基因(CGG)n重复基因进行检测,并对数据进行统计分析。结果对新疆乌鲁木齐48名复发性流产患者进行了FMR1(CGG)n的检测,在所有检测样本中,共检测到13种等位基因,CGG重复序列范围为20-54,98%的样本两个等位FMR1基因的(CGG)n为野生型,2%为突变杂合型。其中29(33.3%)和30(25.1%)最常见,其次为32,31。在整个检测队列中,我们发现了1例灰色区域,CGG拷贝数为54,未发现前突变样本和全突变样本。FMRl(CGG)n重复序列和基因型别与抗苗勒氏激素进行组间比较,差异王(P>0.05)。结论FMRl(CGG)n重复序列和基因型别与卵巢功能无相关性。新疆乌鲁木齐复发性流产患者FMR1(CGG)n重复序列与基因型别分布,与既往国内研究相似,但变异范围存在升高趋势,且呈高度集中分布。FMR1基因灰色区域等位基因的发病率明显高于亚洲及国内发病率,预测FMR1基因的(CGG)n可能与复发性流产有关,但仍需大样本数据的进一步证实。

三核苷酸重复引物PCR和甲基化特异性多重连接探针扩增技术在脆性X综合征产前诊断中的应用

目的探讨脆性X综合征(FXS)产前基因诊断的方法。方法采用三核苷酸重复引物PCR法(TP-PCR)及甲基化特异性多重连接探针扩增技术(MS-MLPA)检测2个FXS家系及30例正常对照胎儿样本FMR1基因CGG重复数、AGG排布及FMR 1基因Cp G岛甲基化状态。结果正常对照FMR1基因(CGG)n重复数介于23~40之间,频数最大的重复数为29,AGG排布式以9A9A9最为常见。2个FXS家系中前突变等位基因向子代遗传过程中均发生了CGG扩展。正常对照及前突变携带者FMR1基因Cp G岛均为低甲基化状态,全突变患者Cp G岛为高甲基化状态。结论 TP-PCR和MS-PCR联合应用能够检出胎儿FMR1基因CGG重复数和Cp G岛甲基化状态,从而判断胎儿是否为脆性X综合征患儿,为优生干预提供可靠的依据。