CHD5基因启动子甲基化调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进急性髓系白血病发病的研究

目的:探讨急性髓系白血病患者(AML)骨髓中CHD5基因甲基启动子甲基化状态及其调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进AML发病的机制。方法:采用MSP检测AML组及对照组CHD5基因甲基化状态,应用实时定量RT-PCR和Westernblot检测CHD5、p19Arf、p53及p21Cip1的表达水平。结果:AML患者骨髓中CHD5基因甲基化率(39.06%)较对照组(6.67%)明显增高(P<0.05);CHD5基因甲基化与AML不同染色体核型相关(P=0.009),但与性别、年龄及临床分型无显著相关(P>0.05);AML患者CHD5相对表达水平明显低于对照组(P<0.05);存在CHD5甲基化AML患者p19Arf、p53及p21Cip1基因和蛋白表达水平较对照组降低。结论:AML患者CHD5基因启动子的高甲基化可导致CHD5、p19Arf、p53和p21Cip1表达水平下降,从而可能通过调控p19Arf/p53/p21Cip1途径减弱对白血病细胞增殖抑制作用,促进AML的发生。

一种潜在的抑癌基因—CHD5参与肝癌的发生和发展

目的研究CHD5在三种不同细胞株SMMC7721、HepG2及L02中的表达及在人类肝癌(HCC)和癌旁组织中的表达,并探讨CHD5与临床病理特征之间的关系。方法用逆转录酶聚合链反应(RT-PCR)检测30例肝癌手术标本及其相应的癌旁组织中CHD5 mRNA的表达缺失率,同时检测其在三种不同细胞株中的表达情况。结果CHD5 mRNA在SMMC7721中表达缺失,在HepG2及L02中表达的吸光度值分别是0.364±0.026、0.127±0.015(P<0.05)。CHD5 mRNA在肝癌组织、癌旁组织中的缺失率分别为53.3%、13.3%,差异有统计学意义(2χ<0.01)。在肝癌组织中CHD5 mRNA的缺失与肝癌的细胞分化程度、肿瘤直径有关(2χ<0.05),而与性别、年龄和有无肝外转移灶等无关(2χ>0.05)。结论CHD5在人类肝癌中表达缺失率高,并与肝癌分化程度、肿瘤大小有关,可能是参与肝癌发生和发展的重要抑癌基因。

5-氮杂胞苷对结肠癌细胞CHD5基因表达及细胞增殖活性的影响

目的研究甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-氮杂胞苷,AZA)对人肿瘤相关基因CHD5(染色质解旋酶DNA结合蛋白5)在结肠癌细胞中的基因转录的诱导作用以及其对细胞增殖的影响。方法 5μmol/L 5-氮杂胞苷分别作用于Lovo和SW480细胞,连续作用72 h后,用荧光定量PCR(qPCR)检测两种结肠癌细胞系中CHD5mRNA的表达,重亚硫酸盐测序(BSP)法分析启动子区的甲基化状况,MTT法分析5-氮杂胞苷对Lovo和SW480细胞增殖的影响。结果 5μmol/L 5-氮杂胞苷处理Lovo和SW480细胞72 h后,Lovo和SW480细胞中CHD5基因的发生了去甲基化,其mRNA重新表达,细胞生长受到抑制。结论 5-氮杂胞苷能够反转CHD5基因的甲基化状态,调控CHD5 mRNA表达,并能有效地抑制结肠癌细胞的增殖。

大肠癌CHD5基因的表达及其与临床病理、预后的关系

目的探讨CHD5基因在大肠癌组织和相应正常大肠组织标本中的表达情况;CHD5表达与大肠癌患者临床病理参数和大肠癌生存率和无瘤生存率的关系。方法应用SYBR G reen I实时定量RT-PCR技术检测38例手术切除的大肠癌及相应癌外正常大肠组织标本中CHD5 mRNA的表达,研究CHD5基因检测结果与临床病理参数和预后的关系。结果CHD5 mRNA表达阳性率在癌组织和癌外组织间无差异(100%vs100%,p>0.05)。大肠癌组织CHD5 mRNA的表达水平显著低于癌外正常组织(p<0.05)。大肠癌浸润越深,癌组织CHD5 mRNA的表达量越少。随访病例中,480天的积累生存率为(92.03±4.41)%,无瘤生存率为(77.80±6.97)%。以中位数为界,将癌组织CHD5分为高、低表达组,CHD5 mRNA高、低表达组间无瘤生存率差异无统计学意义(88.89%vs66.67%,p>0.05)。结论CHD5基因与大肠癌有关,其表达水平可能成为判断大肠癌恶性潜能的指标。大肠癌组织CHD5 mRNA的表达水平对患者生存期和无瘤生存期无显著影响。

CHD5基因与雌激素受体阴性乳腺癌相关因子的研究

目的比较正常乳腺细胞HBL-100与雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中CHD5表达水平。初步探讨CHD5基因与雌激素受体阴性乳腺癌发生发展的相互关系及分子机制。方法应用RT-PCR法检测CHD5基因在HBL-100细胞和MDA-MB-231细胞中含量的差异;设计合成靶向CHD5的小干扰序列,构建RNA干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-CHD5,抑制CHD5基因的表达,并检测乳腺癌相关基因HER-2的表达情况。结果CHD5基因在HBL-100中高表达,在MDA-MB-231中低表达。酶切鉴定、DNA测序证实表达质粒构建成功,无碱基突变。重组载体能干扰HBL-100细胞CHD5基因的表达。干扰后,HBL-100细胞中CHD5表达被抑制,HER-2表达升高,呈负相关性。结论 CHD5的缺失或低表达可能与雌激素受体阴性乳腺癌的发生发展有关,为CHD5基因可能成为雌激素受体阴性乳腺癌治疗的新靶点提供理论依据。

表没食子儿茶素没食子酸酯促进急性髓系白血病细胞凋亡的机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导CHD5基因去甲基化促进KG-1、THP-1细胞凋亡的相关机制。方法设实验组及正常对照组,实验组:不同浓度(25、50、75、100、150μg/mL)EGCG处理作用于KG-1、THP-1细胞,正常对照组:不加EGCG处理。MSP法检测KG-1、THP-1细胞CHD5基因甲基化;MTT法检测作用48 h后细胞增殖;流式细胞术检测作用48 h后细胞周期和细胞凋亡状况;RT-qPCR、Western blot检测DNMT1、CHD5、p19^Arf、p53、p21^Cip1基因和蛋白表达。结果EGCG呈现剂量依赖性逆转了KG-1、THP-1细胞CHD5基因高甲基化;EGCG以剂量依赖性的方式抑制KG-1、THP-1细胞增殖(P<0.05);EGCG诱导细胞周期停滞于G1期,促进细胞凋亡;EGCG以剂量依赖性的方式下调DNMT1的mRNA和蛋白表达,上调CHD5、p19^Arf、p53、p21^Cip1的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论EGCG可通过下调DNMT1降低KG-1、THP-1细胞CHD5基因高甲基化,恢复CHD5基因表达,从而上调p19^Arf、p53、p21^Cip1表达诱发细胞凋亡。

染色质解旋酶DNA结合蛋白与肿瘤关系的研究进展

染色质解旋酶DNA结合蛋白5(CHD5)属于染色质重塑酶,其既能重塑染色质促进基因转录,又能正向调控p53/p19arf控制细胞增殖、凋亡和衰老。目前,已经在神经母细胞瘤、胶质瘤、乳腺癌、肺癌等多种肿瘤中发现CHD5的缺失并发现其低表达与肿瘤的发生、发展、预后情况有关。在多种肿瘤中,CHD5基因出现单链或双链缺失,以及高甲基化现象,导致其表达下调。可见,CHD5通过遗传学和表观遗传学机制共同控制肿瘤进展,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。

CHD5基因RNAi慢病毒载体的构建及其对结直肠癌细胞生物学功能的影响

目的:研究人类肿瘤相关基因CHD5基因miR-shRNA慢病毒对结直肠癌Lovo细胞的影响。方法:利用软件设计对CHD5基因干扰有效的序列,合成靶序列,退火形成双链DNA,酶切后与载体相连接。将重组慢病毒载体pPRIME-TET-GFP-CHD5与慢病毒包装质粒pCMV-VSV-G,pRSV-Rev,pMDLg-pRRE共转染293FT细胞,将包装重组慢病毒感染人类结直肠癌Lovo细胞。通过荧光定量PCR和Western blot验证CHD5基因在细胞中的表达情况,应用MTT检测CHD5低表达对Lovo细胞增殖的影响。结果:成功构建pPRIME-TET-GFP-CHD5重组质粒,经酶切及序列测定正确,包装的病毒滴度为3.1×106TU/ml。用制备的病毒上清感染Lovo细胞后,荧光定量PCR和Western blot分析结果显示该慢病毒可分别在转录和蛋白质水平上抑制Lovo细胞CHD5基因的表达,并使得Lovo细胞增殖失控。结论:成功构建CHD5慢病毒表达载体,表达的慢病毒可有效的感染Lovo细胞,提高Lovo细胞的增殖能力。

表观遗传学药物影响乳腺癌细胞系抑癌基因BRCA1及CHD5表达的研究

目的明确表观遗传学药物对乳腺癌细胞系抑癌基因BRCA1及CHD5表达的作用,探讨此类药物在乳腺癌临床治疗中的合理应用。方法采用去甲基化制剂5-AZA和组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA分别作用于乳腺癌细胞系T47D、MCF-7及乳腺正常上皮细胞HBL-100,5-AZA终浓度分别为0、0.5、1.0、2.5、5.0和10.0μmol/L,TSA终浓度分别为0、0.25、0.5、0.75、1.0和1.5μmol/L。荧光定量RT-PCR检测各浓度5-AZA作用12、24、48及72 h,各浓度TSA作用6、12、24、48及72 h BRCA1和CHD5的表达水平,并行甲基化特异PCR(MSP)检测两基因的甲基化状态。结果 2.5μmol/L AZA和0.5μmol/L TSA作用可提高乳腺癌细胞系BRCA1及CHD5的表达,而10μmol/L AZA和1.0、1.5μmol/L TSA作用反致表达降低,且对乳腺正常上皮细胞呈毒性作用。MSP未能发现AZA和TSA对MCF-7细胞两抑癌基因及T47D细胞BRCA1甲基化状态的影响,而两种药物均可逆转T47D细胞CHD5的甲基化状态。结论表观遗传学药物对乳腺癌细胞抑癌基因表达的影响具有给药剂量及时间限制性,本研究可为此类药物在乳腺癌治疗中的科学应用提供实验依据。

染色质解旋酶DNA结合蛋白5、细胞角蛋白20在胃癌中表达及临床意义

目的探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白5(CHD5)和细胞角蛋白20(CK20)在胃癌组织中的表达情况以及其临床意义。方法选取解放军202医院自2013年6月至2016年6月经临床确诊为胃癌并经手术治疗的56例患者病理蜡块标本为研究对象。采用免疫组化方法(IHC-P)检测胃癌及其对应的癌旁组织标本中CHD5和CK20的表达情况。结果 CHD5基因在胃癌及其相应的癌旁组织中的阳性表达率分别为12.5%(7/56)和87.0%(49/56),差异有统计学意义(P<0.05);CK20基因在胃癌及其相应的癌旁组织中的阳性表达率分别为71.4%(40/56)和0,差异有统计学意义(P<0.05)。CHD5与CK20基因在胃癌组织中的表达呈负相关。CHD5和CK20基因的表达与胃癌组织标本的浸润深度、分化程度、淋巴结受累情况、远处转移以及TNM分期有关(P<0.05),而与患者的年龄、性别以及肿瘤的大小无关(P>0.05)。结论 CHD5基因在胃癌组织的的阳性表达明显低于其在相应的癌旁正常组织;CK20基因在胃癌癌旁正常组织中无表达,在胃癌组织中高表达,两种肿瘤标志物同时检测可能为胃癌的治疗提供新的基因靶点。