腺病毒介导GRIM19对恶性胶质瘤CHG-5细胞增殖及分化的影响

目的观察增强外源性GRIM19(genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19)基因表达对恶性胶质瘤CHG-5细胞生物学特性的影响,初步探讨其机制。方法利用已成功构建的Ad-GRIM19腺病毒感染CHG-5细胞,通过形态学、细胞生长曲线、软琼脂克隆形成等观察增强GRIM19基因表达后CHG-5细胞形态、增殖和体外成瘤能力的变化,台盼蓝染色法检测细胞活力,Real-timePCR及Western blot检测STAT3与PCNA基因表达。结果Ad-GRIM19在体外感染CHG-5细胞后,明显改变CHG-5细胞生长形态,细胞增殖及体外成瘤减低,STAT3、PCNA基因表达下调。结论GRIM19过表达可显著抑制CHG-5细胞恶性表型,提示GRIM19基因在调控胶质瘤细胞分化程度及恶性生物学行为方面具有重要作用。

circTRIM33-12调控miR-191/DAB2轴对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化的影响

目的探讨circTRIM33-12通过miR-191/DAB2轴对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法RT-qPCR法检测circTRIM33-12、miR-191和DAB2在脑胶质瘤细胞CHG-5和人正常脑胶质上皮细胞HEB中的表达。将培养的CHG-5细胞进行分组:siRNA NC组、circTRIM33-12 siRNA组、DAB2 siRNA组;mimics NC组、miR-191 mimics组;circ‐TRIM33-12 WT+mimics NC组、circTRIM33-12 WT+miR-191 mimics组、circTRIM33-12 MUT+mimics NC组、circTRIM33-12 MUT+miR-191 mimics组;inhibitor NC组、miR-191 inhibitor组;pcDNA+mimics NC组、pcDNA-TRIM33-12+mimics NC组、pcDNA+miR-191 mimics组、pcDNA-TRIM33-12+miR-191 mimics组;DAB2 WT+mimics NC组、DAB2 WT+miR-191 mimics组、DAB2 MUT+mimics NC组、DAB2 MUT+miR-191 mimics组。CCK-8实验检测circTRIM33-12、miR-191和DAB2的表达对CHG-5细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测circTRIM33-12、miR-191和DAB2的表达对CHG-5细胞凋亡的影响;Western blot检测circTRIM33-12、miR-191和DAB2的表达对CHG-5细胞EMT的影响。TargetScan数据库分析miR-191与DAB2、circTRIM33-12的关系,双荧光素酶报告基因实验验证其关系。RT-qPCR法检测circTRIM33-12通过miR-191对DAB2表达的影响。结果与HEB细胞相比,CHG-5细胞中circTRIM33-12的表达下调(P<0.01),miR-191表达上调(P<0.01),DAB2表达下调(P<0.01)。与siRNA NC组相比,circTRIM33-12 siRNA组和DAB2 siRNA组CHG-5细胞增殖活力、N-cadherin表达明显升高(P<0.01),细胞凋亡率、E-cadherin表达降低(P<0.01)。circTRIM33-12靶向miR-191,miR-191靶向DAB2。与inhibitor NC组相比,miR-191 inhibitor组CHG-5细胞增殖活力、N-cadherin表达明显降低(P<0.01),细胞凋亡率E-cadherin表达升高(P<0.01)。circTRIM33-12过表达通过miR-191抑制CHG-5细胞增殖与EMT。结论circTRIM33-12可能通过miR-191/DAB2轴调控脑胶质瘤细胞的增殖、凋亡与EMT。

CD82/KAI1在神经胶质瘤细胞株中的表达及对细胞迁移能力的影响

目的研究CD82/KAI1在胶质瘤CHG-5及U251细胞株的表达及意义。方法 RT-PCR、免疫细胞化学、免疫荧光检测CHG-5及U251细胞中CD82/KAI1的表达;分别设立1:100、1:200CD82/KAI1抗体干预组和空白对照组,通过划痕实验对CD82/KAI1对细胞迁移能力的影响进行分析。结果①U251细胞中CD82/KAI1的mRNA表达高于CHG-5细胞(P<0.01);U251细胞中CD82/KAI1的蛋白水平表达高于CHG-5细胞(P<0.01)。②CD82/KAI1抗体干预组迁移细胞数量均显著高于对照组(P<0.05),且迁移细胞数量随抗体浓度升高而增加(P<0.05)。结论 CD82/KAI1在恶性胶质瘤细胞株中表达,且在U251细胞中表达较CHG-5细胞高。CD82/KAI1可抑制胶质瘤U251细胞的迁移。

节律基因Per2对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨节律基因Per2对胶质瘤细胞的影响及其作用机制。方法将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染CHG-5细胞,用G418筛选出Per2稳定表达细胞株;分别用MTT法、流式细胞仪、RT-PCR技术,检测CHG-5细胞增殖、细胞周期和凋亡,以及该细胞株中增殖、凋亡相关基因p53和c-myc表达。结果筛选到稳定表达Per2基因的细胞株CHG-5/Per2细胞,Per2有抑制肿瘤细胞增殖能力;与对照组(pcDNA 3.1-CHG-5)和未处理组(CHG-5)比较,转染组CHG-5/Per2细胞在G1期阻滞,细胞凋亡明显增加(P均<0.05);Per2可明显上调p53基因表达,抑制c-myc基因表达。结论节律基因Per2可促进胶质瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖,是胶质瘤中的肿瘤抑制因子。