CHO细胞高效表达载体的优化

目的:研究分析中国仓鼠EF1-α基因的转录调控序列,以构建新型高效表达载体。方法:利用常规分子生物学技术,构建了一系列基于CHEF1-α基因的非翻译区调控序列元件的新型真核表达载体。以组织型纤溶酶原激活剂突变体(k2tPA)作为报告基因,利用本室已建立的CHO-dhfr--Z+定点整合表达系统比较载体表达外源基因的能力,挑选表达量高的载体。进一步添加翻译增强子(H213及V163)序列,再进行评价。结果:CHEF1-α5′UTR及启动子+3′UTR 1.65 kb、CHEF1-α5′UTR及启动子+3′UTR 2.7 kb这2种组合均可有效提高目的基因tPA的表达,表达效率与对照载体相比分别提高了65.9%和54.5%。在添加翻译增强子V163后,载体pMCEdEF53Ⅲ-163 frt-k2 tPA的表达效率为对照载体的2.65倍。结论:该载体系统在重组蛋白药物的研发方面具有良好的应用前景。